中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室
- 作品数：102 被引量：989H指数：19
- 相关作者：张跃马进何小燕李英华曹婷婷更多>>
- 相关机构：上海海洋大学水产与生命学院西北农林科技大学动物科技学院暨南大学生命科学技术学院生物工程学系更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技基础条件平台建设计划广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程医药卫生更多>>
- 大口黑鲈GHRH基因启动子区域序列分析及其活性检测被引量：5
- 2016年
- 生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone,GHRH)是下丘脑弓状核合成和分泌的小分子多肽,其主要功能是调节垂体细胞合成和释放生长激素。为研究大口黑鲈(Micropterus salmoides)GHRH基因5’侧翼启动子区域的活性和该区域中潜在的转录因子对GHRH基因表达的调控作用,对该基因5’端启动子区域约1400 bp长度的片段进行序列分析,预测顺式作用元件,获得了Oct-1、SP1、NF-1、C/EBPalp和C/EBP等多个潜在的调控GHRH基因表达的调节因子结合位点序列。在包括外显子1和内含子1的GHRH基因5’侧翼区两侧加入两个限制性酶切位点Xho I和Bam H I,对其进行改造,并将该片段插入红色荧光蛋白报告基因载体p DsRed2-1,构建了重组表达质粒pGHRH1-RFP。同时,用不含有外显子1和内含子1的GHRH基因5’侧翼区构建重组表达质粒p GHRH-RFP。将质粒pGHRH1-RFP和p GHRH-RFP转染鲤(Cyprinus carpio)上皮细胞(epithelioma papillosum cyprinid,EPC)。经过48 h的培养,在pGHRH1-RFP转染的部分细胞中检测到红色荧光蛋白表达。又将pGHRH1-RFP或p GHRH-RFP质粒注射到斑马鱼(Danio rerio)一细胞或二细胞期的胚胎中,注射了pGHRH1-RFP的胚胎在受精后48 h约有22.5%能检测到有红色荧光蛋白表达,受精后72 h约有29%的仔鱼检测到红色荧光蛋白表达。实验结果表明,目前分离到的GHRH基因5’侧翼序列具有启动基因表达的活性,且该基因的内含子1和外显子1是启动子的活性所必需的。另外,pGHRH1-RFP质粒注射的斑马鱼胚胎只能在胚胎和仔鱼的脊椎和肌肉中检测到RFP的表达,而在脑中没有检测到表达。推测扩增到的大口黑鲈GHRH启动子序列1407 bp(-1043 bp^362 bp)只是起到了驱动RFP脊椎和骨骼肌表达的作用,而不包括驱动在脑组织中特异性表达的启动子,本研究为GHRH基因功能的深入分析奠定了基础。
- 马冬梅韩林强白俊杰
- 关键词：生长激素释放激素启动子活性大口黑鲈
- 大口黑鲈IGF-I基因内含子1、3和4序列多态性研究被引量：10
- 2009年
- 根据大口黑鲈IGF-I基因的cDNA序列设计引物,克隆IGF-I基因内含子核苷酸序列,采用PCR产物直接测序方法,在中国养殖群体和美国野生群体中筛选IGF-I基因内含子上的多态位点。应用RFLP、CRS-RFLP和SSCP技术建立多态位点的检测方法,同时比较分析其中4个多态位点在两个群体中基因频率分布。结果表明:(1)IGF-I基因内含子1、3和4序列长分别为1 317 bp、712 bp和1 941 bp;(2)在3个内含子上共发现7个多态位点,其中在内含子1的208和1070位为G-A突变;内含子3的第40个碱基为一个"A"的插入-缺失突变,第307位为C-T突变,683位是G-A突变;内含子4上的696碱基处有一个20 bp的插入-缺失突变,在1 563位为G-A突变,表明大口黑鲈IGF-I基因序列上存在较多的SNPs;(3)内含子1上SNPG1070A的A等位基因能为Hind III限制性内切酶识别,采用RFLP技术分型。根据内含子1上SNP G208A侧翼序列,设计错配引物,使错配碱基和A等位基因共同形成TaqI酶切位点,建立CRS-RFLP检测方法。内含子4上SNP G1563A采用SSCP检测方法,同时对内含子4上的插入-缺失突变进行PAGE电泳分型。试验结果显示,RFLP、CRS-RFLP和SSCP三种SNP检测方法简单易行,适于在水产动物SNP标记研究中推广应用;(4)在中国养殖群体中,只有内含子1上的SNP G1070A具有多态性,其它3个多态位点只在美国野生群体中存在多态,证实中国养殖群体的遗传多样性相对较低。
- 李小慧白俊杰叶星胡隐昌
- 关键词：大口黑鲈内含子多态性
