刘丹
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 供职机构：潍坊医学院医学检验学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠PAG内Nogo-A在痛觉调制过程中角色的探索被引量：2
- 2011年
- 目的:用脑内核团微量注射和免疫组化等方法,观察大鼠中脑导水管周围灰质(periaqueduc-tal gray,PAG)内"勿动蛋白"-A(Nogo-A)、P物质(substance P,SP)和降钙素基因相关肽(calcitoningene-related peptide,CGRP)表达的变化,研究探讨Nogo-A在痛觉调制过程中的角色,以及它在大鼠PAG内与CGRP、SP和内源性阿片系统在痛觉调制过程中的相互作用。方法:选用雄性SD大鼠32只,随机等分为4组:空白对照组8只,分别向PAG内注射0.9%生理盐水1μl;模型对照组、吗啡组和纳洛酮组各8只,首先单侧后爪掌心皮下注射1%的福尔马林0.1 ml复制炎症痛敏大鼠模型,3 d后分别向PAG内注射等量0.9%生理盐水、吗啡或纳洛酮各1μl,60 min后取大鼠大脑PAG区脑组织,采用免疫组化法观测各组大鼠PAG内Nogo-A、SP和CGRP免疫反应阳性神经元的表达差异。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PAG内Nogo-A的表达量显著降低(P<0.01),CGRP及SP显著增高(P<0.01);与模型对照组比较,吗啡组大鼠PAG内Nogo-A的表达量显著增高(P<0.01),CGRP及SP显著降低(P<0.05),而纳洛酮组PAG内Nogo-A的表达量显著降低(P<0.05),CGRP及SP显著增高(P<0.05)。结论:(1)炎症痛敏大鼠PAG内Nogo-A的表达量比正常降低,而CGRP及SP显著增高;(2)阿片肽可增加PAG内Nogo-A的表达,并降低CGRP及SP的表达。
- 孟蒂刘丹房春燕王燕李宁
- 关键词：中脑导水管周围灰质NOGO蛋白痛觉调制
- 大鼠PAG内Nogo-A和CGRP参与痛觉调制的研究被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨Nogo-A在痛觉调制过程中的作用以及它在大鼠中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)内与降钙素基因相关肽(CGRP)和内源性阿片系统在痛觉调制过程中的相互关系。方法:选用雄性SD大鼠32只,随机等分为4组:其中空白对照组8只,分别向PAG内注射0.9%生理盐水1μl;痛敏模型对照组、吗啡组和纳洛酮组各8只,首先单侧后爪掌心皮下注射1%的福尔马林0.1 ml复制痛敏大鼠模型,3 d后分别向PAG内注射等量0.9%生理盐水、吗啡和纳洛酮各1μl。60 min后取大鼠大脑PAG区,采用免疫组化法观测各组大鼠PAG内CGRP和Nogo-A免疫反应阳性神经元的表达差异。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PAG内CGRP的表达量显著增高(P<0.01),Nogo-A显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,吗啡组大鼠PAG内CGRP的表达量显著降低(P<0.05),Nogo-A显著增高(P<0.01),而纳洛酮组PAG中CGRP的表达量显著增高(P<0.01),Nogo-A显著降低(P<0.05)。结论:Nogo-A和CGRP参与了痛觉调制过程,但Nogo-A与CGRP之间有反向调节作用;Nogo-A与内源性阿片系统之间可能也存在一定的功能联系。
- 孟蒂刘丹房春燕王燕李宁
- 关键词：内源性阿片肽NOGO-A痛觉调制中脑导水管周围灰质
- 耻垢分枝杆菌调节蛋白TrpD的原核表达及纯化
- 2015年
- 目的克隆编码耻垢分枝杆菌调节蛋白TrpD的基因并在大肠杆菌中进行蛋白表达及纯化。方法利用PCR技术从耻垢分枝杆菌中扩增TrpD基因,构建重组表达质粒pET-32a(+)-TrpD;以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,在变性条件下对目的蛋白进行镍离子亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Westem blot鉴定目的蛋白的表达及反应原性。结果扩增了TrpD基因,克隆于表达载体pET-32a(+)中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确。经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)为56000的目的蛋白。结论已成功构建TrpD基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效蛋白表达及纯化,为进一步研究TrpD蛋白在结核病中的致病机制提供了依据。
- 刘艳伊正君付玉荣刘丹毕艳
- 关键词：耻垢分枝杆菌原核表达多克隆抗体
- 结核分枝杆菌higB基因的扩增及生物信息学分析被引量：6
- 2016年
- 目的扩增结核分枝杆菌(H37Rv)的higB基因,运用生物信息学方法预测其编码蛋白的生物信息学特征。方法采用PCR方法扩增higB基因并对扩增产物测序,通过在线Protparam、protscale、SignaIP 4.1、MotifScan、SWISS_MODEL等程序,分析higB基因编码蛋白的生物学特征。结果获得的higB基因全长378bp,与预期大小基本一致,基因序列与GenBank上公布的MTB标准株的核苷酸同源性为100.00%。higB蛋白共125个氨基酸,分子质量单位为14.429 8ku,理论等电点10.18,脂溶性系数77.36,不稳定系数35.67,预测该蛋白为稳定蛋白。higB蛋白无信号肽,其二级结构中β-转角占12%,无规则卷曲占34.4%,氨基酸序列中有3个潜在的B细胞抗原表位,4个Th细胞表位,5个磷酸化位点。结论成功扩增了结核分枝杆菌higB基因,通过生物学信息获得了其编码蛋白的信息学特征,为研究该蛋白的生物学功能和免疫活性奠定了基础。
