辽宁医学院辽宁省高校分子细胞生物学与新药开发重点实验室
- 作品数：36 被引量：237H指数：9
- 相关作者：徐新力李香华史佳琳韦忠民徐新利更多>>
- 相关机构：延边大学医学院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省科技厅基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 地黄寡糖对谷氨酸诱导的海马神经元损伤及葡萄糖摄入的影响被引量：10
- 2009年
- 目的观察地黄寡糖(ROS)对谷氨酸(Glu)诱导海马神经元损伤及葡萄糖摄入的影响。方法将培养7d的SD大鼠海马细胞随机分为对照组、活性ROS用药组(4,20及100mg.L-1)、Glu损伤组(Glu0.1mmol.L-1)及Glu损伤前ROS预处理组(ROS+Glu)。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,比色法测定培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)活性,[3H]葡萄糖掺入法测定神经元葡萄糖的摄取。结果单纯ROS4,20及100mg.L-1组与对照组间各指标差异没有显著性(P>0.05)。ROS4,20及100mg.L-1预处理可使Glu损伤的细胞存活率由70.4%分别上升为77.8%,85.2%,92.6%,同时也改善了神经细胞形态并减少LDH的漏出;[3H]葡萄糖掺入量也由Glu损伤组的(1547±120)分别下降为(1384±181),(1303±123),(1134±123)cpm。结论ROS对Glu引起的神经元损伤具有保护作用,这种保护作用可能与其抑制神经细胞对葡萄糖的过度摄入有关。
- 杨菁史佳琳白剑徐新力王洪新刘春娜
- 关键词：地黄寡糖谷氨酸海马神经元葡萄糖摄取
- 猪CFL2b基因cDNA克隆初步分析被引量：4
- 2009年
- 利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列,采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列(GenBank登录号EU561660,EU561661),Northern杂交检测CFL2b基因mRNA.结果表明,猪CFL2b基因含有2个转录本,长转录本3012bp,短转录本1466bp.CFL2b基因在多种真核生物中都有表达,且编码区序列非常保守,开放式读码框501bp编码了166个氨基酸的蛋白质.氨基酸序列分析表明,猪CFL2b基因与人和小鼠氨基酸同源性分别为100%和99.1%.核苷酸序列相似性分别为88.1%和74.9%.
- 赵微曾瑞霞巴彩凤宋慧娟苏玉虹
- 关键词：CDNASMARTRACENORTHERN杂交
- 肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布.应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化,免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50μg/L)可以促进FAKY397位点的磷酸化,对FAK的表达没有影响.应用PI3K抑制物LY294002处理后,FAKY397的磷酸化水平显著降低.HGF处理后,FAK主要位于细胞边缘,呈簇状分布,应用PI3K抑制物,FAK在细胞内弥散分布.HGF处理后,Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加,而经LY294002处理后,Src激酶与SrcY416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中,HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.
- 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳
- 关键词：肝细胞癌肝细胞生长因子黏着斑激酶PI3K
- 犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2008年
- [目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。
- 王光川巴彩凤苏荣健张轶博赵微宋慧娟武洁
- 关键词：真核表达载体MDCK细胞
- 左卡尼汀对心肌细胞H_2O_2损伤的保护作用被引量：19
- 2009年
- 目的研究左卡尼汀对H2O2引起的心肌细胞损伤的保护作用。方法利用体外培养乳鼠心肌细胞,0.2 mMH2O2作用12 h建立氧化应激损伤模型,观察不同浓度左卡尼汀(50,100,200 mg/L)对心肌细胞活力、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果与正常组比较,模型组细胞活力下降,细胞MDA含量增加,SOD活性下降(P<0.01);与模型组比较,不同浓度的左卡尼汀可以提高心肌细胞活力,降低细胞MDA含量,增加SOD活性。结论左卡尼汀对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用。
- 戴红良王洪新吴国强王东海
- 关键词：左卡尼汀过氧化氢心肌细胞
