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肝癌靶向性超抗原表达载体的构建与鉴定被引量：3: 2003年; 目的　设计并构建受AFP基因顺式作用元件调控 ,并经减毒处理的肝癌特异性超抗原表达载体。方法　用新设计的引物作PCR扩增截短的AFP基因启动子和增强子、linker CD80tm和SEA(D2 2 7A)。将上述片断与逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点连接 ,构建成为AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原表达载体 [pLXSNSEA(D2 2 7A) Linker CD80tm],并用软件对其开放读框进行分析。结果　成功克隆了截短的AFP基因启动子、增强子、linker CD80tm和SEA(D2 2 7A)。将上述序列连接到逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点 ,酶切鉴定和DNA序列分析无误。结论　AFP基因转录启动元件修饰的SEA表达载体 ,在基因转录水平定量、定向、特异性调控强有力的细胞和体液免疫活化剂 (SEA) 。; 禄韶英隋延仿李增山潘承恩武文叶菁; 关键词：肝癌超抗原甲胎蛋白

肝癌靶向性超抗原基因疫苗的设计和预测被引量：6: 2003年; 目的 :探讨AFP顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原疫苗 (SEA(D2 2 7A) Linker CD80tm)设计的合理性。方法 :应用核酸和蛋白质分析软件GeneConstructionKit2 .0、ANTHERPRO5 .0、JAMBW1 1和www .expasy .com网站提供的方案 ,分析重组体的开放读框以及融合蛋白的可及性、柔性、抗原性和疏水性 ,并作了跨膜区和二级结构模拟。结果 :重组体的转录受AFP顺式作用元件调控 ,Linker所在部位柔性高 ,可及性弱 ,不改变两侧蛋白分子的抗原性和疏水性。融合蛋白表达后 ,被CD80tm锚定于肝癌细胞表面 ,超抗原部分 (SEA)表达在细胞膜外 ,二级结构预测Linker不改变蛋白结构 ,完全符合作者设计疫苗的初衷。结论 :重组疫苗设计合理 ,特异性高 ,融合蛋白有很大可能保留了SEA和CD80tm的理化特性 ,为进一步的实践操作提供了可靠的理论基础。; 禄韶英隋延仿李增山潘承恩武文叶菁; 关键词：肝癌

小鼠肝癌细胞系Hepa16 B7.1瘤苗抗肿瘤免疫的实验研究被引量：3: 2003年; 目的 :研究小鼠肝癌细胞系Hepa1 6转染B7.1基因后在体内外抗肿瘤免疫的作用 .方法 :采用脂质体介导的方法用pLXSNB7.1转染PA3 17包装细胞 ,经G4 18筛选出高滴度阳性的细胞克隆 ,以流式细胞仪检测B7.1分子的表达情况 ;用所获病毒上清进一步感染Hepa1 6细胞 ,观察转染B7.1基因后Hepa1 6细胞作为肿瘤疫苗在体内外诱发抗肿瘤免疫的情况 .结果 :Hepa1 6/B7.1高表达B7.1分子 ,其致瘤性明显降低 ,接种小鼠后成瘤率为 2 0 % ,而亲代Hepa1 6细胞成瘤率为 10 0 % .转B7.1基因肿瘤细胞疫苗可抑制肿瘤生长速度 ,延长荷瘤小鼠生存期 ;且转B7.1基因肿瘤细胞疫苗具有保护性免疫反应 .结论 :转B7.; 杨欣伟隋延仿李增山曲萍武文叶菁董海龙张秀敏; 关键词：小鼠 B7.1 癌症疫苗

人肝癌细胞中一个MAGE抗原表位的获得及mRNA水平分析被引量：1: 2002年; 武文隋彦仿郭爱林叶菁李增山杨欣伟张秀敏; 关键词：抗原肽黑色素瘤抗原基因肝癌基因表达

人肝癌细胞系中肿瘤相关基因MAGE的克隆被引量：13: 2002年; 目的　克隆人肝癌细胞系HHCC中的肿瘤相关基因MAGE 1的全长cDNA。方法　根据GenBank中MAGE 1基因编码区 ,设计PCR引物 ,用RT PCR方法 ,从人肝癌细胞系HHCC中获得MAGE 1全长cDNA ,双酶切后连接入质粒 pUC19中 ,转化入大肠杆菌DH5α。挑选阳性克隆提取质粒 ,进行DNA序列分析 ,并将测得的核苷酸序列与GenBank中的DNA序列进行BLAST同源性分析。结果　获得MAGE 1全长cDNA、MAGE 6基因 4 6 3bp片段 ,以及 1个与MAGE 6基因编码区有 93%同源性的片段 ,可能为MAGE家族中的新成员。结论　人肝癌细胞系HHCC可表达多种MAGE基因 ,可能有新的MAGE基因出现 ,为研究MAGE基因在HCC中的表达模式及其在HCC免疫治疗中的靶点提供了新的资料。; 武文隋延仿叶菁李增山郭爱林杨欣伟曲萍张秀敏; 关键词：抗原肽肝癌免疫治疗

重组SEA基因真核表达载体的构建及诱导小鼠抗肝癌免疫的效应被引量：5: 2002年; 目的　构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)真核表达载体 ,并通过体内转染 ,观察其诱导抗小鼠肝癌的免疫效应。方法采用基因工程技术构建SEA基因的真核表达载体 ,使其表达SEA分子。通过阳离子脂质体介导的体内转染 ,观察其对小鼠肝癌的治疗作用。用51 Cr释放法测定治疗组与对照组动物脾淋巴细胞杀伤H2 2 细胞的活性。结果成功地构建了SEA真核表达载体 pLXSN SEA ,体内转染 pLXSN SEA的荷瘤小鼠肿瘤明显缩小 ,生存期延长 ,4 10小鼠肿瘤完全消退 ,且长期无瘤生存。CTL杀伤活性实验表明 ,瘤区内转染pLXSN SEA可诱导强烈的CTL杀伤效应 ,与对照组相比较差异显著 (P <0 .0 1)。结论超抗原SEA体内转染对肿瘤具有明确的治疗作用。; 杨欣伟隋延仿李增山曲萍叶菁武文董海龙张秀敏; 关键词：肝癌超抗原肝癌 CTL 免疫效应动物实验

人肝癌中新基因MAGB-N的克隆及其表达研究: 最近的研究表明，MAGE-1基因在肝癌中的表达率较高，可作为肝癌主动免疫治疗的攻击靶点。而其他MAGE基因在肝癌中的表达文献中报道很少，明确其他基因在肝癌中的表达有助于更多的患者接受这种免疫治疗。MAGE基因家族成员同源...; 武文; 关键词：肝癌主动免疫治疗原位杂交技术肿瘤治疗; 文献传递网络资源链接

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武文