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夏芃芃: 作品数：27 被引量：63H指数：5; 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目转基因生物新品种培育专项更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>

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猪氨肽酶N基因的克隆、表达系统构建和鉴定被引量：5: 2013年; 为探讨猪氨肽酶N(APN)作为产肠毒素性大肠杆菌F4ac的受体蛋白的可能性,根据GenBank上的猪APN mRNA序列设计合成特异性引物,从新鲜的猪小肠组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链,RT-PCR扩增猪APN全长基因,并分别构建真核表达和原核表达系统。结果表明:APN基因已正确插入pcDNA3.1真核表达载体和pET-28a(+)原核表达载体,SDS-PAGE结果证明重组蛋白为包涵体,且纯化产物在110ku处有单一明显条带。pcDNA3.1-APN和pET28a-TAPN双系统的成功构建以及APN蛋白的成功表达,为进一步研究和验证该蛋白作为猪F4ac受体候选蛋白的可能性奠定基础。; 夏芃芃宋玉洁段进坤朱国强; 关键词：真核表达原核表达

大肠杆菌Nissle 1917隐秘质粒消除方法的建立被引量：2: 2016年; 质粒消除旨在获得无质粒菌株,是对益生菌进行遗传改造所需的一项重要技术。本试验建立在质粒不相容性的基础上,引入自杀性载体pRE112作为辅助工具,使用分子生物学方法构建重组自杀质粒pMUT1-pRE112和pMUT2-pRE112,将其分别导入携带2个大隐秘质粒pMUT1和pMUT2的益生菌大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN),利用重组自杀质粒去除EcN内原有隐秘质粒并在含有10%蔗糖的LB培养基上实施自杀质粒自身消除。结果试验成功获得EcN无质粒克隆菌株(Escherichia coli Nissle 1917cured of its two cryptic plasmids pMUT1and pMUT2,EcNc),为优质益生菌EcN更好的潜在应用研究奠定基础。; 杨颖区炳明朱军杨溢张倩杨玮枫夏芃芃朱国强; 关键词：质粒消除

产肠毒素大肠杆菌菌毛F4ac受体的研究进展被引量：4: 2014年; 仔猪腹泻是影响养猪业发展的一个重要疾病之一,其致死率占仔猪总死亡率的11.5%~29.5%。而产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4（或K88）是导致新生或断奶仔猪腹泻的重要病原菌,可引发仔猪黄痢、白痢、水肿病和断奶仔猪腹泻等多种疾病,并大肠杆菌F4致病性由两个因素决定。; 夏芃芃朱国强; 关键词：产肠毒素大肠杆菌断奶仔猪腹泻受体菌毛仔猪黄痢致死率

大肠杆菌Nissle 1917株鞭毛展示6His标签的构建及相关生物学特性分析被引量：1: 2016年; 为探索大肠杆菌Nissle 1917株(EcN)鞭毛展示的应用,本研究以重组质粒p UC18-fli C为模板,反向PCR产物经DpnⅠ、Exnase^(TM)Ⅱ重组环化,将6His标签基因分别插入无质粒大肠杆菌Nissle 1917(EcNcured of its two cryptic plasmids p MUT1和p MUT2;EcNc)fli C高变区774 bp^775 bp和792 bp^811 bp之间,构建嵌合鞭毛基因片段fliC01和fliC02。分别将其克隆于自杀性载体pRE112中,构建重组质粒pRE112-fliC01和pRE112-fliC02,并分别转化至EcNc中。通过一次重组和二次重组将嵌合鞭毛基因整合于EcNc基因组中,构建无抗性筛选的重组菌株EcNc fliC01和EcNc fliC02。对重组菌株进行生长状况、鞭毛形成以及体外细胞黏附试验和小鼠体内定植试验检测,结果表明EcNc fliC01和EcNc fliC02的生长未受影响,表达的嵌合鞭毛能够被H1多抗或His-Tag单克隆抗体识别并组装形成鞭毛丝;重组菌对IPEC-J2细胞的黏附能力及小鼠肠道定植能力与亲本株EcNc相比无显著性差异。本实验结果为进一步研究EcNc鞭毛展示技术应用于活疫苗研制奠定了基础。; 杨颖区炳明杨溢张倩杨玮枫夏芃芃朱国强; 关键词：鞭毛蛋白

