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安徽医科大学临床药理研究所教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室: 作品数：19 被引量：54H指数：4; 相关作者：李伟更多>>; 相关机构：中国科学院上海微系统与信息技术研究所更多>>; 发文基金：安徽省自然科学基金国家自然科学基金南京军区医学科学技术研究计划课题更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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中国科学院上海微系统与信息技术...

弓形虫腺苷激酶基因的克隆、表达及多抗血清的制备被引量：3: 2008年; 目的克隆弓形虫RH株腺苷激酶(AK)基因,构建原核表达载体pET28a/AK,表达AK重组蛋白,利用此重组蛋白免疫新西兰白兔制备多抗血清。方法收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA。设计合成的引物并引入BamHI和XhoI酶切位点,应用RT-PCR扩增弓形虫AK基因片段,目的基因插入克隆载体pGEM-T,提取重组质粒,BamHI和XhoI双酶切获得目的基因,插入原核表达质粒pET28a中,重组子双酶切、PCR和测序鉴定,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)并以IPTG诱导表达。亲和层析法纯化重组蛋白抗原,SDS-PAGE和Western blotting验证表达量和免疫活性,免疫新西兰白兔,收集多抗血清,ELISA测定多抗滴度,Western blotting鉴定免疫活性。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出1 092bp的AK目标基因片段,并构建原核表达载体,诱导含pET28a/AK的宿主菌获得了高浓度、与预期分子量大小相符的表达产物,经Ni2+亲和层析法纯化获得了高纯度的rAK蛋白,Western blotting显示rAK能够被TORCH试剂盒中的Tox-IgG阳性控制血清识别,获得了纯化的重组蛋白。rAK蛋白免疫新西兰白兔,获得滴度为1∶106多价抗血清。结论成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了AK基因,构建了pET28a/AK重组质粒,并获得了高效表达,免疫新西兰白兔获得了高效价多克隆抗体,为弓形虫iRNA及弓形虫病的免疫诊断奠定了基础。; 李霞余莉罗庆礼乔增培沈继龙; 关键词：弓形虫腺苷激酶基因克隆

血吸虫感染对超敏性疾病与自身免疫性疾病的调控作用被引量：1: 2007年; 近年来，与发展中国家相比，超敏反应性疾病与自身免疫性疾病的发病率在发达国家较高，并有上升趋势。随着卫生假说（hygiene hypothesis）的提出，许多学者进行了相关研究来试图解释这个假说。一些学者在研究血吸虫感染与超敏反应性疾病及自身免疫性疾病的关系时发现了相关机制，并促使了对该假说的进一步研究。; 余轶婧沈继龙; 关键词：自身免疫性疾病血吸虫感染超敏反应性疾病超敏性卫生假说

酒精性脂肪肝大鼠肝组织骨桥蛋白表达的变化: 2009年; 目的探讨乙醇联合高脂饮食诱导脂肪肝大鼠肝组织骨桥蛋白(OPN)表达的变化。方法采用高脂饮食联合乙醇灌胃制备大鼠脂肪肝模型。在第6周末分别取血和肝组织,常规检测血生化指标和采用Western blot法检测大鼠肝组织骨桥蛋白表达的改变。结果乙醇联合高脂饮食条件下大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平升高(P<0.05),HDL-C降低(P<0.05);油红O染色结果显示乙醇联合高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变明显;模型组大鼠肝组织OPN蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论骨桥蛋白表达增强在大鼠乙醇性脂肪肝的发病过程中起一定的作用。; 江志奎胡超杰刘超何苇朱华庆周青汪渊; 关键词：酒精性脂肪肝骨桥蛋白

