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含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(SjFABPc)基因DNA重组质粒pCD-SjFABPc在哺乳动物细胞中的表达被引量：6: 2000年; 目的　观察裸DNA重组质粒pCD -SjFABPc在体外转染HepG2细胞以及质粒DNA免疫鼠肌组织中的表达 ,为进一步应用该质粒进行DNA免疫实验奠定基础。方法　用脂质体介导DNA转染法将pCD -SjFABPc转染贴壁细胞HepG2 ,G418加压筛选获得阳性克隆细胞并传代培养 ,SDS -PAGE及Western -blot鉴定目的基因在HepG2细胞中的表达 ;将pCD -SjFABPc质粒肌注免疫BALB/c小鼠 ,于 6 5d后取注射部位的肌组织约 0 3cm3 大小 ,经固定、包埋、切片 ,免疫酶组织化学染色 ,显微照相记录。结果　在被转染的HepG2细胞裂解样品中 ,呈现一分子量约 14kDa大小且能被感染兔血清特异识别的条带 ;免疫组化结果显示免疫组切片标本中有特异性阳性反应。结论　pCD; 冯新港余新炳吴忠道周俊梅; 关键词：日本血吸虫脂肪酸结合蛋白重组质粒

用表达序列标签（EST）法发现日本血吸虫新基因: ＜正＞目的:寻找日本血吸虫新基因,充实血吸虫基因组计划的研究.方法:随机挑选日本血吸虫（中国江西株）成虫cDNA文库克隆,培养后提取噬菌体DNA作模板,进行PCR反应扩增,将扩增产物部分测序产生表达序列标签（EST）,并...; 李焱余新炳吴忠道李晖婷郑亦男周俊梅; 关键词：日本血吸虫成虫; 文献传递

用表达序列标签(EST)法发现日本血吸虫新基因的研究被引量：2: 2001年; 李焱余新炳吴忠道李辉婷郑亦男周俊梅; 关键词：日本血吸虫基因组计划 EST DNA

日本血吸虫大陆株卵黄铁蛋白基因重组及其真核表达: 2001年; 目的　构建日本血吸虫卵黄铁蛋白基因 (Sj Yol Fer)的真核表达重组质粒 p L Yol Fer,转染 Hela细胞进行表达 ,并对表达产物进行鉴定。　方法　用 PCR法从日本血吸虫大陆株成虫 c DNA文库中扩增目的基因片段 ,经 RNA斑点杂交显示转录差异 ,然后定向克隆入表达载体 p L XSN。转染重组体到 Hela细胞中进行表达 ,并用 SDS- PAGE和 Westernblot分析表达产物。　结果　PCR扩增产物大小约 6 0 0 bp左右 ,与雌虫 RNA的杂交信号明显强于雄虫。获得重组质粒p L Yol Fer,特异性表达产物约为 2 1ku,能被日本血吸虫感染兔血清及小鼠血清识别。　结论　为进一步免疫原性实验奠定了基础。; 周俊梅余新炳吴忠道李焱郑亦男; 关键词：日本血吸虫基因克隆基因表达

日本血吸虫26ku谷胱甘肽硫转移酶基因的克隆及分析被引量：2: 2000年; 【目的】扩增日本血吸虫 2 6ku谷胱甘肽硫转移酶 (Sj2 6GST)基因片段 ,构建其重组原核载体 ,以研制SjGST重组克隆。【方法】根据已知基因序列设计一对引物 ,运用RT PCR技术扩增Sj2 6GST目的基因cDNA片段 ,将其克隆到 pBlue script(KS)质粒中 ,并经酶切、PCR和测序鉴定。【结果】获得GST pBluescript(KS)重组克隆。【结论】本实验获得Sj2 6GST重组克隆 ,为进一步研制基因工程蛋白疫苗作准备。; 李焱余新炳吴忠道冯新港罗树红徐劲周俊梅郑亦男; 关键词：日本血吸虫基因扩增

日本血吸虫（中国大陆株）表达基因的EST序列测定及同源性分析: ＜正＞目的:运用表达序列标签技术（EST方法）,从Sj cDNA文库中分离、监定和测定血吸虫表达基因序列.方法:应用EST方法,从SjcDNA文库中随机挑选出单个重组克隆进行PCR直接序列分析,通过互联网将获得的EST序...; 李晖婷余新炳吴忠道李焱郑亦男周俊梅; 关键词：CDNA文库表达基因表达序列标签; 文献传递

