张玉琦
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划上海市自然科学基金江苏省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNA干扰DNA甲基转移酶1对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察以DNA甲基转移酶1（DNA methy transferas 1，DNMT1）基因为靶基因的RNA干扰对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响。方法设计、合成针对DNMT1基因的siRNA和阴性对照siRNA（N—siRNA）。实验分为空白对照组、脂质体组（仅予脂质体）、N—siRNA组（转染30 nmol N-siRNA）、siRNA组（转染30 nmol siRNA）。siRNA转染48h后，实时PCR法检测DNMT1 mRNA水平；WST-8法检测细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡。结果siRNA组DNMT1mRNA的抑制率为（86．0±4．3）％，明显高于N—siRNA组的（40．1±2．2）％和空白对照组的0（P〈0．01）；细胞存活率为（47．6±5．6）％，明显低于N—siRNA组的（68．1±4．1）％和空白对照组的100％（P〈0．01）；细胞凋亡率为（14．94±2．89）％，明显高于空白对照组的（7．51±1．12）％、脂质体组的（7．06±0．39）％、N—siRNA组的（8．84±1．44）％（均P〈0．01）。结论siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞DNMT1 mRNA的表达，同时抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。
- 徐岷高道键张玉琦高军李兆申龚燕芳吴洪玉杜奕奇金晶满晓华
- 关键词：胰腺肿瘤RNA小分子干扰细胞增殖
- 组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖凋亡的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响。方法培养胰腺癌PaTu8988细胞株，设空白对照组（未予任何处理）、阴性对照组[予30nmol／L阴性小干扰RNA（siRNA）]、HDACl低剂量组（予15nmol／LHDAC1s．RNA）和HDACl高剂量组（予30nmol／LHDAC1siRNA），siRNA转染48h后，分别采用相对实时定量PCR法和Western印迹法检测HDAC1基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率，细胞计数试剂盒法检测siRNA干扰前、后细胞增殖变化，流式细胞技术检测干扰前、后细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后，低剂量组和高剂量组人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达率分别为46．1％±6．1％和32．3％±1．4％，均显著低于空白对照组（100．0％±3．4％）和阴性对照组（87．4％±28．3％），差异有统计学意义（P值均〈0．05）。空白对照组和阴性对照组HDAC1蛋白表达水平高于其余两组。空白对照组、阴性对照组、HDAC1低剂量组和HDAC1高低剂量组的细胞存活率分别为100．0％±17．1％、87．1％±5．0％、68．7％±4．7％和61．6％±2．0％，细胞凋亡率分别为4．20％±0．95％、4．59％±1．26％、10．09％±1．36％和11．19％±6．07％，空白对照组和阴性对照组与其余两组比较，差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论HDAC1siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDAC1表达，抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。
- 高道键徐岷张玉琦杜奕奇高军龚燕芳吴红玉许国铭李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤RNA干扰
- RNA干扰组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的调控机制研究被引量：8
- 2010年
- 目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法胰腺癌PaTu8988细胞株分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(予以30nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(予以15nmol/LHDAC1siRNA)和siRNA2组(予以30nmol/LHDAC1siRNA)。siRNA转染48h后,用相对实时定量RT-PCR法和West-ernblotting检测HDAC1基因表达情况;相对实时定量RT-PCR法检测细胞增殖凋亡相关基因p21、Bcl-2、Bax的表达;WST-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为46.1%±6.1%和32.3%±1.4%,均显著低于空白对照组(100.0%±3.4%)和阴性对照siRNA组(87.4%±28.3%,P<0.05)。Westernblotting显示HDAC1蛋白表达量亦明显下降,以siRNA2组表达量最低(P<0.05)。WST-8法检测显示4组细胞存活率分别为100%±17.1%、87.1%±5.0%、68.7%±4.7%、61.6%±2.0%,siRNA1组和siRNA2组与其他各组相比差异显著(P<0.05)。流式细胞术检测显示上述4组胰腺癌细胞凋亡率分别为4.20%±0.95%,4.59%±1.26%,10.09%±1.36%,11.19%±6.07%,与空白对照组和阴性对照siRNA组相比,siRNA1组和siRNA2组凋亡率显著增高(P<0.05)。siRNA1组和siRNA2组p21、BaxmRNA相对表达量明显高于其他各组(P<0.05),而Bcl-2mRNA相对表达量明显低于其他各组(P<0.05)。结论HDAClsiRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDACl的表达,同时抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与上调p21、Bax表达,下调Bcl-2表达有关。
