梁英
- 作品数：8 被引量：5H指数：2
- 供职机构：复旦大学附属中山医院肝癌研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 酪丝缬肽对人肝癌细胞SMMC-7721血管生成相关基因表达谱的影响
- 2008年
- 目的:观察小分子三肽化合物酪丝缬肽(tyroservatide,YSV)对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制作用,并分析YSV对肿瘤细胞血管生成相关基因表达的影响.方法:建立人肝癌细胞SMMC-7721的体外培养体系,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测YSV对体外培养的SMMC-7721的增殖抑制作用,应用功能分类基因芯片分析人肝癌细胞SMMC-7721经药物作用后血管生成相关基因表达的差异变化,同时应用RT-PCR方法验证相关基因的表达.结果:YSV能显著抑制人肝癌SMMC-7721的生长,10mg/LYSV作用72h对SMMC-7721的增殖抑制率为42.34%,与对照组比较有统计学意义(P<0.05).在113个血管生成相关基因中,YSV组相比对照组,基因下调0.667倍以上的有7个.RT-PCR在基因水平上证实YSV能显著抑制血管内皮生长因子(VEGF)和白介素8(IL-8)的表达.结论:YSV在体外能够显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并能在基因水平上下调肿瘤细胞血管生成相关因子的表达.
- 张宁王鲁赵一鸣梁英吴伟忠樊嘉汤钊猷
- 关键词：酪丝缬肽CDNA微阵列SMMC-7721白介素8
- 酪丝缬肽对人肝癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用及其机制
- 2009年
- 目的探讨三肽化合物酪丝缬肽（YSV）对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用及其抗血管生成机制。方法建立人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤模型，免疫组织化学法观察YSV对肿瘤组织中微血管密度（MVD）的影响；应用血管生成相关基因芯片分析YSV对肿瘤组织血管生成相关基因的影响；应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）验证相关基因的表达情况，最后酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清中目的因子的含量。结果YSV能显著抑制人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的生长，当给药剂量为320μg／kg·d^-1。时效果最为显著，抑瘤率为60．66％。免疫组织化学法证实YSV能够降低肿瘤组织中微血管密度，YSV作用组MVD平均值36．0±11．6，对照组平均值为114．5±26．5。与生理盐水组比较，在113个候选基因中有18个基因下调2倍以上，其中血管内皮生长因子（VEGF）与白细胞介素（IL）-8基因下调最显著；RT—PCR法证实YSV能够抑制肿瘤组织中VEGF与IL-8在mRNA水平上的表达；ELISA亦证明YSV作用组血浆中因子VEGF及IL-8浓度降低。结论YSV能显著抑制人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤生长，通过抑制肿瘤组织中促血管生成因子的表达来发挥抗肿瘤活性。
- 张宁王鲁梁英吴伟忠樊嘉汤钊猷
- 关键词：肝细胞酪丝缬肽血管生成IL-8
- 稳定表达荧光蛋白的人肝癌高转移细胞株及其建立方法
- 本发明属微生物动物细胞系领域，涉及可发射高强度红色或绿色荧光，具肺与淋巴结高转移能力的人肝癌细胞系及其建立方法。本发明以肺与淋巴结高转移的人肝癌细胞系HCCLM3、HCCLM6为母细胞，通过慢病毒包装质粒对293细胞的质...
- 吴伟忠孙惠川汤钊猷王鲁夏景林杨毕伟梁英徐泱
- 文献传递
- 芳香烃受体核易位蛋白2基因表达对HCCLM6细胞侵袭和迁移的影响
- 2010年
- 目的探讨短发夹（sh）RNA芳香烃受体核易位蛋白（ARNT）2i慢病毒表达载体对高转移肝癌细胞HCCLM6侵袭和迁移的影响。方法以ARNT2为目的基因，化学合成4条干扰RNA，与经MluⅠ和ClaⅠ酶切后的pLVTHM载体连接过夜，筛选并鉴定阳性克隆。利用脂质体2000将ShRNA—ARNT2i，pCMV—dR8．74，pMD2G共转染293T细胞，获得shRNA—ARNT2i慢病毒颗粒，进一步感染HCCLM6靶细胞，并分为转染shRNAARNT2i组、未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组。用荧光实时定量PCR和Westernblot检测ARNT2基因的干扰效率。应用划痕和Boyden小室法观察ARNT2表达下调对HCCLM6侵袭和迁移能力的影响。用SPSS16．0统计软件对数据进行独立样本t检验和方差分析，其中多组资料两两比较采用LSD法。结果荧光实时定量PCR检测转染shRNAARNT2i组，未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组3组ARNT2mRNA相对表达值分别为0．154±0．024、0．860±0．145、1．004±0．009，F=113．14，P〈0．01，差异有统计学意义；Westernblot显示转染stLRNA—ARNT2i组ARNT2蛋白的表达量为16．45±1．6，转染阴性对照序列组ARNT2蛋白的表达量为44．56±2．07，两组比较，t=18．58，P〈0．01，差异有统计学意义；转染shRNA—ARNT2i组细胞在划痕48h后基本愈合，而转染阴性对照序列组和未转染的空白对照组划痕依然可见；转染shRNAARNT2i组穿膜细胞数为（13．25±1．04）个，而未转染的空白对照组和转染阴性对照序列组的穿膜细胞数分别为（6．50±2．56）个、（6．75±2．05）个，F=29．645，P〈0．01，差异有统计学意义。结论shRNA—ARNT2i载体能显著下调HCCLM6细胞ARNT2基因和蛋白的表达，促进HCCLM6细胞的运动和侵袭。
- 李薇薇吴伟忠梁英肖春丽陶中华王鲁孙惠川樊嘉
- 关键词：肝细胞肿瘤迁移细胞
- 酪丝缬肽诱导高转移性肝癌细胞HCCLM3凋亡及机制研究
- 2009年
- 目的:观察酪丝缬肽(tyroservatide,YSV)诱导高转移性人肝癌细胞HCCLM3的凋亡,分析YSV对肿瘤细胞凋亡相关基因Bax与Bcl-2的影响。方法:建立人肝癌细胞HCCLM3的体外培养体系,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测YSV对体外培养的HCCLM3的增殖抑制作用,流式细胞仪检测对照组与YSV剂量组的凋亡率,实时定量PCR法检测YSV对肝癌细胞中Bax与Bcl-2 mRNA表达,Western blotting检测YSV对Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。结果:YSV可显著地抑制肝癌细胞HCCLM3的生长,当药物剂量10mg·L-1,作用72h时,抑制率为41.34%(P<0.05)。YSV不同浓度组随着药物作用时间的延长肝癌细胞凋亡率呈升高趋势。实时定量PCR结果显示YSV能上调促凋亡基因Bax mRNA的表达,同时下调凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA的表达。Western blotting在蛋白水平上进一步证实了实时定量PCR的结果。结论:YSV可在基因及蛋白水平上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,进而实现其诱导肝癌细胞HCCLM3的凋亡。
- 张宁王鲁梁英李薇薇陈洁孙惠川吴伟忠樊嘉
- 关键词：酪丝缬肽凋亡BAX
- 靶向Arnt的RNAi慢病毒载体的构建及其在HCCLM6中对Arnt基因表达的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:构建并鉴定Arnt基因特异性RNAi慢病毒载体,将其导入HCCLM6肝癌细胞中,筛选有效抑制ARNT表达的稳定细胞株。方法:针对已经筛选确定的Arnt基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pLVTHM载体连接[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]产生LV-shArnt慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-shArnt载体,pCMV-dR8.74载体,pMD2G载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白表达水平测定病毒滴度,挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染HCCLM6中,经过GFP筛选得到稳定抑制Arnt表达的HCCLM6细胞株,通过RT-PCR鉴定抑制Arnt表达的效果。结果:双酶切与测序鉴定证实成功构建了ArntshRNA的慢病毒载体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了HCCLM6,并且抑制了Arnt的表达。结论:运用pLVTHM载体构建的LV-shArnt慢病毒载体可有效抑制Arnt在肝癌细胞株HCCLM6中的表达,为观察转染shRNA慢病毒表达载体的肿瘤细胞的恶性生物学行为变化奠定了实验基础。
- 梁英吴伟忠李薇薇张宁孙惠川王鲁夏景林
- 关键词：ARNTRNA干扰慢病毒载体
- 稳定表达荧光的高转移人肝癌裸鼠模型的建立被引量：2
- 2008年
- 目的建立稳定表达红色或绿色荧光的人肝癌裸鼠转移模型。方法用带红色或绿色荧光蛋白基因的假慢病毒感染人高转移潜能肝癌细胞HCCLM3，获得稳定表达红色或绿色荧光的新细胞系HCCLM3-R和HCCLM3-G。1×10^7细胞皮下接种、2mm^3组织块原位移植裸鼠，建立稳定表达荧光的人肝癌裸鼠转移模型。结果皮下接种5只裸鼠和肝脏原位移植10只裸鼠肿瘤全部生长，经180d裸鼠体内连续6次传代肿瘤荧光表达稳定，肝内播散、肺转移和腹腔转移检出率分别为100％、100％和90％。结论采用HCCLM3-R、HCCLM3-G细胞所建立的荧光表达人肝癌裸鼠转移模型，是一个较理想的研究肝癌生长和转移的动物模型。
- 杨毕伟夏景林吴伟忠梁英孙惠川王鲁张巨波肖春丽刘康达汤钊猷
- 关键词：绿色荧光蛋白红色荧光蛋白
- 荧光可视高转移人肝癌裸鼠模型的建立方法
- 本发明属微生物动物细胞系领域，涉及可自发高强度红色或绿色荧光，具转移能力的荧光可视人肝癌裸鼠模型的建立方法。本发明用假慢病毒感染的方法获得荧光基因高染色体整合度、高荧光强度、表达稳定的人高转移荧光肝癌细胞系HCCLM3－...
- 吴伟忠孙惠川汤钊猷王鲁夏景林杨毕伟梁英徐泱
- 文献传递
