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一种简便RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒开发及应用: 本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种用于检测RNA结合蛋白免疫沉淀的试剂盒和使用该试剂盒检测RNA结合蛋白免疫沉淀方法。该试剂盒包括TBST缓冲液、RIPA裂解液、Protein G/A磁珠、RNase抑制剂。所述TB...; 宗志红孟晓娜王思亓关雪吴彦菊李岩

uPA合成抑制剂阿米洛利对卵巢癌细胞迁徙、侵袭能力的影响被引量：1: 2015年; 目的探索urokinase-type plasminogen activator(u PA)合成抑制剂阿米洛利(氨氯吡咪,Amiloride)在卵巢癌细胞迁徙、侵袭过程中的作用。方法检测阿米洛利处理后卵巢癌细胞OVCAR3的迁徙及侵袭能力变化,RT-RCR及Western Blotting检测u PA表达水平变化。结果卵巢癌细胞OVCAR3经阿米洛利处理后u PA m RNA及蛋白表达水平及细胞迁徙、侵袭能力显著下降,且呈浓度依赖性。结论 u PA合成抑制剂阿米洛利可能通过下调u PA表达水平抑制卵巢癌细胞迁徙及侵袭,是一种潜在的抑制卵巢癌发展的药物。; 宗志红赵林孟晓娜陈说赵杨; 关键词：卵巢癌 U PA 阿米洛利细胞迁徙细胞侵袭

慢性铝暴露对大鼠海马细胞外调节蛋白激酶2及cAMP反应元件结合蛋白mRNA和蛋白表达的影响被引量：4: 2012年; 目的通过观察细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)通路的变化,研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆功能的影响机制。方法将80只初断乳清洁级雄性Wistar雄性大鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和2、4、6 mg/ml三氯化铝染毒组,每组20只。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒3个月。测定大鼠脑铝和血铝含量,采用Western Blot法和Real-time PCR(RT-PCR)法分别检测海马组织中ERK2和CREB mRNA及蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各浓度铝染毒组大鼠血铝和脑铝含量均升高,海马组织中ERK2和CREB蛋白及mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着铝染毒浓度的升高,大鼠血铝和脑铝含量呈上升趋势,海马组织中ERK2和CREB蛋白及mRNA的表达水平均呈下降趋势。结论慢性铝暴露可能通过抑制大鼠海马中ERK2/CREB通路而损伤大鼠的学习记忆能力。; 王彪毕强孟晓娜崔鑫宗志红邢伟; 关键词：学习记忆 CAMP反应元件结合蛋白

Rab13通过影响PKA活性调节occludin及F-actin在大鼠血睾屏障的分布被引量：1: 2015年; 目的探讨Rab13-PKA通路对大鼠血睾屏障功能的调节。方法首先构建靶向大鼠Rab13的shRNA载体,通过大鼠睾丸内注射转染Rab13 shRNA,Western印迹检测Rab13体内沉默效果及沉默后BTB相关连接蛋白表达改变,放射自显影检测睾丸组织内PKA活性变化,睾丸组织冰冻切片免疫荧光染色及鬼笔环肽染色分别观察occludin及肌动蛋白丝在生精上皮的分布。结果 Rab13 shRNA睾丸内转染后Rab13表达量与对照shRNA转染相比下降约70%(P<0.01),而BTB相关连接蛋白表达无变化;Rab13沉默后PKA活性与对照组相比有明显升高(P<0.01);免疫荧光结果表明,Rab13沉默后occludin在VIII期生精上皮的分布显著高于对照组,而在其他期别生精上皮中则无显著变化;鬼笔环肽染色显示Rab13沉默后F-actin在BTB处的分布明显增强;此外,occludin及F-actin的分布变化可被PKA抑制剂H89所拮抗。结论 Rab13可通过影响PKA活性调节大鼠BTB紧密连接蛋白occludin及F-actin的分布,从而参与调节BTB功能。; 宿文辉贾晓宇孟晓娜; 关键词：血睾屏障蛋白激酶A

