杨友志
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程更多>>
- 草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备被引量：1
- 2013年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序。结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸。将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2%。将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白。以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清。Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白。
- 蒋磊邓竹根谢朝阳杨友志李祥宇丁菲江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒克隆原核表达
- 草莓镶脉病毒启动子鉴定
- 启动子是基因表达调控的重要元件,它能够启动下游基因的转录,CaMV 35S启动子是植物基因工程中最为常用的启动子.草莓镶脉病毒(SVBV)和花椰菜花叶病毒(CaMV)同属于花椰菜花叶病毒属,有关SVBV启动子的研究,国内...
- 杨友志李瑞江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒启动子活性分析
- 草莓镶脉病毒编码蛋白对其启动子的调节作用及其亚启动子鉴定
- 草莓镶脉病毒(Strawberryveinbandingvirus,SVBV)属于花椰菜花叶病毒科(Caulimoviridae)花椰菜花叶病毒属(Caulimovirus),SVBV为环状双链DNA病毒,基因组结构与花...
- 杨友志
- 关键词：草莓镶脉病毒
- 文献传递
- 一种草莓镶脉病毒的组成型表达启动子
- 本发明提供了一种草莓镶脉病毒的组成型表达启动子，该启动子为草莓镶脉病毒全长启动子序列或缺失启动子序列。本发明中分离的SVBV启动子及其缺失构建产物在蔷薇科植物上能够高强度地稳定驱动目的基因表达，将会为蔷薇科植物基因工程改...
- 江彤李瑞杨友志李爽陈静
- 文献传递
- 草莓镶脉病毒外壳蛋白的原核表达及多抗血清制备被引量：4
- 2012年
- PCR扩增得到了草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的外壳蛋白(coat protein,cp)基因,将SVBV cp基因克隆到原核表达载体pET-32a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为0.05 mmol·L-1的IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳及Western-blot分析表明,SVBV cp基因在大肠杆菌中得到了融合表达。利用Ni2+-NTA亲和树脂纯化重组融合蛋白,免疫家兔获得了重组蛋白的多抗血清。以此多抗血清建立了Dot-ELISA检测方法,结果表明,制备的特异性多抗血清可以快速检测出感病草莓样品中的SVBV。
- 江彤杨友志丁菲蒋磊李祥宇邓竹根谢朝阳宋培培
- 关键词：草莓镶脉病毒外壳蛋白原核表达
