张丹 作品数:6 被引量:20 H指数:3 供职机构: 重庆医科大学附属儿童医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
肿瘤样干细胞来源的外泌体促进人脐带间充质干细胞的增殖和侵袭 被引量:3 2018年 目的探讨Piwil2诱导肿瘤干细胞(Piwil2-iCSC)来源的外泌体对人脐带间充质干细胞(hucMSCs)肿瘤样生物学行为的影响。方法超速离心法提取Piwil2-iCSCs外泌体,透射电镜、粒径分析、Western blot及外泌体摄入实验检测外泌体形态、直径、标志蛋白表达及作用途径。将hucMSCs分为对照组、PBS干预组和外泌体干预组(Exo),CCK-8、细胞划痕实验、Transwell和Western blot检测各组hucMSCs的增殖、迁移、侵袭能力以及基质金属蛋白酶(MMPs)MMP2和MMP9蛋白的表达水平。细胞染色体核型分析检测经Piwil2-iCSCs外泌体长期干预的hucMSCs的染色体结构。结果透射电镜可见Piwil2-iCSCs外泌体大小均匀,直径在50~100 nm,呈形态较规则的圆形或椭圆形囊泡状小体,粒径分析显示外泌体直径分布集中在在100~200 nm;Western blot显示外泌体标志性蛋白CD9、CD63和piwil2蛋白阳性表达;外泌体摄入实验表明外泌体进入细胞发挥作用。与对照组和PBS干预组相比,Exo组细胞增殖数量明显增多(P<0.05),划痕愈合速度加快(24 h,P<0.05;48 h,P<0.01),侵袭细胞数目显著增加(P<0.01)。经Piwil2-iCSCs外泌体干预后的hucMSCs细胞MMP2(P<0.05 vs PBS干预组,P<0.01 vs对照组)、MMP9蛋白水平表达增高(P<0.05),但染色体核型仍是46XY,无异常。结论肿瘤样干细胞Piwil2-iCSC外泌体能促进hucMSCs的增殖、迁移及侵袭,但是未出现肿瘤样异质性改变。 张丹 何大维 李典 唐波 胡东 郭文浩 王璋 沈炼桔 魏光辉关键词:外泌体 肿瘤干细胞 人脐带间充质干细胞 增殖 Piwi互作RNA的筛选及其在儿童肾母细胞瘤组织中的表达 被引量:4 2020年 目的探讨Piwi互作RNA(piRNA)在儿童肾母细胞瘤中的表达及临床意义。方法对Piwi样蛋白2(Piwil2)基因重编程人成纤维细胞所形成的肿瘤样干细胞进行高通量测序,筛选出差异表达piRNA,并利用miRanda软件预测其靶基因,对靶基因进行基因本体(GO)功能分析。采用qRT-PCR检测差异表达piRNA及其靶基因在34例肾母细胞瘤患儿肿瘤组织及癌旁正常肾组织标本中的表达,并分析差异表达piRNA及其靶基因与肾母细胞瘤临床病理特征的关系。结果通过高通量测序筛选出230个差异表达piRNA,利用miRanda软件预测出43个靶基因,经GO分析发现其参与的生物学过程主要为调节细胞钙离子浓度,分子功能主要为参与ATP酶的活动及多聚A尾RNA结合。选取5个未知的差异表达piRNA及其靶基因检测其在肾母细胞瘤肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达情况,结果显示第13位未知上调piRNA(NU13)表达量在肿瘤组织中下调(P<0.01),其靶基因NOP56核糖核蛋白(NOP56)表达在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义(P=0.58);第9位未知上调piRNA(NU9)表达量在肿瘤组织中下调(P<0.01),其靶基因40S核糖体蛋白S8(RPS8)基因在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义(P=0.29);第5、7、9位未知下调piRNA(ND5、ND7、ND9)及其共同靶基因MT-RNR2样蛋白1(MTRNR2L1)基因的表达量在肿瘤组织中均下调(P均<0.01)。以上在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达的piRNA及其靶基因与患儿年龄、性别、肿瘤临床分期、病理分型无明显相关性(P均>0.05)。结论piRNA NU9、NU13、ND5、ND7、ND9及靶基因MTRNR2L1在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达,有望成为鉴别肾母细胞瘤与正常肾组织的标志物。 王璋 张丹 张朝霞 王钊颖 谭小军 卢虹旭 沈炼桔 龙春兰 魏光辉 何大维关键词:高通量测序 肿瘤干细胞 肾母细胞瘤 婴幼儿分离性颅骨骨折的早期处理—生长性颅骨骨折的预防 被引量:3 2011年 目的:探讨生长性颅骨骨折早期有效的预防措施。方法:回顾性分析我院1990年1月至2009年12月收治63例婴幼儿分离性颅骨骨折的临床资料。