华中师范大学生命科学学院昆虫研究所
- 作品数：89 被引量：457H指数：11
- 相关作者：陈曲侯王家坤蒋才富徐莉杜昌升更多>>
- 相关机构：中山大学生命科学学院中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室中国科学院武汉病毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 苏云金芽孢杆菌Cry1A毒素抗性相关受体类钙粘蛋白的研究进展被引量：2
- 2004年
- 综述了Cry1A毒素的受体类钙粘蛋白的结构 ,受体与毒素的结合特性 ,受体基因在离体细胞中的表达和表达产物介导Cry1A毒素裂解细胞的功能 ,以及受体基因的突变与抗性的关系 。
- 刘凯于郑进彭蓉洪华珠
- 关键词：基因表达突变抗性
- 棉铃虫核多角体病毒泛素基因的克隆表达及抗体制备被引量：4
- 2005年
- 昆虫杆状病毒和痘病毒是目前已知唯一编码泛素基因的病毒。通过PCR方法,克隆了棉铃虫核多角体病毒(HaSNPV)泛素基因(Ubiquitin,Ubi)。序列分析表明,该基因编码区全长252bp,编码83个氨基酸残基,预计分子量为9.24kDa。将泛素基因克隆到原核表达载体pET28a上,构建重组质粒pETUbi,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达融合蛋白。用Histag抗体检测目的蛋白,Westenblot实验证明所表达的蛋白是带有Histag的重组融合蛋白。通过改变IPTG浓度和诱导时间对表达条件进行了优化。利用NI琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化目的蛋白,SDSPAGE鉴定为单一条带,同时用提纯蛋白制备了特异性抗体,为进一步的研究打下基础。
- 李京京姚青杨东叶余泽华陈新文
- 关键词：棉铃虫核多角体病毒泛素克隆原核表达抗血清
- 对虾白斑症病毒体内外感染的研究被引量：4
- 2001年
- WSSV可经注射、投喂或共居感染克氏螯虾和日本沼虾 ,病毒感染的组织匀浆物注射后发病很快 ,但蔗糖介质纯化的 WSSV注射后发病较慢 ,Ficoll-4 0 0介质纯化的 WSSV注射后发病时间介于前二者之间 .中国对虾细胞内 WSSV一般每个囊膜只含一个核衣壳 ,但此毒种经克氏螯虾反复增殖后 ,多粒包埋的病毒粒子明显增多 .从病虾的每克鳃可提出约 0 .66mg的 WSSV.含WSSV的血淋巴或组织匀浆液感染 8种昆虫细胞后 ,传代
- 余泽华刘凯于杨凯王家坤虢华珊邱宝国姚汉超陈曲侯
- 关键词：对虾白斑症病毒WSSV体外感染发病情况
- 昆虫离体细胞总膜蛋白的提取及双向电泳分析
- 2004年
- 探讨适用于双向电泳的昆虫离体细胞总膜蛋白提取技术及适于双向电泳染色的高灵敏度蛋白质银染技术。以粉纹夜蛾细胞系BT1-TN - 5B1- 4为材料 ,比较了传统的Kwa法和Sigma公司的ProteoPropTM MEMBRANEEXTRACTIONKIT提取BT1-TN - 5B1离体细胞总膜蛋白 ,SDS -PAGE及双向电泳结果表明Sigma公司试剂盒提取的总膜蛋白效果较好 ,并且适用于双向电泳分析 ;比较了两种蛋白银染方法 ,确定并优化了一种灵敏度较高适于双向电泳的银染方法 ,得到了理想的膜蛋白 2 -DE图谱。
- 蒋才富刘凯余洪华珠彭蓉郑进彭建新
- 关键词：膜蛋白双向电泳银染技术昆虫离体细胞
- HPV18晚期蛋白L1在毕赤酵母菌中的表达及鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:用毕赤酵母胞内表达载体构建含人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1基因质粒,诱导表达并进行鉴定。方法:按照毕赤酵母密码子偏爱性原则,合成全长L1基因,然后克隆到pAO819表达载体上,在体外分别构建含一个拷贝和二个拷贝的L1基因载体。线形化后转化到GS115酵母细胞,经G418抗性筛选,获高拷贝重组子并经甲醇诱导表达,表达产物采用化学发光Western blot鉴定,一抗为抗HPV18L1蛋白鼠抗血清。结果:在55kDa处有诱导蛋白免疫印迹出现,并在电镜下观察到HPV18的病毒样颗粒(VLPs),证明该表达系统能表达出HPV18 L1蛋白。结论:本实验构建的毕赤酵母表达菌株,可经甲醇诱导表达HPV18L1晚期蛋白,为进一步研制人乳头瘤病毒18型基因工程疫苗打下基础。
- 谢飞刘红岩董金蓉彭建新刘勇郭仁杨红杨喆
- 关键词：毕赤酵母
- 芹菜夜蛾核型多角体病毒的空斑纯化及克隆株的生物测定被引量：1
- 2004年
- 利用空斑技术从芹菜夜蛾核型多角体病毒分离筛选了一毒力较强的SfaMNPV D克隆株。SfaMNPV D克隆株感染 5B1细胞 ,72h胞外病毒达最大滴度 ,组织培养半感染剂量为 3 .89×1 0 8TCID50 /ml,多角体产量达 4.0× 1 0 7PIBs/ml;生物测定结果表明 ,SfaMNPV D克隆株感染 3龄棉铃虫幼虫的LC50 为 7.1 4× 1 0 5PIBs/ml,原毒株的LC50 为 4.81× 1 0 6PIBs/ml。SfaMNPV D病毒DNA经几种限制性内切酶消化 ,各片段积加测得基因组DNA分子量为 1 1 3 .78kb .
