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李美宁: 作品数：56 被引量：136H指数：6; 供职机构：山西医科大学更多>>; 发文基金：山西省科技攻关计划项目山西省回国留学人员科研经费资助项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学一般工业技术更多>>

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RNA干扰沉默Sp1基因抑制大肠癌SW620细胞的恶性增生: 2009年; 目的采用RNA干扰技术沉默大肠癌SW620细胞转录因子特化蛋白1（Sp1）的表达，观察其对细胞增生的影响。方法构建靶向人Sp1基因的干扰载体（pGenesil-1-Sp1），脂质体介导转染SW620细胞，荧光倒置显微镜下观察转染效率，应用实时荧光定量PCR和Western blotting检测其对Sp1 mRNA及蛋白质水平的影响，MTT法检测SW620细胞增生活性的改变。结果成功构建针对Sp1的干扰载体，转染后能够有效抑制大肠癌SW620细胞中Sp1 mRNA和蛋白的表达，且在转染48h抑制作用最强，其对Sp1 mRNA和蛋白质抑制率分别为68．47％和73．82％，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。MTT实验显示，下调Sp1表达可显著抑制大肠癌SW620细胞的体外增生能力。结论Sp1基因沉默能够抑制人大肠癌SW620细胞的增生，为以Sp1为靶点的大肠癌基因治疗提供新的思路和手段。; 赵志兰李美宁张悦红杜叶平郝华程牛亮; 关键词：肠肿瘤 RNA干扰 SW620细胞

地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用被引量：1: 2018年; 目的：制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法：提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果：成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论：成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。; 刘志贞加三三张凯丽孙雨晴赵虹郝宇卉牛勃李美宁; 关键词：UCP2 RNA探针

Pu27下调c-myc基因表达抑制SW480结肠癌细胞增殖: 2016年; 目的探讨外源性Pu27序列对SW480结肠癌细胞的作用。方法设立空白组、Pu27实验组和Mut Pu27对照组,观察药物摄取,c-myc基因表达,细胞增殖和凋亡情况。结果 Pu27以非转染方式进入细胞,下调c-myc基因表达,抑制细胞增殖促进凋亡。结论 Pu27具有选择性抗肿瘤作用。; 兰晓瑜张毅强王爽李美宁程牛亮; 关键词：C-MYC 结肠癌

前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定: 2008年; 15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)属于抑癌基因,在多种肿瘤中表达缺失,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。提取人正常大肠黏膜组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,测序鉴定正确后转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot,证实为相对分子质量约为29000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。经Ni2+配体亲和层析纯化得到纯度大于95%的目的蛋白。重组PGDH简单复性后具有一定的生物活性,约为3.7×104U/mg,为下一步研究其在肿瘤中的作用奠定了基础。; 李美宁解军常冰梅张悦红殷云勤程牛亮; 关键词：大肠癌 15-羟基前列腺素脱氢酶克隆原核表达

靶向Pin1基因的shRNA干扰质粒的构建及其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用被引量：2: 2009年; 目的构建靶向Pin1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰真核表达质粒,并检测其对大肠癌SW620细胞Pin1基因的抑制作用。方法设计合成特异性针对人Pin1基因的寡核苷酸序列,退火后与pGenesil-1载体连接,构建靶向Pin1基因的shRNA真核表达质粒pGenesil-1-Pin1(+),利用脂质体转染大肠癌SW620细胞,以质粒pGenesil-1-Pin(-)转染细胞和未转染细胞为对照。利用荧光显微镜观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白,估算转染效率;应用实时荧光定量PCR和Western blot检测其对SW620细胞Pin1基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果所构建的特异Pin1shRNA真核表达质粒经酶切及测序证明构建正确,转染SW620细胞的转染效率为64%。shRNA对SW620细胞Pin1基因mRNA的抑制率在转染后72h最高,为70.2%,蛋白抑制率为60%。结论已成功构建了靶向Pin1基因的shRNA干扰真核表达质粒,可抑制SW620细胞Pin1基因mRNA的转录及蛋白的表达。; 郝华李美宁赵志兰杜叶平秦立元程牛亮; 关键词：RNA干扰短发夹RNA 大肠癌

