北京师范大学生命科学学院抗性基因资源与分子发育北京市重点实验室
- 作品数：20 被引量：62H指数：6
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- 利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INAIAP在肝癌细胞中的表达
- 2015年
- 为探究纺锤体蛋白INMAP的功能及其在细胞恶性增殖中发挥的作用,制备INMAP多克隆抗体。利用0.1 mmol/L IPTG于16℃诱导His-INMAP融合蛋白进行原核表达,SDS-PAGE及免疫印迹检测蛋白表达。4.0 mol/L尿素处理包涵体获得可溶性融合蛋白,镍亲和柱分离纯化融合蛋白抗原并检测蛋白浓度及纯度。以所获抗原免疫4只Balb/c小鼠,收集心脏抗血清。以纯化前、后的原核表达产物作为抗原,检测INMAP多克隆抗体的特异性。通过免疫印迹分析INMAP在正常肝细胞系L-02及5个肝癌细胞系(PLC、Hep G2、SUN449、SMMC-7721和BEL-7402)中的表达差异。结果显示,His-INMAP融合蛋白主要以包涵体形式存在,经4.0 mol/L尿素处理可获得可溶性目的蛋白,且纯化后的抗原纯度较高(94.1%)。INMAP多克隆抗体能与INMAP抗原特异结合。INMAP在6种肝细胞中具有多态性,除PLC外,在其他肝癌细胞中其基因表达水平显著下调。本研究制备的INMAP多克隆抗体特异性高,为INMAP基因功能的进一步研究奠定了基础。
- 朱艳康璟妍王钰孙乐张海江梁前进
- 关键词：肝癌细胞多克隆抗体包涵体
- 解除独行菜种子低温萌发停滞的温度响应蛋白筛选及表达分析被引量：7
- 2016年
- 新疆北部早春短命植物独行菜(Lepidium apetalum Willd.)种子萌发对温度响应独特:低温层积可以促进种子的萌发并显著增加整齐度,但在4℃条件下存在低温萌发停滞现象,而经25℃处理45-55 min及更长时间后,种子则可以在4℃条件下萌发。这种短暂的高温诱导解除低温萌发停滞的机制尚不清楚。本研究对处于低温层积前、萌发停滞状态及25℃高温处理解除低温萌发停滞后的种子进行蛋白质差异分析,筛选出解除独行菜种子低温萌发停滞的温度响应蛋白,采用定量q RT-PCR技术对相应基因的表达进行了验证。结果表明:低温层积前、后独行菜种子之间差异蛋白不显著;25℃高温处理45 min解除低温萌发停滞的种子与前二者种子蛋白差异显著。从中筛选出37个差异蛋白,其中14个上调,23个下调。选择显著上调的6个蛋白进行LC/MS-MS鉴定,并在生物信息学分析基础上,进一步选择其中的Cdc48E、Hsp17.6和Per12进行q RT-PCR验证,结果表明:这三个蛋白的基因在解除低温萌发停滞的种子中表达量极显著增高;随25℃处理时间增加,三个基因表达均呈上升趋势,且处理在45~55 min时上调表达达到最高,之后维持这一水平表达,这与经25℃处理30~60 min能够解除低温萌发停滞进行萌发的种子比率显著增加的特性相一致。以上结果说明Cdc48E、Hsp17.6和Per12可能与解除独行菜种子低温萌发停滞有密切关系,此结果为植物温度信号响应的研究提供了新的线索。
- 李萍萍曾卫军周茜赵惠新李艳红葛风伟祝长青赵君洁卢函赵和平
- 关键词：独行菜种子萌发
- 钙信号相关光遗传学工具开发及其在神经生物学中的应用
- 2022年
- 神经元通过动作电位及突触传递来使动物对内外刺激做出快速而准确的反应.钙信号通过介导或调控上述生理过程,成为神经元活动的标志.凭借高度的时空特异性,光遗传学成为探究神经元钙信号的一种理想手段.近年来,基于一系列光敏蛋白所开发出的光控钙信号工具,在不断完善和改进下,被成功地应用于神经生物学研究中.利用这些工具在多种模式动物中进行了低损伤性的光遗传学操作,实现了从神经元钙信号到动物记忆及行为的光操纵,体现了这类工具巨大的潜在应用价值.本文总结了钙信号相关光遗传学工具的最新研究进展,介绍了不同光控钙信号工具的设计原理及其在神经生物学中的应用,并对后续发展进行了展望.
