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着丝粒的形成与控制研究进展被引量：1: 2002年; 着丝粒是保证染色体准确分离的基本结构 ,其形成与控制的机制却长期困扰着研究者 ,本文就近年国内外对着丝粒研究的若干进展作一综述。; 党颖; 关键词：着丝粒 DNA 蛋白质染色体

提高蛋白质和多肽类药物代谢稳定性的研究进展被引量：10: 2005年; 蛋白质和多肽类药物在体内存留时间的长短极大地影响到药物的使用剂量和治疗效果。本文综合现有的资料熏对包括蛋白酶的作用、物理和化学变化、给药方式等影响该类药物代谢稳定性的因素以及相应的解决方案作一综述。; 王宇新周晓巍党颖黄培堂; 关键词：多肽药物半衰期

Dc-Chol/DOPE介导siRNA对HeLa细胞的高效转染被引量：2: 2005年; 如何把小干涉RNA有效地递送到体内特异的靶细胞是RNA干涉技术发展中的主要障碍。阳离子脂质体DC-Chol/DOPE已经成功地用于DNA药物的体内递送。研究表明DC-Chol/DOPE介导siRNA对HeLa细胞的转染与商品化的转染试剂L ipofectam ine 2000一样高效,而对细胞的毒性则要小得多。; 党颖王应雄朱旭东郭威威王宇新黄培堂; 关键词：脂质体转染小干涉RNA

多肽TAT与核定位信号介导的蛋白质入核递送被引量：6: 2004年; 增强型绿色荧光蛋白与蛋白质转导结构域TAT、SV40大T抗原的核定位信号以融合蛋白的形式在大肠杆菌中表达 ,纯化后转导A431细胞 ,大部分细胞核内都可以观察到绿色荧光 ,说明TAT NLS可以有效介导蛋白质的入核递送。这种蛋白质递送系统可望用于转录治疗等研究领域。; 吴国清朱旭东刘娟党颖李少林黄培堂; 关键词：TAT 核定位信号增强型绿色荧光蛋白细胞核

利用TAT多肽增强腺病毒对细胞感染效率的研究被引量：1: 2005年; 蛋白转导多肽本身或携带生物大分子能以一种不明机制的方式高效地穿过真核细胞质膜并且几乎没有组织选择性。这为生物药物研究、基因治疗等领域带来了新的希望。最近有研究表明:来源于HIV-1的TAT蛋白的蛋白转导结构域多肽可以显著地提高重组腺病毒感染细胞和实验动物的效率。在对。HeLa且和Vero-E62种具有不同病毒易感性的细胞进行重组腺病毒感染实验时发现TAT多肽可以明显地提高重组腺病毒对HeLa细胞的感染及在细胞中外源报道基因的表达,但是对Vero-E6细胞却没有效果,表明TAT多肽增强重组腺病毒的感染与靶细胞类型有关,而并不像转导现象那样没有组织差异。这为蛋白转导技术在病毒载体中的应用提供了参考,但其中涉及的蛋白转导的机制有待进一步实验研究。; 党颖朱旭东王应雄李涛王宇新黄培堂; 关键词：蛋白转导 TAT蛋白细胞质膜感染细胞报道基因真核

脂质体DC-Chol/DOPE对HEK293FT细胞的高效转染及其在腺病毒制备中的应用被引量：4: 2005年; 重组病毒载体系统因为具有高效的基因转移能力得到了广泛应用,而病毒包装细胞的转染是重组病毒制备过程中的关键步骤。优化了脂质体DC-Chol/DOPE介导的转染常用的病毒包装细胞系HEK293FT的实验条件,比较了DC-Chol/DOPE、Lipofectamine2000和磷酸钙共沉淀法转染细胞的效率,并且比较了用DC-Chol/DOPE和磷酸钙共沉淀法转染293FT细胞制备重组腺病毒的结果,发现DC-Chol/DOPE对293FT细胞的转染效率以及最终收获的病毒滴度都远高于磷酸钙共沉淀法转染。所以,利用DC-Chol/DOPE转染293FT细胞制备重组病毒是一种简单、高效、成本低廉的方法。; 党颖朱旭东王应雄郭威威黄培堂; 关键词：脂质体转染腺病毒载体重组腺病毒转染细胞 DOPE