- 高道键徐岷张玉琦李雅洁满晓华吴红玉金晶
- 关键词：胰腺肿瘤RNA干扰细胞增殖
- 靶向性沉默DNMTl基因对胰腺癌细胞DNA甲基化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察DNA甲基转移酶1（DNMTl）基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH·1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响。方法由美国Ambion公司设计合成DNMTIsiRNA和阴性对照siRNA，分别用15、30nmol／L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞，以未转染组细胞作为对照。应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMTlmRNA和蛋白的表达；用DNMT活性检测试剂盒检测其活性；用亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态；实时PCR法检测hMLH-1mRNA的表达。结果转染48h后，DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMTlmRNA表达量分别为0．573±0．026和0．143-3-0．044，显著低于对照组的1．020±0．217及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．900±0．475和0．938±0．327（P值均〈0．05）；DNMTlsiRNA组的DNMTl蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组。DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMT活性分别为0．364±0．124和0．250±0．072，明显低于对照组的0．931±0．065及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．665±0．055和0．472±0．040。DNMT活性与DNMTlmRNA表达呈正相关（r=0．69，P〈0．01）。DNMTlRNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化。结论DNMTlsiRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMTl基因的表达，明显抑制DNMT的活性，并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化。
- 徐岷张尤历高道键张玉琦李兆申高军杜奕奇龚燕芳吴洪玉高飞
- 关键词：DNA甲基转移酶1小分子干扰胰腺肿瘤甲基化
- 曲古菌素A对人胃癌细胞增殖和细胞周期的作用
- 2009年
- 目的观察曲古菌素A（TSA）对人胃癌细胞株SGC－7901细胞增殖及细胞周期的影响，探讨其可能的机制。方法TSA干预人胃癌SGC－7901细胞24h后，采用四甲基偶氮唑盐法检测其对细胞增殖的影响，流式细胞技术检测细胞周期，实时PCR检测细胞周期素D1和p21 mRNA的表达情况。结果经TSA干预24h后，人胃癌SGC－7901细胞增殖受抑制，TSA0．1、0．5和2．0μmol／L组抑制率分别为3．52％±6．11％、13．29％±4．13％和14．24％±2．80％；同时TSA0．5μmol／L组（71．26％±0．51％）和TSA2．0μmol／L组（71．03％±0．12％）的G0／G1期细胞比例明显高于对照组（51．12％±1．17％）；TSA0．5μmol／L组（13．55％±0．44％）和TSA2．0μmol／L组（10．63％±0．63％）的S期细胞比例明显低于对照组（34．60％±0．60％），出现G0／G1细胞周期阻滞。TSA干预后细胞周期相关基因细胞周期素D1 mRNA表达下调和p21 mRNA表达上调。结论TSA通过调控细胞周期相关基因细胞周期素D1和p21的表达，抑制人胃癌SGC－7901细胞的增殖，引起G0／G1期细胞周期阻滞，最终影响肿瘤细胞的生长。
- 吴洪玉龚燕芳徐岷张玉琦高道键李兆申高军
- 关键词：胃肿瘤曲古菌素A细胞增殖细胞周期细胞周期素D1
- DNMTl siRNA对人胰腺癌PaTu8988细胞周期的调控机制研究被引量：3
- 2009年
- 目的研究沉默DNA甲基转移酶1(DNMTl)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和细胞周期的影响及可能机制。方法培养的人胰腺癌PaTu8988细胞分为空白对照组、阴性siRNA(15nmol/L)组、阴性siRNA(30nmol/L)组、DNMT1 siRNA(15nmol/L)组和DNMT1 siRNA(30nmol/L)组。转染48h后,采用real-time PCR和Western blotting评价沉默效率和细胞周期调控基因p21的表达情况;WST-8法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期变化。结果转染48h后,15nmol/L和30nmol/L浓度的DN-MT1 siRNA均明显抑制了DNMT1 mRNA和蛋白的表达;DNMT1 siRNA转染后人胰腺癌PaTu8988细胞增殖受抑制,各组细胞增殖抑制率依次为0%±12.0%、13.7%±8.2%、23.4%±7.3%、17.1%±5.8%和36.9%±14.2%,其中DNMT1 siRNA(30nmol/L)组的细胞增殖抑制率明显高于其他各组(P<0.01);DNMT1 siRNA(15nmol/L)组和DNMT1 siRNA(30nmol/L)组的G2/M期细胞百分率均显著低于其他各组,S期细胞百分率明显高于其他各组(P<0.05);DNMT1 siRNA(30nmol/L)组细胞周期调控基因p21 mRNA相对表达量明显高于其他各组(P<0.01)。结论DNMTl siRNA能特异性抑制胰腺癌细胞DNMTl的表达,并抑制细胞增殖、促使细胞出现S期阻滞,其机制可能与上调细胞周期调控基因p21的表达有关。