- 大口黑鲈溃疡综合征病毒TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法的建立被引量：8
- 2011年
- 根据大口黑鲈溃疡综合征病毒（Largemouth bass ulcerative syndrome virus,LBUSV）的甲基转移酶（MTase）基因核苷酸序列设计引物及TaqMan-MGB探针,优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,建立了LBUSV的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测方法.用含有MTase基因的质粒pDNA-MT系列稀释作为标准品模板,在荧光定量PCR仪上进行PCR反应,绘制标准曲线,斜率为-3.24,R2=0.999,呈现很好的线性关系,扩增效率1.04.灵敏度检测结果表明,PCR反应24个循环时可以检测到的质粒最小浓度是102拷贝数/μL.选用107、106、105、104拷贝数/μL 4个浓度梯度质粒做模板,变异系数在1.1%-3.4%范围内,说明该方法具有良好的重复性和稳定性.利用该方法可以准确地检测出感染LBUSV的病鱼,特异性强.
- 马冬梅白俊杰邓国成李胜杰张莉莉
- 关键词：TAQMAN-MGB探针定量PCR病毒检测
- 加州鲈肌肉生长抑制素(MSTN)cDNA的克隆和序列分析被引量：16
- 2007年
- 肌肉生长抑制素是抑制肌肉生长和发育的生长调控因子。对运用RT—PCR和RACE技术从加州鲈成鱼肌肉总RNA中扩增得到的MSTNcDNA全序列进行了序列分析。结果表明，加州鲈MSTNcDNA全长为1626bp，其开放阅读框为1134bp，共编码377个氨基酸，前面的22个氨基酸为信号肽，中间有四个氨基酸（RARR）为蛋白水解加工位点；该基因总共有13个半胱氨酸残基，后面9个在蛋白水解加工位点之后的c端生物活性区，与其它脊椎动物比较，它们的位置完全一致，对该基因的结构和功能非常重要。与GenBank中已知的条纹狼鲈、金鲷、斑马鱼、虹鳟、斑点叉尾鲴、人、猪、鸡、鸽MSTN的ORF相比较，核苷酸序列同源性为63％-94．4％，氨基酸同源性为61．4％-96％，特别是在C端生物活性区氨基酸同源性为88．1％-100％，高度的保守性反映了该基因受到了高度的进化限制以及功能的重要性。加州鲈MSTN基因的克隆为研究该基因打靶和鱼类肌肉发育调控机理奠定了基础。
- 李胜杰白俊杰叶星劳海华简清
- 关键词：加州鲈MSTN克隆
- 应用有益微生物改善温室养鳖池水质的研究被引量：19
- 2002年
- 向养鳖池中投加光合细菌 (PSB)、硝化细菌 (NB)、玉垒菌 (S3 0 )和蜡质芽孢杆菌 (BC)等有益菌群 ,可使温室养鳖池中的有机污染物有效分解 ,降低水体中的有机污染物氨氮、亚硝酸盐氮等的含量 ,减少换水次数和换水量 。
- 任保振王广军
- 关键词：水质中华鳖有益微生物温室养鳖
- 草鱼铜绿假单胞菌的鉴定及药物敏感性分析被引量：10
- 2010年
- 从患病草鱼C tenopharyngodon idella体表病灶上分离到一株优势菌,经分离纯化培养制成细菌悬液,分别以腹腔注射和浸泡两种方式感染草鱼。结果表明:该菌株能感染草鱼,且具较强毒力,腹腔注射0.2mL该菌液(3×109cfu/mL),可导致受试草鱼100%死亡;创伤浸泡感染(3×108cfu/mL),死亡率也达100%,受感染鱼出现与自然感染相似的类似赤皮病症状。对该病菌进行形态特征观察和主要理化特性分析,初步鉴定为铜绿假单胞菌Pseudom onas aeruginosa。进一步对该菌进行分子鉴定,共选用16S rRNA、RNA聚合酶β亚单位(rpoB)和促旋酶亚单位蛋白(gyrB)3个基因进行鉴定分析。序列克隆与BLAST分析结果显示,这3个基因均与GenBank上登录的铜绿假单胞菌的相应序列具有很高的同源性,16S rRNA、rpoB和gyrB基因与已知铜绿假单胞菌相应序列的同源性分别在99%、98%和93%以上。综合生理生化与分子鉴定结果,可判定所分离的菌株为铜绿假单胞菌。药敏试验结果显示:该菌对阿米卡星、菌必治、氟哌酸和妥布霉素等11种药物高度敏感,对链霉素和庆大霉素中度敏感,对罗红霉素、红霉素、四环素、苯唑青霉素、新霉素和头孢氨苄等16种药物具有耐药性。
- 崔来宾叶星邓国成江小燕田园园白俊杰黎坚平
- 关键词：草鱼铜绿假单胞菌生化鉴定RRNARPOB药物敏感性
- 八种随机引物扩增鳜鱼病毒核酸初步研究
- 从感染鳜鱼病毒(Siniperca chuatsi Virus,简称SCV)的鳜鱼中分离病毒,提纯核酸作模板,用8种带酶切位点的引物,进行病毒核酯随机扩增.探讨PCR过程中,引物长度,Mg<'2+>浓度和复性温度对获得扩...