以pcD-IL-2为基因佐剂的含日本血吸虫SjFABPc基因真核表达重组质粒裸DNA免疫小鼠的研究被引量：17: 2001年; 目的　在小鼠模型中评价含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白分子基因的真核表达质粒pcD -SjFABPc与含IL - 2基因佐剂的质粒构建体 pCD -IL - 2经肌注、皮内途径导入机体后所诱生的免疫反应。方法　碱裂解法大量制备重组质粒 pcD-SjFABPc、pCD -IL - 2重组质粒及空质粒 pcDNA3,经肌肉及皮内注射免疫BALB/c小鼠 ,每只鼠注射 10 0 μg ,两周后同量加强免疫一次。分别于末次免疫后的第 2 0d、5 0d及 65d用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖与NK细胞活性 ,并用双夹心ELISA测定血清细胞因子IL - 2、IFN -γ及IL - 10含量 ;ELISA法测定免疫鼠血清IgG抗体。结果　NK细胞杀伤活性及脾淋巴细胞增殖测定 ,加佐剂组 ( pcD -SjFABPc联合 pCD -IL - 2组 )较不加佐剂组 ( pcD -SjFABPc组 )NK细胞杀伤及脾淋巴细胞增殖活性皆增加 (P <0 .0 5 )。两途径三次检测IL - 2及IFN -γ值均明显高于NS对照组和空质粒组 ,且加佐剂组的明显高于不加佐剂组的 (P <0 .0 5 ) ;不同途径各组IL - 10值与NS及空质粒对照组的比较则无显著性差别 (P >0 .0 5 )。注射质粒后 2 0d和 5 0d ,未测出抗体 ;免疫后 65d检测 ,pcD -SjFABPc和pcD -SjFABPc联合 pcD -IL - 2免疫组的OD值明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,而该两组OD490 值之间无显著性差异 (P >0 .0; 冯新港余新炳吴忠道周俊梅; 关键词：日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 DNA免疫

日本血吸虫特异性抗原基因的筛选和EST序列测定被引量：3: 2000年; 目的　筛选和鉴定日本血吸虫特异性抗原基因。方法　采用日本血吸虫病流行区对再感染具有抵抗力的个体混合血清 ,对 Sjc DNA文库进行免疫学筛选 ,对获得的阳性克隆 c DNA插入片段进行 PCR鉴定和 PCR直接序列分析 ,通过互联网将获得的 EST序列送入 NCBI Gen Bank进行同源性检索 ,并将发现的未知基因 EST序列送入 NCBI db EST,以获得 EST编号和 Gen Bank进入编号。结果　通过对大约 2 .5× 10 4个噬菌体斑的免疫学筛选 ,获得了 5个阳性克隆 ,PCR直接序列分析表明 ,在这 5个阳性克隆中 ,1个为编码 Sj GST的基因克隆 ,另外 4个为 S.j未知抗原基因克隆 ,其 EST序列已被 Gen Bank接受 ,并获得进入编号。结论　应用对再感染具有抵抗力的个体混合血清 ,从 Sjc DNA文库中筛选到 4个日本血吸虫未知抗原基因重组克隆。; 吴忠道余新炳李焱周俊梅郑亦男; 关键词：日本血吸虫 CDNA文库抗原基因 EST序列

日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫小鼠的保护性研究被引量：5: 2001年; 目的　研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因 DNA免疫小鼠诱导的保护性免疫力。方法　将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒 p L XSN- Fer l经左后腿肌肉注射 BAL B/ c小鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 2周。末次免疫后 5周以血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击感染后 6周计数成虫负荷及肝组织虫卵数和死亡卵百分比。设空质粒免疫组为对照组。结果　 p L XSN- Fer l免疫小鼠 ,诱生的Ig G亚类主要是 Ig G2 a和 Ig G2 b;免疫组可产生较高水平的 Ig A和 IFN- γ应答。 p L XSN- Fer l免疫小鼠诱生一定程度的减虫率 34 .0 8% ,减卵率 36 .83% ,死亡卵百分比为 30 .13%。结论　 p L XSN-Fer l免疫小鼠能产生较明显的保护性免疫力 ,值得进一步深入研究。; 周俊梅余新炳吴忠道郑亦男卞国武; 关键词：日本血吸虫保护性免疫力小鼠

日本血吸虫表达基因EST测定及同源性分析被引量：1: 2000年; 【目的】建立日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)表达基因的大规模随机测序体系。【方法】从SjcDNA文库中随机挑选出单个重组克隆 ,扩增出cDNA插入片段 ,采用PCR直接序列测定方法对插入片段 5′端进行部分序列测定。通过互联网将获得的表达序列标签 (expressedsequencetags ,EST)送入WHO血吸虫基因库进行同源性检索。【结果】完成了 16 0个Sj表达基因EST序列测定 ,获得了 12 6个可用于分析的EST ,并在GenBank登录。 10个为Sj已知编码基因 ,其中 3个为Sj抗原基因全长cDNA。【结论】建立了Sj表达基因EST测序及同源分析体系 ,为进一步开展Sj表达基因的研究奠定了基础。; 吴忠道余新炳李焱郑亦男李晖婷周俊梅; 关键词：序列同源性

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