- 王刘清何涟Yubin Zhou王友军
- 关键词：神经元钙信号
- 非整倍体中的反式调控机制
- 2022年
- 非整倍体内基因组不平衡会对整体基因表达产生反式调控,往往严重危害生物体的生长和发育.本文首先在总结了植物、果蝇和人类非整倍体的基因表达研究及反式调节机制的基础上,证明了反式剂量效应在非整倍体中具有普遍性.其次描述了组蛋白修饰、染色质重塑、DNA和RNA修饰以及lnc RNA在非整倍体反式调节过程中可能发挥的作用.最后重点讨论了剂量敏感调节因子和大分子复合物成员间的化学计量关系在此过程中的重要性.上述内容对于进一步了解非整倍体基因表达的调控机制具有重要意义.
- 张帅孙林
- 关键词：非整倍体
- 微丝骨架调控植物免疫机制的研究进展
- 2022年
- 植物病害是威胁农业生产的重要因素之一,会造成严重的粮食安全问题以及经济损失.植物对病原微生物的抵抗依赖于自身的先天免疫系统(plant innate immunity),主要包括分子模式触发免疫(pattern-triggered immunity,PTI)和效应因子触发免疫(effector-triggered immunity,ETI)两个层次.研究表明,微丝骨架在植物免疫中扮演重要角色,其通过自身动态重排来应对病原微生物的侵染,破坏宿主微丝会显著降低植物的抗病能力.本文重点介绍了植菌互作过程中的微丝骨架动态、参与调控植物免疫的微丝结合蛋白、调控微丝骨架的上游免疫信号以及微丝骨架动态在植物免疫中的生物学功能等的相关研究,并对微丝调控植物免疫的未来研究方向提出了展望.
- 王冰肖李杰婕
- 关键词：植物免疫微丝骨架
- m6A修饰对黑腹果蝇性别决定的研究进展
- 2023年
- N6-甲基腺苷(m6A)修饰是真核生物mRNA中最常见的甲基化修饰形式,在mRNA剪接、降解和翻译等过程中发挥着重要的作用.m6A修饰可通过调节RNA转录后加工过程影响细胞和生物体的正常生命活动,这其中包括生物的性别决定过程.已有研究结果表明:m6A甲基转移酶(Writers)和m6A结合蛋白(Readers)组分通过调控Sxl mRNA的可变剪接,进而参与黑腹果蝇性别决定过程,缺乏Writers和Readers组分会使雌性黑腹果蝇出现雄性特征;m6A修饰对鸡和比目鱼的性腺发育和性别分化均有影响,这也表明m6A修饰对性别决定的调控在自然界具有一定的普遍性,因此,进一步探究m6A修饰在生物性别决定过程中的分子调控机制具有十分重要的意义.
- 刘心雨孙林
- 关键词：表观遗传学性别决定黑腹果蝇
- 拟南芥APX家族基因在植物生长发育与非生物逆境胁迫响应中的作用分析被引量：14
- 2019年
- 活性氧造成的氧化胁迫是植物主要非生物逆境胁迫之一。在不利的生长条件下,植物细胞内的各种代谢过程不协调可导致过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)含量增加,从而对细胞造成多种威胁和伤害。抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)是植物中清除H2O2的一种重要酶,拟南芥(Arabidopsis thaliana)APX家族包括8个成员:APX1~APX6、sAPX和tAPX。本研究以拟南芥野生型和突变体为材料,对拟南芥不同发育时期和不同逆境胁迫下的8种APX基因表达模式进行了分析,同时研究了其相应的缺失突变体对盐、干旱和热胁迫的耐受性。mRNA差异表达模式分析显示:在拟南芥生长的第4~8周,APX1表达量最高,APX2表达量最低,APX4、sAPX和tAPX随着生长发育的时间进程表达量逐渐减少,但APX6表达量不断增加;在非生物胁迫下,APX1、APX2和APX6受热胁迫诱导表达明显,sAPX响应盐胁迫,APX3和APX5对盐、干旱和热胁迫均表现出明显的诱导表达应答。盐和干旱胁迫耐受性分析结果表明:无论是在拟南芥的萌发期还是成熟期,任何一个APX基因缺失均使抗逆性降低;在萌发期,与盐胁迫相比,突变体对干旱胁迫更敏感;在成熟期,与野生型和其他突变体相比,apx1和apx6对盐和干旱胁迫更加不耐受。生理指标检测结果显示:干旱胁迫10d后,所有突变体植株中的H2O2含量均明显高于野生型,其中apx1、sapx和tapx中最高;盐胁迫5d后,突变体中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量显著高于野生型;热胁迫2h就会导致apx1、apx2和apx6中H2O2和MDA含量大幅增加,其中在apx2中最高。本研究结果表明,拟南芥APX基因家族的8个成员均不同程度地参与植物生长发育及非生物胁迫响应的过程,在不同发育时期或逆境响应过程有特定的一种或几种APX发挥主要作用。
- 李泽琴李锦涛邴杰张根发
- 关键词：逆境响应
- 独行菜种子转录组的高通量测序及分析被引量：14
