哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室
- 作品数：20 被引量：38H指数：3
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- 电压门控型钾通道蛋白Kv 1.5抗血清的制备及特性鉴定
- 2010年
- 目的制备电压门控型钾通道蛋白Kv 1.5的多克隆抗体,对其特性进行鉴定。方法利用生物信息学方法分析Kv 1.5蛋白的序列,根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择一段8个氨基酸序列,据此合成Kv 1.5多肽片段,并将其与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为免疫抗原,免疫新西兰白兔制备抗Kv 1.5抗血清。辛酸-硫酸铵法纯化抗血清,对纯化后的抗血清进行ELISA、Western blot鉴定。结果成功获得抗Kv 1.5合成肽的抗血清,该抗血清效价为1:64 000,可与Kv 1.5合成肽及天然Kv 1.5蛋白出现特异性反应,该抗血清识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为59 kD。同时,Western blot结果显示,所制备的抗血清能识别大鼠心脏天然Kv 1.5蛋白。结论合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗血清,并且制备的抗血清经ELISA、Western blot鉴定后特异性较好。
- 于学薇李淑珍鄢成伟唐晓波
- 关键词：KV1.5合成肽多克隆抗体
- 高免疫原性骨桥蛋白的构建、表达及鉴定
- 2013年
- 目的重组及表达高免疫原性骨桥蛋白（OPN）的融合蛋白。方法使用Lasergene软件分析OPN基因，选取出免疫原性高的区域作为目的片段。提取总RNA，应用逆转录、PCR等技术扩增OPN基因目的片段，将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签的pGEX-4T-1载体连接。构建表达载体，诱导表达OPN融合蛋白（分别含有His，GST—Tag），并进行SDS—PAGE及Western blotting鉴定。结果扩增后获得一条351bp的DNA片段，经测序鉴定为目的片段序列，并实现了可溶性高表达，经Western blotting鉴定为高免疫原性OPN融合蛋白。结论采用原核表达经纯化后可获得高纯度高免疫原性的OPN融合蛋白，为进一步开发OPN诊断试剂打下基础。
- 汤伟松孟琴刘亮李淑珍唐晓波
- 关键词：骨桥蛋白肝癌
- 川陈皮素对高血压大鼠的血压调节作用及机制被引量：20
- 2019年
- 目的探讨川陈皮素对高血压大鼠的血压调节作用及分子机制。方法使用L-NNA制造内皮损伤型高血压大鼠模型,给予不同浓度的川陈皮素,分别在造模前、造模后、给药14天及给药28天时测量大鼠血压、心率和体重的改变。处死给药28天大鼠,取动脉血,使用ELISA法测量NO、EDHF、ANG-2和PGI2含量。结果川陈皮素给药14天及28天后,高血压大鼠血压明显下调,且ELISA结果显示高血压大鼠动脉血中NO和PGI2的含量增加,但EDHF和ANG-2含量无影响。结论川陈皮素可影响血管内皮细胞功能,提高NO和PGI2的含量,使高血压大鼠血压下降。
- 祁云龙李淑珍朱大岭
- 关键词：川陈皮素高血压大鼠模型舒张因子
- 鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。
- 包红霞吴春铃李淑珍唐晓波褚晓杰王爽张家宁朱大岭
- 关键词：CD20原核表达融合蛋白抗体制备
- 20-羟基-二十碳四烯酸对肺动脉平滑肌细胞凋亡的抑制效应
- 目的研究20-羟基-二十碳四烯酸(20-HETE)对牛肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的抑制效应。方法采用细胞毒性实验(MTT)测定细胞活力、hoechst 核染色观察细胞核形态、Annexin V/PI 结合测定定...
- 王志刚李郁梅郑晓东郭蕾唐晓波朱大岭
- 关键词：细胞凋亡
- 文献传递
- 抗人羧酸酯酶-Ⅱ多克隆抗体的制备、鉴定及应用
- 2009年
- 目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在宿主菌BL21内进行诱导表达,hCE-Ⅱ-GST融合蛋白作为免疫原免疫大耳白兔,用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用间接ELISA、West-ernblot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗hCE-Ⅱ的多克隆抗体。Westernblot鉴定表明该抗体可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性结合肝包浆中的hCE-Ⅱ蛋白,而不与血管平滑肌细胞结合。结论:制备的pAb有较高的效价和较好的特异性,为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础。
- 吴春铃包红霞唐晓波朱大岭
- 关键词：原核表达融合蛋白多克隆抗体
- 非小细胞肺癌生物标记物角蛋白19基因的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2013年
- 目的克隆人角蛋白19（CK19）基因，原核表达重组蛋白并纯化，为建立一种新的非小细胞肺癌诊断方法奠定基础。方法从宫颈癌HeLa细胞株中提取总RNA，经RT—PCR合成eDNA，设计特异性的引物，用PCR的方法扩增目的片段，构建pET．32a—CK19和pGEX-4T1-CK19表达载体，在BL21大肠杆菌中表达CK19重组蛋白纯化，并进行SDS—PAGE及Westernblot鉴定。结果经PCR扩增后得到一条420bp的DNA片段，构建载体后DNA测序，结果与预期序列一致。初步结果鉴定表明，表达和纯化的融合蛋白，与预期结果一致。结论成功克隆CK19基因，并获得高纯度的CK19融合蛋白，为进一步制备体外诊断试剂打下基础。
- 孙晓林李梅唐佳昕李淑珍唐晓波
- 关键词：非小细胞肺癌克隆纯化
- 15-HETE抑制低氧性肺动脉平滑肌细胞Kv1．5通道的表达与全细胞钾电流
- 目的证明亚急性低氧通过15-HETE 对 Kv1．5通道的抑制作用导致肺动脉血管收缩。方法使用15-LO 的阻断药(5μmol·LCDC、30 μmol·LNDGA),组织浴槽血管环,逆转灵-聚合酶链反应(RT-PCR)...
- 褚晓杰郭蕾唐晓波朱大岭
- 关键词：15-HETE钾电流
- 文献传递
- 鳞状细胞癌抗原SCCA基因的构建、表达及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:重组人鳞状细胞癌抗原(SCCA)的基因及表达融合蛋白,为下一步建立新的肝癌诊断方法奠定基础。方法:提取子宫颈癌细胞株(hela)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出SCCA基因,将其分别与PET-32a及PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆,并测序鉴定。异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入工程质粒的BL21菌中表达SCCA融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果:经RT-PCR、PCR扩增后成功获得一条450 bp的DNA片段,经测序鉴定与预期序列一致;并成功在大肠杆菌中实现了高表达,经Western blotting鉴定为SCCA融合蛋白。结论:成功获得SCCA目的基因并获得高纯度的SCCA融合蛋白,为进一步开发针对肝癌的SCCA诊断试剂打下基础,开辟诊断肝癌新途径。
- 于华实孙晓琳张天竹李梅李淑珍唐晓波
- 关键词：肝癌克隆
- 兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定
- 2009年
- 目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵法纯化抗体,采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果:CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。兔抗人CES1pAb效价为1∶64000。Western blot鉴定表明,该抗体可识别重组人CES1蛋白,也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白。结论:成功地制备了兔抗人CES1pAb,该抗体可应用于ELISA、Western blot、免疫组化等实验,为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具。
- 朱晓美李淑珍吴春铃包红霞朱大岭唐晓波
- 关键词：重组蛋白多克隆抗体