- 徐岷高军高道键张玉琦杜奕奇刘枫龚燕芳吴洪玉李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤细胞周期
- 组蛋白去乙酰化酶1在胰腺癌表达及临床意义被引量：2
- 2008年
- 目的探讨胰腺癌组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase1，HDAC1）表达的临床意义。方法收集30例胰腺癌和相应癌旁组织，应用实时定量PCR和免疫组织化学方法检测HDAC1的表达，并分析胰腺癌HDAC1表达与临床病理参数的关系。结果胰腺癌HDAC1mRNA表达指数为2．60（0．42—12．81），癌旁组织为1．02（0．19—3．58），两组表达有显著差异（P=0．001）。胰腺癌HDAC1蛋白表达阳性细胞率为（56±26）％，癌旁组织为（6±6）％，相差显著（P=0．000）。以阳性细胞率平均值56％为界，高表达（≥56％）18例，低表达（〈56％）12例。胰腺癌HDAC1高表达和肿瘤TNM分期、淋巴结转移相关。结论胰腺癌HDAC1高表达提示肿瘤可能已属晚期，预后不良。
- 高道键徐岷张玉琦高军李兆申龚燕芳满晓华金晶吴洪玉
- 关键词：胰腺肿瘤免疫组织化学组蛋白脱乙酰基酶类
- DNA甲基转移酶1在胰腺癌组织中的表达及其临床意义被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集手术切除的30例胰腺癌组织和配对癌旁组织.采用实时定量PCR法检测DNMT1 mRNA的表达;免疫组织化学法检测DNMT1蛋白的表达;分析胰腺癌组织DNMT1蛋白表达强度与临床病理参数之间的关系.结果 胰腺癌组织中DNMT1 mRNA的表达量为2.32（1.17～5.17）,显著高于配对癌旁组织的0.78（0.07～3.14,P＜0.05）.胰腺癌组织中导管细胞DNMT1蛋白表达阳性率为（54.5±21.2）%,显著高于癌旁组织（10.9±15.0）%的表达阳性率（P＜0.01）.以胰腺癌导管细胞DNMT1阳性率54.5%为界,分为高表达组（19例）和低表达组（11例）.DNMT1表达强度和临床分期（χ^2=6.897,P=0.029）、淋巴结转移（χ^2=4.739,P=0.029）、神经浸润与否（χ^2=5.44,P=0.020）相关,而与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小、肿瘤分化、血清CEA和CA19-9浓度无关.结论 胰腺癌组织DNMT1 mRNA和蛋白表达明显增加,DNMT1蛋白表达强度与胰腺癌的侵袭力、淋巴结转移和神经浸润相关.
- 张尤历徐岷高道键张玉琦高军杜奕奇龚燕芳满晓华李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤免疫组织化学
- 曲古菌素A对人胰腺癌PaTu-8988细胞增殖和细胞周期的影响
- 2008年
- 目的 观察曲古菌素A（trichostatin A，TSA）对人胰腺癌PaTu-8988细胞增殖及细胞周期的影响。方法不同浓度（0．1、0．5、2．0μmol／L）TSA处理人胰腺癌PaTu-8988细胞，并设空白对照组。采用WST-8法检测细胞存活率；流式细胞仪检测细胞周期的变化；实时定量PCR检测细胞周期相关基因p21和cyclinD1mRNA的表达。结果对照组、TSA0．1μmol／L、0．5μmol／L和2．0μmol／L组的细胞存活率分别为（100．0±4．2）％、（88．5±4．2）％、（79．7±5、0）％和（64、3±7.2）％，各TSA组均显著低于对照组（P〈0．01）。TSA0．1μmol／L、0．5μmol／L组的细胞以G1期居多，2．0μmol／L组（50．29±7．53）％细胞阻滞在G2／M期。TSA各组p21mRNA表达值分别为5、29±1．16、7．79±0．41、8．61±0．73，较对照组1．00±0．08显著升高（P〈0．01）；cyclin D1mRNA表达值分别为1．134-0、12、0．42±0．06、0．19±0．06，较对照组1．00±0．07表达降低（P〈0．05）。结论TSA通过上调p21及下调cyclinD1基因的表达，导致细胞周期阻滞。
- 张玉琦徐岷高道键高军龚燕芳吴洪玉金晶满晓华李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤曲古菌素A组蛋白脱乙酰基酶类细胞周期
- HDAC1基因沉默对人胰腺癌细胞PaTu8988细胞周期的影响
- 2011年
- 目的探讨组蛋白脱乙酰基酶1（HDACl）基因沉默对人胰腺癌PaTu8988细胞周期影响及可能机制。方法常规培养胰腺癌PaTu8988细胞，分为对照组、阴性siRNA转染（c—siRNA）组及15、30nmol／LHDACl siRNA转染组。采用脂质体2000转染细胞48h后，应用蛋白质印迹法检测细胞HDACl基因沉默效率及p21基因表达；流式细胞法检测细胞周期的变化。结果与对照组比较，30nmoL／LHDAClsiRNA组PaTu8988细胞的HDACl蛋白表达明显下降，p21蛋白表达明显增加；G2／M期细胞比例显著减少[（21．48±3．67）％比（28．28±2．94）％，P〈0．05]，s期细胞比例显著增加[（50．20±6．85）％比（32．49±2．78）％，P〈0．05]。结论HDAClsiRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDACl的表达，引起细胞S期阻滞，其机制可能与上调p21蛋白表达有关。
- 高道键满晓华徐岷张玉琦高军龚燕芳吴红玉金晶许国铭李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤组蛋白脱乙酰基酶类细胞周期