肠炎沙门菌sef14基因缺失株生物学功能被引量：1: 2022年; 构建了肠炎沙门菌参考株SE50336的SefA主要亚单位编码基因sefA的缺失株SE50336ΔsefA,进一步探究野生株及SEF14菌毛缺失株的生物学功能。以SE50336为模板,利用λ-red同源重组技术构建sefA缺失株,通过绘制生长曲线、生物被膜测定试验、刚果红-考马斯亮蓝无盐培养基菌落表型试验、RT-qPCR(real-time quantitative polymerase chain reaction)、人结肠腺癌上皮细胞(Caco-2)的体外黏附测定来检测和比较2种菌株的生物学特性,并利用野生株和缺失株分别攻毒小鼠,探究SEF14菌毛对肠炎沙门菌致病力的影响。结果显示,野生株及缺失株生长情况无明显差异。与野生株相比,ΔsefA缺失株的生物被膜形成能力有所下降;菌落表型试验中野生株表现出典型的rdar(red,dry and rough)表型,而ΔsefA缺失株表现出saw(smooth and white)表型;RT-qPCR试验中,野生株的生物被膜形成主要关联基因csgA、bcsA、pgaC、fimA的转录量均显著高于ΔsefA缺失株。但缺失株与野生株对于Caco-2上皮细胞的黏附差异不显著(P=0.41)。小鼠体内致病性试验显示,野生株的LD;(10 CFU)显著低于缺失株(17.78 CFU),表明sefA亚单位编码基因缺失株减弱了肠炎沙门菌对BALB/c小鼠的毒力。上述数据和试验结果为进一步研究SEF14菌毛的生物学功能及其致病性提供了基础。; 顾宣强侯千禧刘家奇李雅倩夏芃芃段强德朱国强; 关键词：肠炎沙门菌生物学功能

细菌Ⅶ型分泌系统的研究进展被引量：1: 2016年; 蛋白分泌在调控细菌与周围环境的互相作用中起着重要的作用。革兰氏阴性菌的分泌涉及内膜和外膜的跨膜转运,已知的6种蛋白分泌系统均显示出相当可观的多样性。而革兰氏阳性菌除了部分蛋白通过其中的几种分泌系统来分泌外,其还进化、发展出了一种特殊的蛋白分泌系统,就是Ⅶ型分泌系统（TypeⅦSecretion System,; 王一亭夏芃芃汪业军朱国强; 关键词：分泌系统蛋白分泌跨膜转运革兰氏阳性菌分枝菌酸同源性

产肠毒素大肠埃希菌sfmH基因的原核表达及多克隆抗体的制备: 2018年; 以产肠毒素大肠埃希菌F4ac(F4ac^+ETEC)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Sfm菌毛操纵子顶端黏附素sfmH基因,然后将PCR产物插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建出阳性重组质粒pET-28a(+)-sfmH,再将其导入大肠埃希菌BL21中进行诱导表达。通过对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间进行探究,发现重组菌在0.8mmol·L^(-1)IPTG、25℃诱导7h时蛋白表达量最高,且重组蛋白以包涵体形式存在,大小约为26ku。将重组蛋白在最优诱导条件下进行大量表达并纯化,利用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得SfmH多克隆抗体(简称多抗),通过ELISA和Western blot试验对多抗效价和特异性进行鉴定。这一研究构建并获得了高纯度的融合蛋白rSfmH,将其免疫小鼠后成功获得鼠源高免血清,为进一步探究Sfm菌毛的功能奠定了研究基础。; 丁雪燕岑雪田延吴文文夏芃芃朱国强; 关键词：原核表达

肠杆菌科丝氨酸蛋白酶的研究进展: 2016年; 丝氨酸蛋白（Serine protease autotransporter of Enterobacteriaceac，SPATE）是革兰氏阴性肠杆菌分泌的蛋白性质的毒力因子。其主要功能在于降解宿主细胞内或细胞外基质，从而引发一系列对宿主细胞的不利应答反应。; 宋玉洁区炳明夏芃芃朱国强; 关键词：丝氨酸蛋白酶肠杆菌科革兰氏阴性细胞外基质毒力因子细胞内

研究生值班制度在高校兽医检测专业实验室建设管理中的实践: 2019年; 高校兽医检测实验室面对社会接收样品,提供兽医诊断和病原检测服务,对样品接收、处理有时效性要求;同时对整个实验室的人、机、料、法、环等要素有着较高要求。依靠高校全职工作人员对专业兽医检测实验室进行全面管理,限于效率不高、样品接收不够及时、周末及假期无人值班、环境要素有时无人监控等问题。通过对研究生值班制度的摸索、实践,使得以上问题得到基本解决。本文介绍了该制度运行模式、实行要点,总结了相关的管理经验及体会。; 羊扬张欣王志成夏芃芃夏芃芃孟霞段强德朱国强

人源产肠毒素大肠杆菌疫苗的研发进展被引量：5: 2016年; 腹泻是全球范围内引起5岁以下幼童死亡的第二大病因,而产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起腹泻的最常见病原菌,其产生的细菌定植因子（CFs）和肠毒素是关键的毒力因子。CFs介导细菌黏附宿主小肠上皮细胞并完成定植,产生热敏肠毒素（LT）和热稳定肠毒素（ST）破坏宿主上皮细胞内的体液平衡,使体液和电介质过量分泌从而导致腹泻。预防ETEC腹泻的首选方法是使用能激发宿主产生抗黏附素免疫力和抗肠毒素免疫力的疫苗,阻断ETEC黏附和定植并中和肠毒素。目前一种名为Dukoral（R）的霍乱疫苗因能刺激机体产生抗热敏毒素免疫,已经被一些国家批准用于短期保护和预防旅行者腹泻。新型试验性ETEC候选疫苗正在研发中,旨在提供保护期长、反应谱广的抗ETEC感染免疫保护力。本文针对疫苗研发的关键问题和研究现状作一综述,并对未来的研究作出展望。; 夏芃芃孟宪臣孟宪臣; 关键词：腹泻免疫疫苗

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