张敏
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：浙江农林大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因的克隆和原核表达被引量：5
- 2013年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)可引起各种年龄猪的呼吸系统和母猪繁殖机能障碍,导致猪场损失严重,其中GP5蛋白在PRRSV病毒侵入、致病及免疫保护中发挥重要作用。提取猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增获得GP5基因,片段大小为600bp。将GP5基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,菌落PCR和限制性内切酶双酶切鉴定,重组质粒PGEX-6P-1-GP5构建成功,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,Western blot分析重组蛋白的反应原性。结果表明,重组融合蛋白His-GP5分子质量约为41ku,主要以包涵体的形式存在,表达量占菌体总蛋白的35%以上,纯化后的重组蛋白占总蛋白的75%以上;并且该重组蛋白能与猪的阳性血清反应,说明其具有较好的免疫原性。研究结果为基因工程疫苗的研发和GP5的抗体制备奠定了基础。
- 袁庄川王鲁彦梅匀安张敏王晓杜
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因原核表达纯化