MELAS和MERRF综合征相关mtDNA突变位点检测集成芯片的建立被引量：2: 2008年; 文中建立了一种新型的寡核苷酸芯片,用于线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(Mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like episodes,MELAS)和肌阵挛性癫痫伴发不规整红纤维(Myoclonic epilepsy with ragged red fibers,MERRF)线粒体DNA所有已知突变位点的集成检测。将31对allele位点特异性的寡核苷酸探针包被在醛基修饰的载玻片表面,以多重不对称PCR方法制备Cy5荧光标记靶基因。利用此芯片对5例MELAS患者、5例MERRF患者及20例健康对照进行筛查,结果发现,MELAS患者均为MT-T1基因A3243G突变;在MERRF患者组,MT-TK基因A8344G突变4例,T8356C突变1例;健康对照组均未发现31种相关mtDNA突变。芯片检测与DNA测序结果完全一致。结果表明,这种寡核苷酸芯片可以对MELAS和MERRF综合征已知突变位点进行同步快速检测,具有较高的灵敏度和特异性。这一模式的基因芯片经过适当改装后也可用于其他人类线粒体疾病的基因诊断。; 陈刚李伟杜卫东曹慧敏汤华阳唐先发孙中武赵辉金庆辉赵建龙张学军; 关键词：寡核苷酸芯片线粒体DNA 突变 MELAS综合征

阿伐他汀对高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠肝脏骨桥蛋白表达的影响被引量：5: 2008年; 目的探讨阿伐他汀对高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠肝脏骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法18只4周龄ApoE基因敲除小鼠,随机分为正常组、高胆固醇组、高胆固醇+阿伐他汀组。高胆固醇+阿伐他汀组给予阿伐他汀5mg/(kg·d),12周后获取血和肝脏。分析血清胆固醇和低密度脂蛋白浓度。肝脏组织切片用于HE染色以观察肝脏组织学病变;应用免疫组化PV法检测肝脏组织中OPN的表达;从冰冻肝脏组织中提取蛋白,用Western blot方法检测OPN变化。结果阿伐他汀有显著降血清胆固醇和抑制肝脏的脂肪病变的作用;免疫组织化学和Western blot检测结果显示,高胆固醇+阿伐他汀组OPN表达比高胆固醇组显著降低(P<0.05)。结论阿伐他汀可降低高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠血清胆固醇浓度,抑制肝脂肪变性,下调OPN的表达。; 刘超江志奎程筱雯肖林林朱华庆左莉张素梅胡若磊陈孝宇周青汪渊; 关键词：高胆固醇血症

肌球蛋白重链Ⅱ和α-平滑肌肌动蛋白在成年犬咽-食管肌层的表达被引量：2: 2010年; 目的：研究健康成年毕克犬咽和食管肌层肌球蛋白重链Ⅱ（MHC-Ⅱ）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达及其空间分布.方法：采用免疫组织化学SP法对6例健康成年毕克犬咽-食管肌层MHC-Ⅱ、α-SMA的表达进行观察.结果：MHC-Ⅱ在咽部和食管上端至近贲门部肌层均有表达;α-SMA在食管中段下份内肌层最内侧开始有少量表达,至近贲门部食管肌层其表达逐渐增强,由内肌层最内侧扩展至外肌层.结论：与人类不同,成年毕克犬咽和食管上端至近贲门部肌层均有MHC-Ⅱ表达,其表达强度由上而下呈渐进性减弱;成年毕克犬咽和食管肌层α-SMA主要表达在食管中段下份和食管下段,其表达强度自食管中段下份至近贲门部呈渐进性加强.; 周家梅涂丽莉王琴朱秀玲刘业海沈玉先徐胜春; 关键词：Α-平滑肌肌动蛋白基因表达食管