结果:63例病儿颅骨骨折线宽度三3mm,其中52例CT或MRI提示有脑组织疝出或局部肿块穿刺抽出血性脑脊液或/和破碎脑组织者,经早期手术处理(包括坏死脑组织清除术和硬脑膜修补术),11例行非手术治疗,63例均成活,随访6月到3年和头颅CT复查,58例恢复正常,5例有脑软化灶;轻残3例,其中1例有外伤性癫痫。无生长性颅骨骨折发生。结论:婴幼儿颅骨骨折线宽度3mm和CT或MRl提示有脑组织疝出或局部肿块穿刺抽出血性脑脊液或/和破碎脑组织者,经早期手术清除坏死挫裂伤的脑组织术、严密缝合或修补硬脑膜,是预防生长性颅骨骨折发生的有效手段。 张丹 李映良 梁平 夏佐中 翟暄 周渝冬关键词:颅脑损伤 生长性骨折 婴幼儿 大肠杆菌胞外囊泡对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响 被引量:2 2018年 目的研究大肠杆菌胞外囊泡(E.coli-OMVs)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用差速离心法提取大肠杆菌胞外囊泡,观察囊泡形态并测定囊泡粒径范围。随机分为4组:正常对照组、胞外囊泡低剂量组(100μg/m L E.coli-OMVs)、胞外囊泡中剂量组(500μg/m L E.coli-OMVs)和胞外囊泡高剂量组(1000μg/m L E.coli-OMVs)。MTT检测各组细胞增殖能力;TUNEL和Western blot分别检测各组细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白caspase3的表达;Transwell检测各组细胞迁移能力。结果透射电镜下E.coli-OMVs呈双层膜、中空、圆形或椭圆形,其内含低密度或高密度物质,具有明显的异质性,粒径分析结果表明其直径分布在30~450 nm。与对照组相比,经E.coli-OMVs干预后,SK-N-SH细胞增殖能力显著降低;细胞凋亡增加,caspase3蛋白表达水平明显上调;而迁移能力显著降低(P<0.05)。结论 E.coli-OMVs对SK-N-SH细胞具有直接杀伤作用,有望成为难治性神经母细胞瘤的治疗药物。 唐波 何大维 李典 郭文浩 张丹 魏光辉关键词:SK-N-SH细胞 增殖 凋亡 迁移 piwil2重编程人成纤维细胞形成肿瘤样干细胞的基因差异表达 被引量:1 2020年 利用基因芯片技术检测piwil2基因重编程人成纤维细胞(fibroblast,FB)形成肿瘤样干细胞的差异表达基因,分析主要差异表达信号通路。采用前期已构建的piwil2-gfp基因,以gfp作为空载对照的慢病毒转染人包皮来源的成纤维细胞,获得稳定转染的肿瘤样干细胞,人成纤维细胞作为正常对照,采用基因芯片技术检测其转录差异表达,进行pathway分析,挑选差异表达明显的支链氨基酸代谢信号通路,采用q-PCR进行验证。基因芯片结果显示,FB-piwil2组相较于FB,上调基因1490个,下调基因1484个,参与支链氨基酸代谢等多条信号通路;FB-piwil2组相较于FB-GFP组,上调基因3765个,下调基因1988个,参与支链氨基酸代谢等多条信号通路;FB-GFP组相较于FB组,上调基因2095个,下调基因4014个,参与破骨细胞分化等信号通路;q-PCR验证重编程形成的肿瘤样干细胞克隆的支链氨基酸代谢信号通路上调的7个基因(acad8,acadm,aldh3a2,bcat1,hibch,hmgcs1,mccc2)与基因芯片上调表达一致。由此可见,piwil2基因重编程人成纤维细胞形成的肿瘤样干细胞基因出现差异表达,与支链氨基酸代谢相关。 郭文浩 何大维 李典 唐波 张丹 康青 魏光辉关键词:基因芯片 成纤维细胞 ULBP2在肾母细胞瘤组织中的表达对评估患儿预后的意义 被引量:8 2018年 目的探讨ULBP2蛋白在儿童肾母细胞瘤的表达与肾母细胞瘤患儿预后之间的关系。方法收集重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科2014年1月至2016年12月的肾母细胞瘤肿瘤组织32例,通过电话随访肾母细胞瘤患儿预后等信息,通过调病历获取肾母细胞瘤患儿临床病理信息。应用免疫组织化学法检测ULBP2蛋白在儿童肾母细胞瘤中的表达,并分析ULBP2蛋白等临床病理特征与肾母细胞瘤患儿预后的关系。结果ULBP2蛋白的表达、不同的病理类型、不同的临床分期在预后良好组肾母细胞瘤和预后不良组肾母细胞瘤中差异有统计学意义(P〈0.05)。在预后良好的肾母细胞瘤肿瘤组织中ULBP2蛋白的低表达率为78.57%(11/14),高表达率为21.43%(3/14);在预后不良的肾母细胞瘤肿瘤组织中,ULBP2蛋白高表达率为100%(18/18)。ULBP2蛋白高表达诊断儿童肾母细胞瘤患儿预后不良的灵敏度为100%,特异度为78.57%,阳性预测值为85.7%,阴性预测值为100%。结论ULBP2蛋白在肾母细胞瘤中低表达预示患儿预后良好,高表达提示预后不良,对于评估儿童肾母细胞瘤的预后具有较高的临床价值。 郭文浩 何大维 李典 唐波 张丹 魏光辉关键词:WILMS瘤 自然杀伤细胞 预后