杨莉莉
- 作品数：29 被引量：85H指数：5
- 供职机构：天津市肿瘤防治重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划天津市科技创新专项资金天津市卫生局科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组人FLT-3配体基因工程酵母菌株的发酵培养与纯化
- 任秀宝黄宗堂杨莉莉庞青松李慧于津浦张澎曹水徐冬
- 目的：在毕赤酵母（Pichia pastoris）中高效表达人FLT-3配体，利用3.7L的发酵罐优化发酵条件，探索并建立其纯化工艺。方法：KM71pPIC9K-FL工程菌接种于发酵罐高密度发酵，发酵上清经疏水层析和阳离...
- 关键词：
- 关键词：发酵纯化
- 新型树突状细胞疫苗的构建及功能的初步鉴定
- 2011年
- 目的:构建可同时实现沉默细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)刺激和肿瘤相关抗原负载的新型树突状细胞(DC)疫苗。方法:构建沉默SOCS1并共表达HMGB1及肿瘤相关抗原NY-ESO-1的质粒(p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1)。体外诱导单核细胞分化为DC,将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞。同时设立未转染组、shNC/GFP转染组和p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组。PCR和Western blot验证基因及蛋白表达后,酶联免疫吸附(ELISA)法检测DC细胞分泌的肿瘤坏子因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、IL-1及IL-6的变化。结果:经测序证实所构建质粒序列与预期序列一致,酶切和PCR验证质粒结构正确。成功将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞,并在基因和蛋白水平验证NY-ESO-1的正确表达,HMGB1可在胞浆内表达。SOCS1 shRNA质粒shS可沉默SOCS1表达。p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组DCTNF-α、IL-12、IL-1及IL-6分泌量较未转染组和shNC/GFP转染组升高(P<0.05)。结论:成功构建可同时实现沉默SOCS1、HMGB1刺激和肿瘤相关抗原负载的新型DC疫苗。
- 霍佳杨莉莉魏枫于津浦李慧任秀宝
- 关键词：细胞因子信号转导蛋白抑制因子树突细胞癌症疫苗质粒转染
- rhKPI/AβPP对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的保护作用被引量：3
- 2006年
- 目的用四氯化碳致大鼠慢性肝损伤,研究rhKPI/AβPP对大鼠肝损伤保护作用。方法采用四氯化碳(CCL4)建立大鼠慢性肝损伤和肝纤维化模型,设rhKPI/AβPP高、中、小剂量组并与促肝细胞生长素组作对照。观察大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、胆碱酯酶(CHE)碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、白球蛋白比(A/G)、γ谷氨酰转肽酶(γGT)、胆红素(TBIL)、唾液酸(SA)、肝组织羟脯氨酸(Hyp)及肝脏组织病理改变。结果rhKPI/AβPP可显著降低大鼠血清ALT、AST的活性及肝组织Hyp含量,抑制ALB和(A/G)比值的降低,减轻肝组织病理损伤程度。结论rhKPI/AβPP对实验性慢性肝损伤具有保护作用和抗纤维化作用。
- 贺巾超杨莉莉张馨木范伟全刘韦侯立中颜炜群
- 关键词：四氯化碳肝纤维化
- 人热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的在毕赤酵母(pichiapastoris)中高效表达人热休克蛋白70(hHSP70),制备具有天然与hHSP70相同结构和活性的重组hHSP70(rhHSP70)。方法用PCR法自人DNA文库中克隆hHSP70的DNA,构建真核表达载体pPICZα/hHSP70。经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X33。用PCR法筛选Zeocin抗性的转染阳性克隆,Westernblot法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的rhHSP70,筛选高表达工程菌。结果经PCR法克隆的hHSP70DNA序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。将hHSP70DNA定向插入pPICZα,构建pPICZα/hHSP70真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性的转染阳性克隆。SDSPAGE和Westernblot分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有rhHSP70,分子量72kD。氨基酸序列分析证实rhHSP70氨基端15个氨基酸与天然rhHSP70完全一致。rhHSP70表达量高达250mg·L-1。结论获得高效表达rhHSP70的毕赤酵母工程菌。
- 马杰焦平宿晓云贺巾超杨莉莉王建秋耿学军范伟全魏传宇张英罗琳孔宁颜炜群
- 关键词：基因表达毕赤酵母
