目的:观察疏肝和胃汤对抑郁模型大鼠延髓、脊髓及胃黏膜组织5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)表达的影响,部分揭示疏肝和胃汤改善抑郁状态及胃肠功能作用中的5-HT调节机制.方法:100只大鼠随机分成生理盐水组、模型组、百优解组及疏肝和胃汤大、小剂量组.采用慢性心理应激加孤养法制作抑郁模型,共计造模4 wk.在第3周,百优解组及疏肝和胃汤大、小剂量组分别予以0.36mg/(kg·d)、20、10 g/(kg·d)体质量给药,生理盐水组及模型组给予等体积生理盐水,每天分2次灌胃.在第4周结束后,使用内固定法取大鼠延髓迷走神经背核部位的脑、胸髓(T6-T8,根据脊神经定位)及胃黏膜组织,应用免疫组织化学技术检测上述部位5-HT的表达.结果:模型组大鼠延髓组织5-HT含量较生理盐水组显著下降(3314.46±757.47 vs10050.01±472.82),差异具有显著统计学意义(P<0.01);模型组大鼠脊髓与胃黏膜组织5-HT含量较生理盐水组显著上升(7014.51±628.93 vs 4135.62±148.01、4400.12±315.78vs 3614.59±210.54),差异具有显著统计学意义(P<0.01).治疗2 wk后,疏肝和胃汤大、小剂量组和百优解组大鼠延髓中5-HT含量与模型组比较显著增加(9556.06±406.73 vs 3314.46±757.47、7800.91±264.37 vs 3314.46±757.47、9770.94±339.23 v s 3314.46±757.47),差异具有显著统计学意义(P<0.01),脊髓与胃黏膜中5-HT含量与模型组比较显著下降(4487.24±160.55 vs 7014.51±628.93、5667.02±294.84 v s 7014.51±628.93、4908.46±129.58 v s 7014.51±628.93、3736.45±242.36 v s 4400.12±315.78、3978.35±355.96 v s 4400.12±315.78、3826.96±474.88 vs 4400.12±315.78),差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).其中,疏肝和胃汤大剂量组与百优解组延髓中5-HT含量比较,差异无统计学意义(P>0.05),而疏肝和胃汤大剂量降低脊髓与胃黏膜中5-HT含量的作用较百优解更为明显(4487.24±160.55 vs 4908.46±129.58、3736.45±242.36vs 3826.96±474.88),差异具有统�
目的研究对香豆酸组合物(total coumarins of Hedyotis diffusa,TCHD)对急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用及其机制。方法采用乙醇回流法提取TCHD,超高效液相色谱串联质谱系统(UPLC-MS/MS)检测其纯度。用不同浓度的TCHD(0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg·mL^(-1)),作用于对数生长期的Kasumi-1细胞、KG-1细胞、THP-1细胞、U937细胞和K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各细胞增殖;作用于Kasumi-1细胞24 h后,采用AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;运用流式细胞术检测药物作用后Kasumi-1细胞周期阻滞情况;Western blot法检测PARP、caspase-3、caspase-9、caspase-8蛋白活性的变化;以及CDK4/6、cyclin D_1、CDK2、p-CDK2、cyclin E、p21等细胞周期相关蛋白的变化。结果 TCHD在一定浓度范围内对AML细胞增殖有明显的抑制作用,对Kasumi-1、KG-1、THP-1、U937和K562细胞的IC_(50)(24 h vs 48 h)分别为0.077 vs 0.059(mg·mL^(-1))、0.083 vs 0.067(mg·mL^(-1))、0.096 vs 0.072(mg·mL^(-1))、0.087 vs 0.064(mg·mL^(-1))、0.096 vs 0.068(mg·mL^(-1)),对Kasumi-1的抑制作用表现最明显,并且呈时间-浓度依赖性(r=0.357,P<0.05)。不同浓度(0,0.02,0.04,0.06,0.08,0.10 mg·mL^(-1))的TCHD作用于Kasumi-1细胞株24 h后,凋亡率分别是(5.33±0.41)%、(7.99±0.45)%、(10.22±0.32)%、(20.10±1.99)%、(28.66±0.67)%和(33.24±2.12)%。0.02~0.06 mg·mL^(-1)的TCHD处理Kasumi-1细胞24 h后用流式细胞术检测到该细胞G_0/G_1期的比例依次为(51.43±3.21)%、(62.91±2.35)%和(76.42±4.14)%,与空白对照组[(35.8±5.25)%]比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。Western blot结果显示,不同浓度的TCHD能浓度依耐性激活caspase-8(P<0.01)、caspase-9、caspase-3和PARP(其余P<0.05),促进细胞色素C的表达;显著下调cyclin E、CDK6、CDK2、p-CDK2、cyclin D_1,和上调p21(P<0.01)。结论 TCHD抑制白血病细胞株Kasumi-1的增殖呈时间浓度依赖性,其凋亡机制一方面与其激活caspase-3、caspase-9�
