沃健儿
- 作品数：38 被引量：120H指数：5
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技厅资助项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血细胞毒性T淋巴细胞CD95表达及其凋亡率影响的实验研究
- 2005年
- 探讨IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血细胞毒性T淋巴细胞(CTL)CD95表达及其凋亡率的影响。分离 26例乙型肝炎患者(其中慢性乙型肝炎16例,慢性重型乙型肝炎10例)和20例健康献血员外周血单个核细胞 (PBMC),在IFNα-2a作用前后通过流式细胞仪分别检测PBMC中CTL CD95的表达及其凋亡率。结果表明,乙型肝炎患者外周血CTL存在活化诱导的细胞死亡(AICD)现象,而IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血CTL CD95表达及 CTL凋亡率并无影响。
- 李敏伟侯伟沃健儿姚航平刘克洲
- 关键词：干扰素Α-2A细胞毒性T淋巴细胞CD95
- Taqman实时荧光定量PCR快速检测白斑综合症病毒的方法研究被引量：24
- 2005年
- 目的:建立一种快速、特异、灵敏的实时荧光定量PCR方法用于检测白斑综合病毒DNA,为控制对虾白斑综合症提供科学依据。方法:根据GenBank登录的白斑综合病毒株序列,使用生物学软件进行序列对比,在白斑综合症病毒保守区序列设计引物和Tagman探针并进行筛选。对实时荧光定量PCR反应条件进行优化,提高了该方法的特异性、灵敏度和重现性等,并与标准方法(核酸探针点杂交)进行比对,对现场32份虾样进行了检测。结果:Tagman实时荧光定量PCR与标准方法的特异性符合率为100%,灵敏度超过标准方法的10000～100000倍,检测时间为标准方法的1/24,重现性良好(s=0.1～0.49,CV=0.78%～3.72%),并能准确定量。结论:本研究建立的Taqman实时荧光定量PCR方法用于白斑综合症病毒检测具有特异、灵敏、快速、定量、重现性好等优点。
- 王忠发邵俊斌沃健儿王虹玲蒋文雅何伟贤
- 关键词：TAQMAN荧光定量PCR方法病毒DNA病毒株
- SARS病毒分离与病原学研究被引量：4
- 2003年
- 目的 从浙江省首发的 3例临床诊断SARS患者样本中分离SARS病毒 ,并进行病毒核酸、免疫学检测和形态学观察。方法 采集 3例SARS患者发病期的含漱液 ,接种Vero、Vero -E6、RD、Hep -2、MK单层细胞 ,观察细胞病变、免疫荧光法检测病毒抗原和RT -PCR法检测病毒核酸。抗原阳性的培养物作电镜形态学观察。结果 从 3例患者的 2份含漱液中分离到 2株SARS病毒 ,并发现Vero和RD两种细胞对SARS病毒敏感 ,在接种病毒后的 3天左右可出现典型的细胞病变 ,两株病毒已在Vero和RD细胞上传代 5代 ;在电镜下观察到SARS病毒颗粒。结论 分离的 2株病毒确定为SARS冠状病毒 ,并能在Vero细胞上稳定传代 ;建立的间接免疫荧光技术可用于SARS实验室诊断及流行病学调查等。
- 李兰娟翁景清严菊英卢亦愚李敏红程苏云陆群英朱函坪葛琼史雯龚黎明汤鋆姚苹苹张严峻梅玲玲丁钢强徐芳吴南屏沃健儿姚军王志刚周敏朱智勇
- 关键词：SARS病毒病毒分离病原学严重急性呼吸综合症传染性非典型肺炎
- 不同结合臂长10-23 DNAzymes对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用
- 目的:探讨不同结合臂长10-23 DNAzymes在2．2．15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用。方法:设计并合成不同结合臂长的10-23 DNAzymes,能分别针对乙型肝炎病毒S 基因和C基因开放阅读...
- 沃健儿侯伟刘克洲李敏伟陈离伟胡中荣刘荣华胡敏君
- 文献传递
- 人类免疫缺陷病毒(HIV)感染中白介素—7(IL—7)与T细胞表面标志研究
- 课题背景:白细胞介素-7(IL-7)是一类主要由非骨髓来源的基质细胞和上皮细胞产生的细胞因子,在促进淋巴细胞,尤其是T淋巴细胞产生和发育成熟的过程中发挥重要作用。若体内缺乏IL-7,前T细胞会发生凋亡。IL-7受体属于Ⅰ...