Rab13-蛋白激酶A途径调节体外培养支持细胞屏障通透性的研究被引量：2: 2014年; 目的:研究Rab13蛋白在支持细胞(SC)屏障功能调节中的作用。方法:体外分离培养大鼠睾丸SC,Western blotting检测Rab13的表达,免疫共沉淀检测Rab13与蛋白激酶A(PKA)催化亚基间的相互作用;睾酮处理建立SC体外屏障增强模型,Western blotting和放射自显影法分别检测Rab13的表达及PKA活性变化,并通过跨上皮电阻(TER)检测PKA活性对SC屏障功能的影响;小干扰RNA(siRNA)干扰Rab13表达,检测其对PKA活性及SC屏障功能的影响。结果:Rab13的表达随SC屏障的建立逐渐降低,且与PKA催化亚基间存在相互作用;睾酮处理可使Rab13的表达下降而PKA活性升高;Rab13 siRNA干扰可导致PKA活性升高,且SC屏障功能增强;抑制PKA活性可以拮抗睾酮或Rab13 siRNA对屏障功能的增强作用。结论:Rab13可通过调节PKA活性参与调节SC屏障通透性。; 宿文辉孟晓娜吕孟竹

铝暴露对大鼠海马神经元长时程增强和Na^＋通道表达的影响被引量：1: 2008年; 海马神经元长时程增强（LTP）被认为与学习和记忆的形成有关．Na^＋在诱导LTP产生的过程中十分重要．实验发现，慢性铝暴露可以影响大鼠海马神经元LTP的产生，随着铝暴露浓度的增加，LTP的幅值逐渐降低．RT-PCR法对大鼠海马神经元9种类型Na^＋通道（即Nav1．1～Nav1．9）的mRNA进行检测发现，除Nav1．4和Nav1.8Na^＋通道mRNA在大鼠海马神经元中未见表达外，慢性染铝组大鼠海马神经元7种Na^＋通道mRNA表达均明显增高（P〈0.05），蛋白印迹法对一种脑型Na^＋通道（Nav1．2）蛋白检测证明，Na^＋通道蛋白表达亦明显升高．结果提示，铝进入神经元后，可能通过影响Na^＋通道蛋白的表达而影响了突触后神经细胞的去极化，进而影响了LTP的诱导过程，从而预示铝的暴露可能损害大鼠学习和记忆能力．; 宗志红王彪王军唐秋实孟晓娜谢鑫邢伟; 关键词：铝海马长时程增强

睾酮通过抑制Rab13表达影响支持细胞屏障通透性被引量：2: 2014年; 探讨Rab13 GTPase对血睾屏障(blood testis barrier,BTB)通透性的调节机制。体外分离培养20 d龄大鼠睾丸支持细胞,睾酮处理后测定跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TER),FITC-鬼笔环肽染色分析F-actin分布,并采用Western印迹检测Rab13在睾酮处理前后的表达变化;si RNA干扰培养支持细胞中Rab13的表达,Western印迹检测沉默效果并检测连接蛋白表达变化;TER测定Rab13沉默前后上皮屏障功能改变,F-actin染色分析Rab13沉默对肌动蛋白丝分布的影响。结果显示,睾酮处理可使体外支持细胞屏障TER值升高,F-actin在膜下聚集增强,且Rab13在睾酮处理后表达量明显降低;Rab13 si RNA处理不影响连接蛋白质的表达,但可引起F-actin在细胞连接处的分布增强,导致体外BTB屏障功能增强。表明Rab13可通过调节F-actin的排布影响体外BTB通透性。; 宿文辉孟晓娜贾晓宇; 关键词：血睾屏障支持细胞