Mμ阿片受体基因(OPRM1)A118G多态性可能是散发原发性帕金森病一个潜在的易感位点被引量：3: 2010年; 目的探讨Mμ阿片受体基因（OPRM1）基因A118G多态性对散发原发性帕金森病（parkinson＇s disease，PD）发病的潜在影响。方法利用Pyrosequencing技术对114例PD患者和133例健康对照进行OPRM1 A118G突变位点（rs1799971）分析。结果114例PD患者中62例为OPRM1 118A野生型（A／A，54．4％），43例为杂合型突变（A／G，37．7％），9例为纯合型突变（G／G，7．9％）。133例对照中OPRM1 118A野生型为90例（67．7％），A118G杂合型为39例（29．3％），118G纯合型为4例（3．0％），两组差异无统计学意义（Х^2=5．849，P=0．054）。比较PD患者与对照人群OPRM1 118位点野生型（A／A）和突变型（A／G＋G／G）的阳性率，二者差异有统计学意义（Х^2=4．576，P=0．032）；等位基因A和G频率病例组分别为0．732和0．268，对照组分别为0．823和0．177，二者差异有统计学意义（Х^2=5．932，P=0．015，OR=1．702，95％CI：1．107～2．617），提示OPRM1 118G等位基因的携带与PD的发生呈正相关，该突变可能会增加PD的发病风险。结论OPRM1基因A118G多态性可能是散发原发性PD发病的一个潜在的易感位点。; 杜卫东许洪升孙中武唐先发汤华阳郝加虎陈刚张学军; 关键词：帕金森病多态性单核苷酸焦磷酸测序

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯诱导K562细胞分化的作用及细胞周期阻滞的作用机制: 2009年; 目的：本研究探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（4-amino-2-trifluoromethyl—phenylretinate，ATPR）对K562细胞株的抑制增殖的和诱导分化活性并对其发生的细胞周期G1期阻滞的机制进行研究。方法：ATPR作用于K562细胞3d后，通过MTT法检测细胞的增殖，NBT还原实验法分析细胞的分化指标，FCM检测分析细胞周期和细胞表面分化抗原CD45、CD73、CD117变化。RT—PCR法检测细胞周期蛋白cyclinE、cyclinD1，细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2、CDK4、CDK6，周期蛋白抑制蛋白／激酶抑制蛋白（CIP／KIP）P21（cipl）、P27（kipl）、P57（kip2）mRNA的变化情况。WesternBlot法检测cyclinDl和CDK4蛋白表达的改变。结果：ATPR呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖的作用。; 阮晶晶陈飞虎徐佼沈娟石静波吴繁荣汪渊; 关键词：K562细胞株细胞周期阻滞细胞分化细胞周期蛋白依赖性激酶 WESTERNBLOT法

高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的相关机制被引量：4: 2011年; 目的探讨高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的可能机制。方法用含不同浓度葡萄糖的DMEM处理HepG-2细胞,分为正常组(糖浓度为5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖组(糖浓度分别为25、40、100、150、200mmol/L),采用MTT、Hoechst染色法观察细胞的增殖和凋亡状况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bak、Bax、p53、NF-κB的表达变化,并检测Caspase3的活性。结果高浓度葡萄糖能明显抑制细胞的体外增殖且呈剂量依赖性;Ho-echst染色显示高浓度葡萄糖能诱导细胞的凋亡,且随着葡萄糖浓度的升高凋亡现象越来越明显,Caspase3的活性呈上升趋势;Western blot显示高浓度葡萄糖能下调抑制凋亡作用的蛋白Bcl-2,上调促进凋亡的蛋白Bak、Bax、p53和NF-κB的表达(P<0.05)。结论高浓度葡萄糖能明显诱导HepG-2细胞的凋亡。; 袁育珺朱华庆周青汪渊; 关键词：高浓度葡萄糖 HEPG-2 凋亡

血吸虫病DNA疫苗联合免疫研究进展被引量：5: 2007年; 血吸虫病是严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病，疫苗是预防控制血吸虫病的重要手段。为提高血吸虫病疫苗的免疫效果，国内外通过不同抗原基因的连接、不同疫苗抗原的组合或从噬菌体肽库中筛选到若干个不同抗原表位的混合等途径，来实现复合疫苗或多种单一疫苗的联合免疫，并取得较好的成果。; 郑辉沈继龙; 关键词：血吸虫病联合免疫日本血吸虫 DNA疫苗免疫机制

安徽医科大学临床药理研究所教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室

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