食管癌相关基因2对EC9706细胞恶性增殖的抑制作用被引量：10: 2005年; 目的探讨食管癌相关基因2(esophageal cancer related gene2,ECRG2)对EC9706食管癌细胞恶性增殖的抑制作用及其机制。方法利用DNA重组技术,构建ECRG2真核表达质粒(pcDNA3.1ECRG2),在食管癌EC9706细胞中转染并表达ECRG2蛋白,观察细胞的生长状态,比较平板集落和软琼脂克隆形成能力的改变,分析ECRG2对EC9706恶性表型的影响。进一步采用WesternBlot检测p53、p21的改变。结果转染表达ECRG2后,EC9706细胞的生长受到干扰,细胞的增殖速度受到抑制,实验组细胞平板集落形成率为18%,而对照组为55%,两者间差异显著(P<0.05);肿瘤细胞的停泊非依赖能力降低,实验组软琼脂克隆体积小且形成个数(8±1.88)明显少于对照组(14.3±3.13),差异显著(P<0.05)。WesternBlot分析表明,EC9706细胞转染表达ECRG2后伴随着p53、p21蛋白表达上升。结论转染表达ECRG2蛋白能够部分逆转食管癌EC8706细胞的恶性表型,其过程可能与p53、p21通路密切相关。; 李美宁黄革郭黎平陆士新; 关键词：ECRG2 细胞生长 P53蛋白

设计VEGF的G四链体诱导结肠癌细胞凋亡的研究: 2016年; 目的 pu22寡核苷酸序列作用于VEGF基因使VEGF启动子区形成G-四链体,干扰VEGF基因的表达从而促进HCT116细胞和SW480细胞的凋亡。方法设计合成的pu22和mutpu22摄取到细胞后,在pu22不同浓度作用下,通过实时定量PCR实验检测VEGF基因的表达情况,利用免疫印迹实验检测VEGF蛋白表达水平;通过细胞凋亡实验检测两种结肠癌细胞凋亡的情况。结果荧光实时定量PCR与免疫印迹实验结果显示处理组的两种结肠癌细胞株HCT116与SW480用8μL/L的PU22处理48 h后VEGF的表达最低,其相对表达值均显著低于正常细胞组及空白对照组。细胞凋亡实验结果表明两种细胞处理组凋亡率均大于相应的正常组与对照组。结论寡核苷酸序列PU22对杀伤结肠癌细胞起着显著的作用。; 王爽张毅强兰晓瑜程牛亮李美宁; 关键词：VEGF

一种负压吸引器用移液装置: 本实用新型属于实验室器械技术领域，具体涉及一种负压吸引器用移液装置。本实用新型主要是解决现有技术存在的工艺过程繁琐、操作复杂、吸头方向和入液深度不易控制的技术问题。本实用新型采用的技术方案是：一种负压吸引器用移液装置，包...; 张引红李美宁刘志贞王春芳陈朝阳; 文献传递

RNA干扰抑制Sp1对大肠癌SW480细胞端粒酶活性的影响: 赵利国朱艳牛万通李美宁程牛亮; 关键词：大肠癌 SP1 RNAI HTERT 端粒酶

大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达: 2008年; 目的构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白。方法以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coliDH5α,经温控诱导表达,并经Ni2+-NTA亲和层析纯化,目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组质粒pBV220-PGDH-His6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确。经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%。Western blot验证了表达蛋白的特异性。纯化后目的蛋白纯度大于95%。结论已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白。; 李美宁冯燕常冰梅解军张悦红殷云勤程牛亮; 关键词：大肠癌 15-羟基前列腺素脱氢酶克隆原核表达

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