Yap通过长链非编码RNA MALAT1调控肝癌细胞增殖被引量：2: 2017年; 目的观察Yap对肝癌细胞增殖的影响及可能机制。方法应用Western blot与q RT-PCR方法检测Yap与MALAT1蛋白在肝癌组织及癌旁正常组织中的表达,应用CCK-8法检测si Yap后肝癌细胞增殖活力的改变以及MALAT1的表达变化,过表达MALAT1检测si Yap后肝癌细胞增殖活力的改变。结果 Yap与MALAT1蛋白在肝癌组织中表达水平均高于癌旁正常组织,沉默Yap基因的表达后肝癌细胞增殖活力受到抑制,MALAT1的表达水平减少,过表达MALAT1后阻断Yap表达,Yap对肝癌细胞增殖抑制作用消失。结论 Yap参与肝癌细胞增殖可能与调控MALAT1相关。; 孟晓娜宿文辉王宁徐荧; 关键词：肝癌增殖

IL-1β对小鼠软骨细胞中c-myc蛋白表达的影响被引量：4: 2013年; 目的通过观察不同浓度IL-1β对软骨细胞c-myc蛋白表达的影响,探讨IL-1β在骨关节炎软骨损伤中的作用及机制并寻找有效治疗骨关节炎的方法。方法选用20只C57BL/6小鼠,体外进行关节软骨细胞的分离及原代培养;将原代培养的软骨细胞分为4组:A组为空白对照组,采用含10%FBS的RPMI-1640常规培养基培养;B、C、D组为IL-1β处理组,分别用含有1、10和100 ng/ml IL-1β的常规培养基培养,12 h后进行实验分析。采用Western blot和流式细胞仪检测法,观察各组c-myc蛋白表达情况及细胞凋亡情况。结果原代培养细胞24 h后开始贴壁,呈圆形或多角形,传至第4代、第5代细胞体积变大,逐渐成为梭形,甲苯胺蓝染色为软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒。与对照组相比较,不同浓度IL-1β处理组软骨细胞c-myc蛋白表达水平逐渐增高,呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比较,不同浓度IL-1β处理组软骨细胞凋亡率逐渐增高,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论实验体外分离小鼠关节软骨,可成功获得高纯度,且传至3代以内活性率超过90%的软骨细胞;IL-1β可以按照剂量依赖方式上调软骨细胞c-myc蛋白的表达,同时增加软骨细胞凋亡率,说明IL-1β可能通过c-myc蛋白诱导软骨细胞凋亡。; 王宁龙迪孟晓娜; 关键词：软骨细胞白细胞介素1Β 印迹法流式细胞术

慢性铝暴露对大鼠海马神经元中toll样受体4蛋白及其mRNA表达的影响被引量：1: 2010年; 目的通过研究铝暴露对介导天然免疫的关键蛋白toll样受体（TLR）的影响，探讨慢性铝暴露诱导学习记忆损伤的潜在机制。方法取80只断乳后Wistar大鼠，随机分为4组，每组20只；其中1组为对照组（用蒸馏水喂养），其他3组为铝暴露组，分别用含0．2％、0．4％和0．6％浓度的AlCl3蒸馏水喂养3个月。免疫印迹（Westem blot）方法检测各组大鼠海马中TLR4的蛋白表达情况；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测各组大鼠海马中TLR4 mRNA的表达情况。结果铝暴露组大鼠的学习记忆能力下降；与对照组（0．91±0．14）相比，0．2％、0．4％和0．6％浓度的铝暴露各组海马组织TLR4的蛋白表达（0．95±0．15、1．44±0．22、2．03±0．28）显著增高（F=37．575，P〈0．05）；与对照组（0．59±0．06）相比，铝暴露各组TLR4mRNA的表达（0．86±0．04、0．95±0．04、1．06±0．09）显著增高（F=65．474，P〈0．05）。结论慢性铝暴露损伤大鼠的学习记忆能力可能与上调TLR4蛋白及其mRNA的表达相关。; 王彪赵伟周丽坤宗志红孟晓娜邢伟; 关键词：海马记忆 TOLL样受体4

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孟晓娜

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