- 邹薇吴南屏沃健儿
- 文献传递
- 不同结合臂长10-23DNAzymes对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨不同结合臂长1023DNAzymes在2.2.15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用。方法设计并合成不同结合臂长的1023DNAzymes,能分别针对乙型肝炎病毒S基因和C基因开放阅读框A157UG和A1816UG。不同的1023DNAzymes分别转染2.2.15细胞,放射免疫分析法测定2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg水平,实时荧光定量PCR法测定2.2.15细胞培养上清中HBVDNA水平。MTT法检测细胞毒性。结果不同结合臂长的1023DNAzymes在0.1～2.5μmol/L浓度范围内均能有效抑制HBsAg和HBeAg的表达,抑制效应可长达72h。在同一剂量相同转染时间的条件下,不同结合臂长的1023DNAzymes对HBsAg和HBeAg表达的抑制率呈以下关系:DrzBS9>DrzBS8>DrzBS7;DrzBC9>DrzBC8>DrzBC7。DrzBS9和DrzBC9在2.5μmol/L剂量条件下,转染48h后对HBsAg和HBeAg表达的抑制率可分别高达95%和92%。不同结合臂长的1023DNAzymes对2.2.15细胞培养上清中HBVDNA水平并无明显影响。MTT细胞毒性检测表明,在0.1～2.5μmol/L浓度范围内未见1023DNAzymes对2.2.15细胞的毒性作用。结论不同结合臂长1023DNAzymes在2.2.15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达均有一定的抑制作用,DrzBS9和DrzBC9的抑制作用较强。
- 侯伟沃健儿刘克洲李敏伟陈离伟胡中荣刘荣华胡敏君
- 关键词：DNAZYMES基因C基因乙型肝炎病毒
- 母婴间传播的HCV基因型分析及C区的基因变异
- 1997年
- 近年来,丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)母婴传播已成为 HCV 传播途径研究中的一个热点。我们曾对受 HCV感染孕妇的引产胎儿肝组织内 HCV RNA 的定位研究,证实HCV 母婴传播途径的存在。本文通过对孕妇/胎儿、产妇/新生儿和婴儿中检出的 HCV 基因型别的鉴定、孕妇血/胎儿肝组织内的 HCV C 区基因片段核苷酸序列分析,从 HCV 基因型分布和基因序列同源程度,探讨 HCV 的母婴传播。资料与方法一、研究对象23对 HCV RNA 和抗-HCV 均阳性的产妇外周静脉血/新生儿脐带血以及不同月龄随访到的婴儿外周静脉血标本、4对 HCV RNA 阳性的孕妇外周静脉血/引产胎儿肝组织匀浆标本。二、HCV 基因型分析采用 Okamoto 等的 HCV C 区基因逆转录——巢式聚合酶链反应(RT-Nested PCR)分型方法与命名系统。三、HCV C
- 沃健儿陈智刘克洲何南祥徐陈槐章明太
- 关键词：丙型肝炎基因型C区母婴传播基因变异
- 脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究被引量：27
- 2003年
- 目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) s基因和 c基因特异性的脱氧核酶 (DNAzyme)对 HBV表面抗原 (HB-s Ag)和 e抗原 (HBe Ag)表达的抑制效应。方法 :设计合成针对 HBV s基因 ORF A157UG、e基因 ORF A1816UG的DNAzyme Drz BS、Drz BC,在 2 .2 .15细胞上观察其对 HBV s基因、c基因的表达抑制效应。结果 :Drz BS、Drz BC作用于 2 .2 .15细胞后 ,可显著抑制 HBV s基因、c基因的表达 ,有效浓度为 0 .1～ 2 .5μmol/ L并呈剂量依赖性 ,最高抑制率分别为 94 .2 %和 91.8% ;有效抑制持续时间可达 72 h;Drz BS、Drz BC在细胞内对 Hbs Ag、Hbe Ag表达的抑制效率 ,明显高于作为对照的反义寡核苷酸 As BS、As BC,有效浓度较后者低至少 10倍。其对 2 .2 .15细胞的 HBVDNA复制无明显影响 ,亦未见明显的细胞毒性作用。结论 :在 2 .2 .15 HBV细胞模型系统 ,Drz BS、Drz BC能高效阻断 HBV s基因、e基因的表达 ,是一种特异性的、高效的抗 HBV基因治疗剂。
- 沃健儿吴晓玲朱海红周林福姚航平陈离伟
- 关键词：脱氧核酶乙型肝炎病毒基因表达
- HCV感染孕妇的引产胎肝内HCV RNA的定位研究被引量：14
- 1996年
- 为了探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）母婴传播是否发生于产前，用逆转录－套式－聚合酶链反应检测孕妇外周血及其引产胎肝匀浆中ＨＣＶＲＮＡ，同时用原位杂交技术检测引产胎肝细胞中ＨＣＶＲＮＡ。结果从６例外周血ＨＣＶＲＮＡ阳性的中期妊娠孕妇的引产胎肝组织匀浆中，４例胎肝检出ＨＣＶＲＮＡ，其中２例胎肝组织切片中发现ＨＣＶＲＮＡ原位杂交阳性胎肝细胞。阳性着色局限于胎肝细胞的胞浆内。提示ＨＣＶ母婴传播可发生于产前妊娠期，ＨＣＶＲＮＡ可定位于胎肝细胞浆内。
- 沃健儿陈智刘克洲何南祥徐陈槐章明太
- 关键词：母婴传播胎肝细胞原位杂交
- 乙型肝炎病毒大蛋白和DNA在抗病毒治疗中的变化被引量：28
- 2007年
- HBV是嗜肝DNA病毒，其S基因编码3种外膜蛋白，分别是主蛋白、中蛋白和大蛋白。近年研究表明HBV大蛋白（HBV-LP）与病毒侵入、组装和复制等密切相关，Bruss等研究发现，HBV-LP在病毒进入肝细胞时作为受体蛋白起作用，在病毒组装时，则是基质类似蛋白，同时还行使调节功能。而且这种多功能性依赖于HBV-LP前S区独特的双重拓扑结构。同时研究还表明，HBV-LP对HBV复制过程具有反式激活作用，并与病毒颗粒从细胞内释放调节有关。HBV—LP存在于感染性颗粒（Dane颗粒）和亚病毒管状颗粒上，是病毒形成完整外膜的重要标志，与血清HBVDNA拷贝数具有良好的相关性，能反映患者机体内HBV复制情况。魏红山等研究表明，在HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清中，
- 陈晓明杨美芳薛寒胡敏君陈离伟范骏沃健儿
- 关键词：嗜肝DNA病毒抗病毒治疗乙型肝炎病毒血清HBVHBEAG阴性反式激活作用