- 2016年
- 独行菜种子为我国传统常用中药,从中已提取出多种药用活性成分,但目前尚不清楚其次级代谢过程中这些活性物质合成的遗传基础。采用Illumina Hiseq^(TM)2000高通量测序平台对独行菜种子转录组进行测序,经de novo组装后获得40 303条unigene。进一步利用六大公共数据库进行同源比对,注释了27 935条unigene。研究发现,534个基因参与了独行菜次生物质的合成和代谢,其中在芥子苷、黄酮类和芪类化合物生物合成途径中的unigene分别有4个、19个和69个,在苯丙氨酸代谢途径中的unigene有92个。这些基因可能参与独行菜种子药性活性物质的生物合成,并分析获得了参与上述合成代谢途径的13个关键基因的同源序列。另外,从转录组序列中搜索到6 304个SSR位点,分布于5 306条unigene中,出现频率为15.64%。研究结果不仅为挖掘独行菜种子药用次生代谢物生物合成关键基因提供了基础数据信息,而且为独行菜遗传多样性研究和分子标记开发奠定了分子基础。
- 周茜赵惠新李萍萍曾卫军李艳红葛风伟赵君洁赵和平
- 关键词：独行菜转录组次生代谢SSR
- PI3K/AKT通过激活糖酵解促进巨噬细胞M1极化
- 2023年
- 目的探讨PI3K/AKT通路在巨噬细胞糖酵解中的作用,拟从代谢重编程的角度阐明巨噬细胞M1极化的机制。方法以脂多糖(LPS)处理RAW264.7细胞建立巨噬细胞M1极化模型;使用2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)抑制糖酵解过程;使用LY294002抑制PI3K/AKT活性;Seahorse XF糖酵解速率试剂盒检测巨噬细胞糖酵解水平;q-PCR方法检测巨噬细胞M1型标记(诱导型一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和白细胞介素1β),葡萄糖酵解相关基因(Glut1、HK2、Idha和Aldoa);Western blot方法检测p-p38、p38、p-ERK、ERK、p-p65、p65、IκB、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和GAPDH水平。结果在LPS诱导的RAW264.7细胞M1极化模型中,p-mTOR和p-AKT水平升高,HIF-1α表达水平升高,糖酵解相关基因水平升高,细胞外酸化率升高,表明LPS诱导细胞糖酵解水平升高;2-DG抑制糖酵解,降低M1极化相关因子的mRNA水平;LY294002抑制PI3K/AKT活性,降低p-mTOR水平和HIF-1α的蛋白水平,降低糖酵解相关基因水平,进而抑制RAW264.7糖酵解水平和M1极化过程。结论在RAW264.7细胞中PI3K/AKT信号通路通过激活mTOR信号通路,激活糖酵解,从而激活巨噬细胞M1极化过程。
- 马佳睿徐芳芷左惠演满永张曦月窦琳唐蔚青刘进黄秀清黎健
- 关键词：巨噬细胞糖酵解
- 蛋白磷酸酶4显性负性突变体介导的活性抑制改善棕榈酸诱导的肝细胞脂性凋亡
- 2022年
- 目的探讨抑制蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)活性对肝细胞脂性凋亡的影响。方法以400μmol/L的棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h建立肝细胞脂性凋亡模型;以西方饮食喂养C57BL/6J小鼠16w建立非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型;构建磷酸酶活性缺失的显性负性突变体AD-PP4RL腺病毒载体;转染AD-PP4RL至HepG2细胞腺病毒以抑制肝细胞中PP4的活性;尾静脉注射AD-PP4RL以抑制肝脏中PP4的活性;转染RAC1慢病毒至HepG2细胞中抑制RAC1的表达;BoDIPY染色检测细胞及组织中脂质蓄积情况;TUNEL染色检测细胞凋亡水平;免疫沉淀结合丝苏氨基酸磷酸酶活性检测法测定PP4活力;GTP酶活性检测试剂盒检测RAC1活性;Western印迹检测脂质代谢及脂性凋亡相关蛋白的表达水平。结果①在PA处理的HepG2细胞及西方饮食喂养诱导的NASH小鼠肝脏中PP4活性升高;②过表达磷酸酶活性缺失突变的腺病毒载体AD-PP4RL能有效抑制PP4活性;③抑制PP4活性降低PA诱导的HepG2细胞及NASH小鼠肝脏中脂性凋亡水平,下调脂性凋亡相关基因PUMA、Bim及c-caspase3的水平;④RAC1介导了在PP4在肝细胞脂性凋亡中的作用。结论抑制PP4活性可以通过抑制RAC1介导的JNK信号通路的激活,改善肝细胞脂性凋亡。
- 刘进窦琳陈皓马佳睿左慧演徐芳芷张曦月满永席超黄秀清
- 关键词：非酒精性脂肪性肝炎蛋白磷酸酶磷酸酶活性脂性凋亡