- 李新辉吴淑勤李凯彬白俊杰潘厚军罗建仁简清
- 关键词：病毒核酸病毒分离
- 文献传递
- 大口黑鲈生长性状的遗传参数和育种值估计被引量：18
- 2011年
- 采用最佳线性无偏差预测法(BLUP法)对大口黑鲈(Micropterus salmoides)体质量、体长和体高的遗传参数和育种值进行估计。4月龄和6月龄的体质量遗传力分别为0.29±0.08和0.28±0.10、体长遗传力分别为0.31±0.08和0.26±0.10,6月龄的体高遗传力为0.29±0.10。这些性状的遗传力都属于中度遗传力(P<0.01),表明在加性效应控制下,大口黑鲈生长性状具有较大的遗传改良潜力。6月龄的体质量与体长、体质量与体高及体长与体高的遗传相关分别为0.790±0.094、0.820±0.081和0.990±0.001,这些性状之间均表现为高的正遗传相关性(P<0.01),说明在对体质量进行选择的同时,其他生长性状也可以获得相应的间接选择反应。从不同评定方法的秩相关来看,6月龄时综合育种值与体质量育种值、体长育种值以及体质量育种值与体长育种值的秩相关系数均达到了极显著(P<0.01),分别为0.998、0.914和0.890,用综合育种值对大口黑鲈的评定名次排序与用单性状育种值排序的差异不大。本研究对大口黑鲈生长性状的遗传参数和育种值进行确定与分析,旨在为该物种的人工选育提供理论依据和技术参考。
- 李镕白俊杰李胜杰王解香叶星
- 关键词：大口黑鲈生长性状育种值
- 剑尾鱼线粒体DNA D-环及侧翼tRNA^(thr)和tRNA^(pro)序列与结构分析被引量：10
- 2003年
- 采用PCR方法从剑尾鱼(Xiphophorushelleri)线粒体基因组中扩增到1段约15.5kb的片段,测定了其中627个碱基的序列。经测序分析表明,该扩增片段包括486bp的D 环的部分序列以及D 环5'端的tRNAthr和tRNApro基因的完整序列。其中486bpD环序列包含3段保守的终止相关序列TAS、与TAS互补的序列以及类似其他鱼类线粒体CSB序列。tRNAthr由线粒体DNA的H链编码,长度为72bp。tRNApro由线粒体DNA的L链编码,长度为69bp。并绘制了这2种tRNA的二级结构图。本研究所测定的基因序列已登录国际GenBank数据库,序号为AF489918。
- 白俊杰劳海华叶星简清吴淑勤
- 关键词：剑尾鱼线粒体DNA基因序列
- 一株草鱼致病菌--铜绿假单胞菌的鉴定
- 从患病草鱼体表病灶上分离到一株致病菌.患病草鱼体表局部出血发炎,以腹部最为严重,鳍条基部充血、末端腐烂,症状类似赤皮病病症.回归感染试验显示该菌株能感染草鱼,且具有较强毒力.腹腔注射(0.2ml菌液,3×109...
- 崔来宾叶星
- 关键词：草鱼铜绿假单胞菌RPOBGYRB基因