- 地黄寡糖质量标准研究被引量：1
- 2009年
- 目的:建立地黄寡糖的质量标准。方法:采用薄层色谱(TLC)法对方中的水苏糖进行定性鉴别;以高效液相色谱法测定梓醇及高分子物质的含量,干燥失重法测定干物质含量,苯酚-硫酸法测定寡糖含量。结果:TLC斑点清晰,分离度好;梓醇进样量在5～80μg(r=0.9975)范围内与峰面积积分值呈良好线性关系,平均回收率为98.5%,RSD=1.28%(n=6);高分子物质的含量≤2.0%;干物质含量为18.0～22.0g·L-1;寡糖含量均>85.0%。结论:所建标准可用于地黄寡糖的质量控制。
- 刘影杨菁安阳刘涛韦忠民
- 关键词：地黄寡糖薄层色谱法高效液相色谱法苯酚-硫酸法
- 杜氏肌营养不良症(DMD)及其动物模型研究进展被引量：5
- 2007年
- 杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)属于X连锁隐性遗传病。DMD基因是人类最大基因,突变机制复杂。随着分子生物学的研究进展,对DMD的基因和其编码的抗肌萎缩蛋白(dystrophin)及抗肌萎缩蛋白相关蛋白(utrophin)的认识不断深入。本文就DMD的病理学特点,Dys基因结构、表达、功能,DMD突变及其相关检测技术,DMD实验动物模型及相关治疗的研究进展进行综述。
- 肖楠苏玉虹
- 关键词：杜氏肌营养不良症抗肌萎缩蛋白基因突变动物模型基因治疗
- 猪新基因CFL2真核表达载体的构建及在C2C12细胞中的瞬时表达被引量：1
- 2008年
- 从猪的股二头肌中提取总RNA,利用RT-PCR技术从猪骨骼肌中获得CFL2基因的编码区序列,T-A克隆至PMD-18T载体,经HindⅢ和XhoⅠ酶切后定向克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)中。获得的重组质粒pCDNA3.1(+)/CFL2用限制性内切酶酶切分析和DNA测序分析鉴定,并经脂质体瞬时转染C2C12细胞,最后利用PCR检测转基因细胞中CFL2基因的存在及其表达情况。结果显示:猪CFL2基因已克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)中,转染的C2C12细胞中检测到细胞内较高量CFL2的表达。pCDNA3.1(+)/CFL2真核表达载体的成功构建,为深入研究CFL2基因在猪肌肉细胞中的功能奠定基础,为猪肉质品质的改良提供了新的思路。
- 赵微苏玉虹巴彩凤苏荣健宋慧娟
- 关键词：真核表达载体PCDNA3.1(+)C2C12
- 西藏那曲地区藏族人群15个短串联重复序列位点多态性的研究被引量：2
- 2007年
- 利用基因扫描技术调查西藏自治区那曲地区藏族人群D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、VWA、TPOX、D18S51、D5S818及FGA共15个短串联重复序列(STR)基因座多态性分布,获得15个基因座的群体遗传学数据。结果显示:15个STR位点在那曲地区藏族人群中具有遗传多态性,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡,DP在0.758 8—0.960 4之间,H在0.476 2—0.862 0之间,PIC在0.446 4—0.861 5之间,EPP在0.385 0—0.856 0之间,累积个体鉴别力为0.999 999 999,累积非父排除率为0.999 999 998。15个STR位点适合作为那曲地区藏族人群的遗传标记用于人类学、疾病连锁分析、法医学亲子鉴定和个体识别等领域的研究。
- 李宁苏玉虹席焕久任甫朱宝芹温有峰
- 关键词：短串联重复序列多态性藏族聚合酶链式反应
- 特异性下调葡萄糖调节蛋白78对肝细胞癌粘附特性和细胞外基质降解的影响被引量：2
- 2009年
- 我们以前的研究表明特异性下调葡萄糖调节蛋白78(Grp78)可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移。为了进一步研究该抑制作用的分子机制,我们应用小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调肝细胞癌细胞系BEL7402中Grp78的表达,并对细胞的粘附、伸展和细胞外基质降解情况进行研究,结果发现特异性下调Grp78可以促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展。我们的研究还显示特异性下调Grp78的表达可以抑制基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达及分泌,这些说明特异性下调Grp78可以抑制细胞外基质的降解。对机制的研究发现特异性下调Grp78表达可以抑制c-jun的磷酸化。这些结果表明特异性下调Grp78可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移,这种抑制作用可能是通过促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展和细胞外基质的降解实现的。
- 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳
- 关键词：葡萄糖调节蛋白78肝细胞癌细胞粘附细胞外基质降解
