王建秋
- 作品数：12 被引量：24H指数：4
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- 相关领域：生物学医药卫生经济管理更多>>
- 人ambp cDNA的克隆及重组hUTI在毕赤酵母中的表达
- 人尿胰蛋白酶抑制剂(human Urinary Trypsin Inhibitor, hUTI)是一种Kunitz 型蛋白酶抑制剂,对酸和热比较稳定,对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶、粒细胞弹力蛋白酶和纤溶酶等各种丝氨酸蛋白酶有...
- 王建秋
- 关键词：毕赤酵母
- 文献传递
- 人热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的在毕赤酵母(pichiapastoris)中高效表达人热休克蛋白70(hHSP70),制备具有天然与hHSP70相同结构和活性的重组hHSP70(rhHSP70)。方法用PCR法自人DNA文库中克隆hHSP70的DNA,构建真核表达载体pPICZα/hHSP70。经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X33。用PCR法筛选Zeocin抗性的转染阳性克隆,Westernblot法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的rhHSP70,筛选高表达工程菌。结果经PCR法克隆的hHSP70DNA序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。将hHSP70DNA定向插入pPICZα,构建pPICZα/hHSP70真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性的转染阳性克隆。SDSPAGE和Westernblot分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有rhHSP70,分子量72kD。氨基酸序列分析证实rhHSP70氨基端15个氨基酸与天然rhHSP70完全一致。rhHSP70表达量高达250mg·L-1。结论获得高效表达rhHSP70的毕赤酵母工程菌。
- 马杰焦平宿晓云贺巾超杨莉莉王建秋耿学军范伟全魏传宇张英罗琳孔宁颜炜群
- 关键词：基因表达毕赤酵母
- 抗CD_3单克隆抗体激活杀伤细胞高效扩增培养体系的建立及细胞毒活性检测被引量：1
- 2007年
- 目的：建立从20mL外周血中高效扩增抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞（CD3AK）的培养体系,并进行体外细胞毒活性检测。方法：采用抗CD3单克隆抗体（Anti-CD3mAb）激活人外周血单个核细胞（PBMC）,在人重组白细胞介素2（rIL-2）的协同活化下,获得CD3AK。对CD3AK进行长期体外培养,进行增殖动力学、免疫表型和体外抗肿瘤活性的分析。结果：在培养第7-22天,CD3AK增殖倍数明显提高,最高可达317倍;免疫表型分析显示,CD3^＋细胞从活化前的51.9%增加至94.6%,CD4^＋细胞从19.5%增加至51.1%,CD8^＋细胞从22.1%增加至52.1%;效靶比20∶1组和40∶1组的杀伤肿瘤细胞活性明显高于10∶1组（P〈0.05和P〈0.01）;在7-19 d的培养天数之内,杀伤肿瘤细胞活性最强。结论：从外周血中高效扩增的CD3AK是以CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋细胞为主的异质性细胞群,在体外有明显的杀伤肿瘤细胞活性。
- 张赢予张馨木王建秋张磊焦平王丁丁王文加马杰颜炜群
- 关键词：杀伤细胞淋巴因子激活细胞培养抗肿瘤活性
- PHOⅠ信号肽在毕赤酵母中引导分泌表达天然N-端rBPTI被引量：4
- 2005年
- 目的:在毕赤酵母(Pichia pastoris)中分泌表达天然N-端rBPTI。方法:将PHOⅠ/bpti基因克隆到真核表达载体pPICZα,电转化毕赤酵母菌株X-33。结果:构建了含PHOⅠ/bpti基因的表达质粒,并在X-33中分泌表达rBPTI。用胰蛋白酶抑制实验筛选出表达rBPTI的工程菌。表达上清经阳离子交换层析分离纯化为单一组份,SDS-PAGE显示相对分子质量为6 500。结论:PHOⅠ信号肽在毕赤酵母中成功地诱导分泌表达了具有正确N-端氨基酸序列的rBPTI。
- 杨莉莉贺巾超马杰范伟全王建秋魏传宇颜浩为颜炜群
- 关键词：毕赤酵母
- 人分泌型Klotho蛋白在CHO细胞中的稳定表达被引量：1