- 徐莉彭建新洪华珠
- 关键词：生物测定
- 不同处理对苏云金杆菌187菌株毒力的影响被引量：1
- 2001年
- 以致倦库蚊作供试昆虫 ,对 187菌株的毒力进行测定 ,其效价为 2 16× 10 4IU mg- 1 并对摇床振荡时间、超声波处理等因素对晶体毒力的影响也进行了探讨 。
- 李爱民刘胜贵洪华珠
- 关键词：苏云金杆菌毒力测定超声波处理细菌杀虫剂
- 肌动蛋白抑制了杆状病毒多角体蛋白基因的转录与表达被引量：1
- 2005年
- 为进一步研究肌动蛋白在杆状病毒感染晚期的作用,利用Bac-to-Bac系统构建了表达多角体基因、肌动蛋白与绿色荧光蛋白融合基因的重组病毒vAc-ph/70GA,同时构建对照病毒vAc-ph.实验发现,重组病毒vAc-ph/70GA感染Sf9细胞后能持续表达肌动蛋白,但不能形成多角体,vAc-ph则能形成多角体.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,vAc-ph/70GA感染晚期,细胞内没有多角体蛋白的表达;RT-PCR的结果进一步表明多角体基因的转录被抑制.肌动蛋白的表达并没有影响vAc-ph/70GA对细胞的感染力.结果表明,晚期表达的外源肌动蛋白抑制了多角体基因的转录和表达,从而导致多角体不能正常产生.
- 贾蕴莉余泽华陈新文
- 关键词：肌动蛋白多角体
- 光增白剂对甜菜夜蛾围食膜结构的作用与影响被引量：32
- 2003年
- 应用环境扫描电镜和生化技术研究了甜菜夜蛾Spodopteraexigua正常围食膜和光增白剂M2R处理围食膜的形态、结构和组成。结果表明 :正常的围食膜表面光滑致密、无孔洞和缝隙 ;光增白剂处理的围食膜产生了孔缝。正常围食膜所含蛋白质的种类很多 ,经SDS PAGE测定至少有 17条多肽 ,分子量多在 97 4kD以下 ,围食膜蛋白质的含量约为 4 1 98% ,糖的含量约为 2 0 5 %。光增白剂可以解离大部分围食膜蛋白 ,液滴法喂食幼虫蓝色葡聚糖 2 0 0 0进一步证实了光增白剂能破坏围食膜的完整性。
- 朱蓉彭建新洪华珠
- 关键词：甜菜夜蛾围食膜
- 含果蝇肌动蛋白基因的重组棉铃虫核型多角体病毒的构建被引量：3
- 2002年
- 本实验利用昆虫杆状病毒表达载体 ,将果蝇肌动蛋白基因 5Cactin克隆入杆状病毒表达载体 ,以棉铃虫单核衣壳核多角体病毒为亲本病毒 ,在脂质体介导下共转染棉铃虫细胞 ,空斑纯化得到重组病毒 ,以深入研究棉铃虫病毒在入侵、复制及装配过程中 。
- 牟春燕余泽华王颖陈新文胡志红
- 关键词：棉铃虫重组病毒肌动蛋白果蝇杀虫机理