- 重组人白介素18的发酵、纯化及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:利用构建的重组菌株Pichia pastoris X-33/hIL-18,在3.7L发酵罐中表达重组人白介素18(hIL-18),探讨其大规模发酵及纯化工艺。方法:复苏工程菌X-33/hIL-18于BMGY培养基,在其A600达到6左右时转入发酵罐进行高密度发酵。发酵液经过滤浓缩柱、疏水层析和阴离子交换层析分离纯化。结果:工程菌在3.7L发酵罐采用甲醇诱导补料批式发酵,在pH6.0,溶氧值(DO)20%～30%,温度28℃,甲醇诱导48h重组hIL-18的表达产量为202mg/L,发酵液经纯化后纯度可达97%以上,并初步证明重组hIL-18能协同IL-2诱导PBMCs分泌IFN-γ和协同IL-2增强NK细胞的杀伤活性。结论:利用Pichia pastoris分泌型表达系统和建立的分离纯化方法,能获得大量较高纯度的重组hIL-18,为进一步研究其活性和功能奠定基础。
- 安秀梅杨莉莉李慧曹水任秀宝
- 关键词：白细胞介素18毕赤酵母发酵培养基
- rhKD/APP对急性肝损伤小鼠的保护作用被引量：4
- 2007年
- 目的:观察rhKD/APP对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:采用CCl4建立小鼠急性肝损伤模型,取小鼠60只随机分为6组(每组10只),分别设为空白对照组、模型组、阳性药对照组及rhKD/APP小中大剂量(4.5、9.0、18.0 mg.kg-1)组。测定实验小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织丙二醛(MDA)、肝重系数并观察肝脏组织病理学变化。结果:rhKD/APP小、中、大剂量组血清ALT、AST活性和肝组织中MDA低于模型组(P<0.05或P<0.01);肝脏组织病理切片显示,模型组有炎细胞浸润,肝细胞坏死,与模型组相比,rhKD/APP小、中、大剂量组肝组织损伤程度较轻,且随着rhKD/APP剂量增加肝组织损伤程度逐渐减轻。结论:rhKD/APP对CCl4所致急性肝损伤小鼠具有明显的保护作用。
- 张馨木贺巾超杨莉莉张赢予董文侯立中颜炜群
- 关键词：RHKD/APP蛋白酶抑制药急性病四氯化碳
- 嵌合抗原受体T细胞治疗恶性淋巴瘤研究进展被引量：4
- 2018年
- 嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）是治疗复发难治性恶性淋巴瘤的有效手段之一，如何提高疗效、控制不良反应是当前研究的重点。几项CD19CAR—T治疗B细胞淋巴瘤的大型临床研究证实疗效得到改善，不良反应可控制。CD19CAR-T治疗后肿瘤细胞抗原丢失的问题是其治疗失败的主要原因，以新型靶点如CD22治疗B细胞淋巴瘤、CD30治疗霍奇金淋巴瘤等CAR-T的临床研究，进一步提高了CAR—T的有效性。环磷酰胺或苯达莫司汀加氟达拉滨的联合预处理方案可改善CAR—T治疗的有效率。
- 宋拯王先火李兰芳杨莉莉任秀宝张会来
- 关键词：淋巴瘤
- IDO与胃癌免疫的相关性研究
- 张汝鹏王学军杨莉莉于津浦王晓娜张晖梁寒
- 胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一。吲哚胺2，3-双加氧酶（indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO）是肝脏以外唯一可催化色氨酸裂解的限速酶。IDO活性增加可导致细胞微环境中的色氨酸耗竭，使细胞处于一...
- 关键词：
- 关键词：胃癌T细胞色氨酸
- 重组牛胰蛋白酶抑制剂对小鼠急性肝损伤的保护作用被引量：5
- 2008年
- 目的观察重组牛胰蛋白酶抑制剂(rBPTI)对小鼠急性肝损伤的保护作用。方法小鼠60只随机分成6组:正常对照组、模型组、rBPTI的3个剂量组(分别为3、6、12×104kIU·kg-1)、抑肽酶组(6×104kIU·kg-1)。每天腹腔注射给药,7d后体外注射CCl4建立小鼠急性肝损伤模型。末次给药后眼眶取血测定小鼠血清ALT、AST活性,观察肝脏组织病理改变。结果各剂量rBPTI可不同程度降低小鼠血清ALT、AST活性,降低肝组织MDA含量,与模型组比较差异有统计学意义(P<0·05、P<0·01),同时不同程度减轻肝组织病理损伤。结论rBPTI对体外CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,作用效果同天然BPTI相当。
- 杨莉莉董文贺巾超任秀宝颜炜群
- 关键词：四氯化碳急性肝损伤
- 肿瘤细胞来源胞外体的分离鉴定与功能检测被引量：1
- 2009年
- 目的:分离提纯和电镜鉴定乳腺癌细胞系MCF-7细胞分泌的胞外体,并观察其对淋巴细胞增殖的影响。方法:将细胞培养上清进行分步离心、浓缩、密度梯度离心获得纯化后的胞外体,并对胞外体进行透射电镜鉴定。将分离纯化的胞外体加入含有IL-2的淋巴细胞培养体系中,用MTT试验计算淋巴细胞的增殖率,观察胞外体对淋巴细胞增殖的影响。结果:从2×107个细胞可获得20mL纯化的胞外体,测得其总蛋白浓度为(1.84±0.01)g/L,经电镜鉴定MCF-7细胞来源的胞外体直径为55～70nm,为有膜包裹的囊泡状结构,大小较为均一,形态特征与观察到的多泡体的内部囊泡的大小和形态是一致的。MTT试验显示它能够抑制IL-2诱导的淋巴细胞增殖,并且随剂量增加抑制作用增强。结论:肿瘤细胞来源的胞外体可通过细胞培养上清分步离心浓缩纯化得到,其不仅具有胞外体的形态学特征,同时可对IL-2诱导的淋巴细胞增殖产生剂量依赖性的抑制作用。
- 崔焱于津浦李慧杨莉莉魏枫安秀梅任秀宝
- 关键词：乳腺肿瘤免疫耐受细胞分离
