山东农业大学植物保护学院环境生物学系
- 作品数：23 被引量：161H指数：10
- 相关作者：郭晓红陈静路梅陈卫红彭延杰更多>>
- 相关机构：河北农业大学食品科技学院河北农业大学食品科技学院生物工程系河北大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporusβ-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究被引量：5
- 2005年
- 采用室内培养、测定方法,对嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus产生的β-葡萄糖苷酶进行了分离纯化及特性研究。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl-Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。结果表明,经12%SDS-PAGE测得酶的单亚基分子量约为118kDa,凝胶过滤层析测得酶的分子量约为350kDa。该酶反应的最适温度和最适pH分别为80℃和4.5￣5.0,在pH5.0条件下,该酶在70℃条件下基本稳定,80℃保温30min,剩余酶活为15%。金属离子对β-葡萄糖苷酶活性影响较大,其中Ca2+、Ba2+对酶有激活作用;Ag+、Fe3+、Cu2+对酶有显著的抑制作用。该酶对水杨苷具有很强的底物特异性。
- 王冬梅李多川孟军
- 关键词：嗜热子囊菌光孢变种纯化
- 嗜热子囊菌光孢变种内切葡聚糖酶I基因在毕赤酵母中的表达及部分酶学性质被引量：2
- 2009年
- 嗜热子囊菌是一种嗜热真菌,可以产生具有很高工业价值的内切葡聚糖酶.本研究成功表达了嗜热子囊菌内切葡聚糖酶Ⅰ基因,并获得热稳定的重组内切葡聚糖酶.提取嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)总RNA,通过RT-PCR方法克隆出内切-β-葡聚糖酶eg1基因的成熟肽编码序列.采用基因重组的方法构建该基因的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K-eg1,经线性化后采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,大量筛选后获得高效表达内切葡聚糖酶Ⅰ的毕赤酵母工程菌株GpN24.该菌株采用甲醇诱导120h后,内切葡聚糖酶Ⅰ的活力可达570.7U/mL,最适温度为55℃,在90℃的条件下保温30min后仍具有60%的酶活力;最适pH为5.0,在pH3.0～5.0的条件下酶活力保持稳定.
- 张亚波刘连盟徐荣燕李多川
- 关键词：纤维素酶内切葡聚糖酶嗜热子囊菌光孢变种嗜热真菌毕赤酵母
- 一株嗜热毛壳菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性被引量：12
- 2004年
- 研究了液体发酵嗜热毛壳菌Chaetomium thermophile产生的β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sepharose 疏水层析、Sephacryl S-100分子筛层析等步骤后获得凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。经12.5%SDS-PAGE和凝胶过滤层析方法分别测得该酶的分子量大小约为78.4kDa和81kDa。该酶反应的最适温度和pH值分别为60℃和4.5-5.0。有较好的酸稳定性和热稳定性。金属离子对β-葡萄糖苷酶的活性影响较大, 其中Ca2+对酶有激活作用, 而Ag+、Cu2+ 、Hg2+对酶有显著的抑制作用。该酶对水杨苷具有很强的底物特异性。
- 楚春雪李多川郭润芳
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶纯化嗜热真菌嗜热毛壳菌
- 农杆菌介导的获取疏绵状嗜热丝孢菌插入突变体体系的建立(英文)
- 2012年
- 【目的】建立疏绵状嗜热丝孢菌的稳定遗传转化体系并获得插入突变体。【方法】利用农杆菌介导的方法建立疏绵状嗜热丝孢菌的遗传转化体系;分别通过Southern杂交、克隆转移DNA(T-DNA)侧翼序列来确定T-DNA在疏绵状嗜热丝孢菌基因组中的拷贝数和插入位点。【结果】成功建立了可靠的疏绵状嗜热丝孢菌的遗传转化体系。共培养过程中使用萌发孢子是成功建立疏绵状嗜热丝孢菌遗传转化体系的必要条件。疏绵状嗜热丝孢菌萌发的孢子与农杆菌在28℃共培养48h时,转化效率最高。乙酰丁香酮(AS)在农杆菌预培养及疏绵状嗜热丝孢菌萌发的孢子与农杆菌的共培养阶段都是必需的,且在共培养阶段当AS浓度为500μM时转化效率最高。Southern杂交验证表明,79.2%的转化子为T-DNA单拷贝插入,且通过热不对称PCR(TAIL-PCR)分析得出T-DNA在该菌基因组中的插入位点是随机的。通过该转化系统筛选到部分表型突变体。【结论】我们首次报道了利用ATMT技术成功转化嗜热真菌-疏绵状嗜热丝孢菌,证明了该方法是一种简单有效的获得插入突变体的方法,并为该嗜热真菌进行基因定位提供了工具。
- 韩华徐晓雪彭延杰孔德慧李多川
- 关键词：农杆菌介导转化疏绵状嗜热丝孢菌嗜热真菌
- 疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶的纯化及其性质研究被引量：19