非洲绿猴层黏连蛋白受体的克隆、表达及纯化: 2006年; 目的:克隆、表达非洲绿猴层黏连蛋白受体(LR),对该受体蛋白进行纯化、复性研究。方法:采用RT-PCR从Vero-E6细胞总RNA中扩增非洲绿猴LR的cDNA序列,克隆到pGEM-TEasy载体上;将LR编码区插入到表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3);用IPTG进行诱导表达;用镍亲和柱进行亲和纯化;采用分部透析方法进行复性。结果:非洲绿猴LR基因序列与人LR的基因编码序列有16个碱基差异,但蛋白序列只有1个氨基酸的改变。LR蛋白以包涵体形式表达。采用分部透析方法可使部分蛋白得到复性。结论:克隆了首个非洲绿猴的相对分子质量为37000的LR的基因,与人LR基因序列有16个碱基差异,但其中15处都为同义突变,所以二者的蛋白质序列只有1个氨基酸改变,即293位D→E,提示LR在进化中具有很大的保守性。; 张清华朱旭东李少林许龙党颖李涛黄培堂; 关键词：层黏连蛋白受体基因克隆蛋白表达纯化

利用RNA干扰抑制HeLa细胞中CTCF基因的表达: 2006年; 目的:CTCF是一种多功能的转录因子,参与启动子调控、绝缘子功能和遗传印记等过程。利用RNA干扰技术抑制CTCF在体细胞中的表达。方法:以CTCF为靶基因,利用ShortCutRNaseⅢ切割体外转录的长双链RNA制备esiRNA,转染HeLa细胞,用RTReal-TimePCR检测CTCF的mRNA水平,用免疫印迹检测CTCF水平。结果:转染CTCFesiRNA后,细胞内的CTCFmRNA被抑制了70%左右,CTCF水平明显下降。结论:CTCF的esiRNA可以明显抑制CTCF在HeLa细胞中的表达,从而为进一步研究CTCF的未知功能打下了基础。; 何莉朱旭东党颖李涛黄培堂; 关键词：CTCF 转录因子 RNA干扰基因表达

小干涉RNA递送方法的研究: 本研究的目的在于探索有效的siRNA递送方法。在分析核酸递送载体系统中生物(主要是指病毒载体)和非生物两大类载体各自的优势与不足的基础上，分别对其传递系统的建立和在RNAi技术中的应用进行了试验研究。在非病毒载体研究方面...; 党颖; 关键词：RNA干涉阳离子脂质体

用RNaseⅢ制备的小干涉RNA降解SARS冠状病毒基因的细胞内转录物被引量：8: 2004年; SARS冠状病毒是引起重症急性呼吸综合症的主要原因 ,目前尚没有特效药物或疫苗对抗这种新病毒。RNA干涉是指双链RNA可以特异地降解细胞内同源基因的mRNA。在哺乳动物细胞中 ,<30bp的小双链RNA能引起RNA干涉 ,又可以避免干扰素反应。通过体外转录得到SARS病毒 3种基因RNA依赖的RNA聚合酶、刺突蛋白及核衣壳蛋白部分片段的长双链RNA ,然后用RNaseⅢ有限切割成长度 <30bp的小干涉RNA。同时把上述 3种基因片段分别连接到质粒pGL3 Control中 ,得到的 3个质粒pGL R、pGL S和pGL N可以分别在细胞内转录出荧光素酶 RNA依赖的RNA聚合酶、刺突蛋白、核衣壳蛋白的杂合mRNA。上述质粒分别和相应的小干涉RNA共转染HEK2 93F细胞 ,测定荧光素酶活性 ,结果小干涉RNA使相应质粒表达荧光素酶的活性显著下降 ;用逆转录定量PCR反应测量mRNA丰度。; 朱旭东党颖冯怡李涛黄培堂; 关键词：SARS冠状病毒刺突蛋白核衣壳蛋白

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