- 董娜刘丹付玉荣伊正君
- 关键词：结核分枝杆菌扩增生物信息学分析
- 内源性阿片系统对痛敏大鼠PAG内CGRP和SP表达的影响
- 2010年
- 目的 本文旨在研究内源性阿片系统对痛敏大鼠模型中脑导水管周围灰质（PAG）内降钙素基因相关肽（CGRP）及P物质（substance P,SP）表达的影响.方法 选用雄性SD大鼠30只,将大鼠随机分为4组,其中空白组6只,分别向PAG内注射等量0.9%生理盐水（1μl）;模型对照组、吗啡组和纳洛酮组各8只,先分别足掌皮下注射1%的福尔马林0.1ml致痛敏,然后分别向PAG内注射等量0.9%生理盐水、吗啡和纳洛酮各1μl.最后取大鼠大脑PAG区,采用免疫组织化学的方法,观测各组大鼠PAG中CGRP及SP的表达差异.结果 炎症模型组大鼠PAG中CGRP及SP免疫反应阳性神经元表达与对照组比较显著增加（P＜0.05）;吗啡组PAG中CGRP及SP免疫反应阳性神经元表达与模型组比较显著降低（P＜0.05）;纳洛酮组PAG中CGRP及SP免疫反应阳性神经元表达与模型组比较显著增加（P＜0.05）.结论 吗啡组PAG中CGRP及SP免疫反应阳性神经元表达与模型组比较显著降低,说明外源性阿片肽减少了PAG中CGRP及SP的表达;纳洛酮组PAG中CGRP及SP免疫反应阳性神经元表达与模型组比较显著增加,说明内源性阿片肽可能减少了PAG中CGRP及SP表达.
- 刘丹孟蒂房春燕李宁
- 关键词：内源性阿片肽中脑导水管周围灰质
- 术前放疗对宫颈癌中Twist表达的影响及其相关性研究
- 2013年
- 目的探讨Twist与宫颈癌的相关性及术前放疗对其表达的影响。方法从2010年6月~2013年6月在我科住院的宫颈癌患者中筛查符合纳入标准的病例40例。取其宫颈癌放疗前活检钳取组织标本、放疗并手术后组织标本,分为放疗前组、放疗后组,采用免疫组织化学方法检测Twist的表达,并观察表达的变化。结果Twist的表达在放疗后与放疗前分别为75%和45%,有明显减弱趋势,差异有显著性(x^2=7.5,P<0.05)。结论宫颈癌的发生发展与Twist有密切关系,宫颈癌为放疗敏感性肿瘤,Fwist对放射线诱导的宫颈癌细胞凋亡具有重要的调控作用。
- 刘丹马丽丽
- 关键词：宫颈肿瘤TWIST放疗免疫组化
- 结核分枝杆菌higA基因的扩增及生物信息学分析
- 2017年
- 目的对结核分枝杆菌的higA基因进行扩增,同时利用生物信息学方法分析其编码蛋白的结构和功能。方法从结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA中扩增higA基因,对扩增产物进行测序。利用生物信息学网站和软件分析higA蛋白的理化性质、信号肽、空间结构、抗原表位等。结果 higA基因扩增产物与预期一致,大小为450bp。higA蛋白共149个氨基酸,理论等电点7.93,脂溶性系数94.30,不稳定系数36.57,预测该蛋白为稳定蛋白。higA蛋白无信号肽,含10个磷酸化位点和多个潜在的抗原表位。结论成功扩增出结核分枝杆菌higA基因。
- 董娜刘丹付玉荣伊正君
- 关键词：基因扩增生物信息学分析
- 结核分枝杆菌抗毒素higA的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2015年
- 目的克隆编码结核分枝杆菌抗毒素基因hig A并在大肠杆菌中表达,纯化hig A蛋白后,制备兔抗hig A的多克隆抗体。方法利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增hig A基因;构建重组表达质粒p ET-32a(+)-hig A;筛选出阳性重组质粒后,转化大肠杆菌BL21,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;利用SDS-PAGE与Western blot法鉴定目的蛋白的表达;以纯化的hig A蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗hig A的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定。结果成功扩增出了hig A基因,克隆于载体p ET-32a(+)质粒中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确;转化大肠杆菌BL21后能成功诱导hig A蛋白[相对分子质量(Mr)36 630]的表达;利用纯化的hig A蛋白免疫新西兰大白兔后,能有效地刺激特异性hig A抗体的产生,抗体的效价达到1∶3200以上。结论成功在大肠杆菌中表达出hig A蛋白,并制备出效价及特异性良好的兔抗hig A多克隆抗体。
- 刘丹伊正君付玉荣李书轻杨珊珊
- 关键词：结核分枝杆菌多克隆抗体
- 结核分枝杆菌毒素蛋白higB的原核表达及分析
- 2015年
- 目的克隆编码结核分枝杆菌毒素基因higB并在大肠杆菌中表达。方法利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增higB基因;构建重组表达质粒pET-32a(+)-higB;筛选出阳性重组质粒后转化大肠杆菌,诱导目的蛋白表达;利用SDS-PAGE与Western-blot鉴定目的蛋白的表达。结果成功扩增出了higB基因,克隆于载体pET-32a(+)质粒中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确;转化大肠杆菌BL21后higB蛋白没有发生表达。结论已成功构建结核分枝杆菌毒素基因higB的原核表达栽体,但大肠杆菌BL21不能表达出higB蛋白。
- 刘丹伊正君付玉荣李书轻杨珊珊
- 关键词：结核分枝杆菌蛋白表达