- 2005年
- 采用硫酸铵沉淀、DEAE SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyceslanuginosus)几丁质酶。经SDS PAGE和凝胶过滤层析测得纯酶蛋白的分子量在 4 8～ 4 9 .8kD之间。该酶反应的最适温度和最适pH分别为 5 5℃和 4 5 ,在pH4 5条件下 ,该酶在 5 0℃以下稳定 ;6 5℃的半衰期为 2 5min ;70℃保温 2 0min后 ,仍保留 2 4 %的酶活性。其N 端氨基酸序列为AQGYLSVQYFVNWAI。金属离子对几丁质酶的活性影响较大 ,Ca2 + 、Na+ 、K+ 、Ba2 + 对酶有激活作用 ;Ag+ 、Fe2 + 、Cu2 + 、Hg2 + 对酶有显著的抑制作用 ;以胶体几丁质为底物的Km 和Vmax值分别为 9 .5 6mg mL和 2 2 . 12 μmol min。抗菌活性显示 ,该酶对供试病原菌有不同程度的抑制作用。
- 郭润芳李多川王荣
- 关键词：嗜热真菌THERMOMYCESLANUGINOSUS几丁质酶
- 疏绵状嗜热丝孢菌原生质体的制备与再生被引量：10
- 2006年
- 以疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)为供试菌株,研究了菌龄、酶的种类及浓度、酶解时间、酶解温度和稳渗剂对原生质体制备的影响及稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明,制备嗜热丝孢菌原生质体比较适宜的条件为:PDB液体培养基培养28 h,以0.7 mol/L NaCl为稳渗剂,0.15 mol/L的溶壁酶,30℃酶解4 h。原生质体再生以0.7 mol/L蔗糖作稳渗剂为最佳。
- 周庆新陈静于恺李多川
- 关键词：嗜热真菌疏绵状嗜热丝孢菌原生质体
- 嗜热真菌热稳定性β-葡萄糖苷酶的克隆表达、纯化及酶学性质被引量：5
- 2009年
- 从嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)中克隆出β-葡萄糖苷酶基因bglII的全长序列,GenBank注册号为EU263992。将该基因插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K中以获得重组质粒,将重组质粒转导入毕赤酵母中,大量筛选后获得高效表达β-葡萄糖苷酶的酵母工程菌株。经甲醇诱导6d,培养基中β-葡萄糖苷酶的活力可达0.23U/mg。该酶的最适反应pH为5.0,最适反应温度为50℃。通过DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析纯化了该重组蛋白质。SDS-PAGE测得该重组蛋白质分子量约为118kDa。
- 陈卫红李多川
- 关键词：嗜热子囊菌光孢变种纯化
- 两嗜热真菌中国新记录种被引量：1
- 2004年
- 在对山东、陕西及云南的标本研究中鉴定出两个嗜热真菌中国新记录种 ,即亚拉巴马枝顶孢 ,米黑根毛霉 ,对其进行了描述和讨论。亚拉巴马枝顶孢的主要特征是其深色菌丝、瓶梗产孢及顶生分生孢子 ;米黑根毛霉的主要特征是产生带假根孢囊梗 ,单孢子培养产生大量接合孢子。研究标本保存在山东农业大学植物病理学标本室(HSAUP)。
- 王冬梅李多川白复芹
- 关键词：嗜热真菌中国新记录种根毛标本室产孢毛霉
- 嗜热子囊菌原变种Thermoascus aurantiacus var.aurantiacus热稳定几丁质酶的克隆表达及活性研究被引量：5
- 2010年
- 研究通过RT-PCR和Tail-PCR技术从嗜热子囊菌原变种Thermoascus aurantiacus var.aurantiacus中克隆了一个几丁质酶同源基因。该基因全长1,253bp,包含一个由1,197个碱基构成的开放阅读框,编码398个氨基酸。序列比对分析表明,该基因编码蛋白属于糖苷水解酶18家族的几丁质酶。利用基因重组的方法构建酵母分泌型表达载体,并转化毕赤酵母。在甲醇的诱导下,重组蛋白得到了高效表达,第6天的表达量最高,达到0.433g/L,酶活力为28.96U/mg,同时对表达的几丁质酶进行了纯化,SDS-PAGE检测该蛋白的分子量为43.9kDa。该几丁质酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH值为8.0,70℃处理30min仍有45%的相对酶活,具有较好的热稳定性及工业应用价值。
- 张婕谢晨郭晓红李多川
- 关键词：几丁质嗜热真菌嗜热酶
- 嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophile)液体发酵产生纤维素酶及酶学性质的研究被引量：10
- 2003年
- 探讨了嗜热真菌Chaetomiumthermophile产生纤维素酶的液体发酵条件及滤纸酶(FPA)的特性。采用液体发酵培养法 ,通过对碳源、氮源、培养时间、培养基的起始 pH值及产酶过程中 pH值和蛋白质含量变化的研究发现 :在 2 %纤维素、1%可溶性淀粉为碳源 ;2 .0 %KNO3+0 .2 %酵母粉为氮源 ;起始 pH值为 6 .5 ,5 0℃下培养 9d后 ,各种酶活最高。发酵过程中 ,pH值和蛋白质的含量均在前 3d下降 ,后升高。FPA的反应最适温度和 pH值分别为 6 0℃和 5 .5～ 6 .0 ;
- 路梅李多川
- 关键词：嗜热毛壳菌液体发酵纤维素酶酶学性质