- 2006年
- 目的在CHO细胞中稳定表达人分泌型Klotho(hsKL)蛋白,制备具有天然结构的重组hsKL(rhsKL)蛋白。方法用PCR法自克隆载体pBS-hskl中克隆hsKLDNA,构建真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)-hskl。经核酸测序确证后,阳离子聚合物转染CHO细胞。用PCR法筛选具有Zeocin抗性的阳性细胞克隆,SDS-PAGE(银染色)法确定CHO细胞分泌蛋白的分子量,Western印记法鉴定CHO细胞的培养上清液中的rhsKL蛋白,确定稳定转染细胞株CHO-hsKL。结果经PCR法克隆的序列与GeneBank登录的hsklmRNA序列一致。将hsKLDNA定向插入pcDNA3.1/Zeo(+),构建pcDNA3.1/Zeo(+)-hskl真核表达载体并通过阳离子聚合物转染CHO细胞获得Zeocin抗性的转染阳性克隆。SDS-PAGE和Westernblot分析显示,转染的CHO培养上清中含有分子量约为66kDa的rhsKL蛋白。结论首次实现天然结构的hsKL蛋白的重组表达——获得稳定表达细胞株CHO-hsKL。
- 焦平马杰王文加王建秋王丁丁张赢予范伟全颜炜群
- 关键词：CHO细胞稳定转染
- 人α_1微球蛋白/bikunin前体cDNA的克隆与鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:从人胚胎肝、肾和胰腺组织RNA中钓取α1微球蛋白/bikunin前体(AMBP)cDNA序列,构建其重组克隆载体。方法:采用Trizol法提取人胚胎肝、肾和胰腺组织RNA,以此为模板,应用RT-PCR技术扩增目的基因,构建重组载体pMD18-T-ambp。采用蓝白筛选,经限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。结果:RT-PCR显示,仅从肝组织RNA中扩增出ambp基因片段,而肾和胰腺组织中均未检测出其 mRNA的转录。构建的重组载体经SalⅠ/EcoRⅠ双酶消化得到1098bp大小的片段,与人AMBP cDNA片段大小一致。序列分析结果显示,克隆到载体中的目的基因与GenBank上登录的人AMBP cDNA序列完全一致。结论:从人胚胎肝组织RNA中成功钓取了AMBP cDNA序列,并正确构建其克隆载体pMD18-T-ambp。
- 王建秋闫风琴张赢予李友筑颜炜群
- 关键词：CDNA克隆载体逆转录聚合酶链反应
- 重组人Bikunin的制备及其抑制肿瘤浸润和转移的研究
- 王建秋
- 关键词：毕赤酵母肿瘤
- 文献传递
- 256层螺旋CT O-MAR技术对髋关节置换术后伪影减除效果研究
- 目的:评估256层螺旋CT金属伪影减除技术(O-MAR,Orthopedic Metal Artifact Reduction)对髋关节置换术后患者所获的CT图像中金属伪影减除的效果,以期达到不增加患者辐射剂量的前提下获...
- 王建秋
- 关键词：髋关节置换
- 文献传递
- 车贷险信用风险管理研究
- 近几年，我国汽车工业的迅猛发展带来了汽车消费信贷市场的巨大发展空间，作为汽车消费信贷的重要辅助工具，汽车消费贷款保证保险业务（简称车贷险）曾对国内汽车消费信贷的快速发展起到了巨大的推动作用。而由于国内个人信用制度和法律体...
- 王建秋
- 关键词：信用风险管理控制
- 文献传递
- 电离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞P21蛋白表达的影响被引量：7
- 2005年
- 目的阐明电离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞P21蛋白表达的影响。方法采用免疫细胞化学方法和流式细胞术检测X射线照射对P21蛋白表达的时程和量效变化的影响。结果时程实验结果显示,离体培养的EL-4细胞经4.0Gy X射线照射后,P21蛋白表达在2～72h(免疫细胞化学方法检测)和8～72h(流式细胞术检测)明显增高(分别为P<0.01、P<0.001)。量效实验结果显示,X射线照射后24h,P21蛋白表达在0.5～6.0Gy(免疫细胞化学方法检测)和1.0～4.0Gy(流式细胞术检测)明显增高(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.001)。结论X射线能诱导P21蛋白表达增高,在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。
- 闫风琴王建秋付士波鞠桂芝
- 关键词：电离辐射P21蛋白表达
