王春娥
- 作品数：52 被引量：108H指数：5
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划国家科技基础条件平台建设计划更多>>
- 相关领域：医药卫生理学生物学轻工技术与工程更多>>
- 核磁共振氢谱和高压液相分子排阻层析-十八角激光散射仪对肺炎链球菌荚膜多糖的结构及分子质量分析被引量：5
- 2013年
- 目的对6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖进行结构和分子质量分析。方法核磁共振氢谱（1 H NMR）对6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖的结构进行分析，通过各特征质子的化学位移来确定多糖结构的完整性及批间一致性；高压液相分子排阻层析-十八角激光散射仪（ HPSEC-MALLS）对荚膜多糖的分子质量进行分析，以确定其分子质量及分布情况。结果6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖特征质子的化学位移与其标准化学位移一致；重均分子质量范围为7．182×104 g/mol （19A型）～1．273×106 g/mol（9V型）。结论 NMR和HPSEC-MALLS能够快速、高效地对各型肺炎链球菌荚膜多糖进行结构和分子质量分析。6种血清型肺炎链球菌荚膜多糖谱图中各个质子的化学位移完全符合该型肺炎链球菌荚膜多糖的化学结构，但荚膜多糖中存在含量不等的C多糖以及纯化过程中未去除彻底的醋酸盐类物质；由于荚膜多糖特性及纯化方式的不同，6种型肺炎链球菌荚膜多糖之间分子质量存在一定差异。
- 石继春罗树全李茂光李阿妮王春娥杨英英叶强谢贵林赵志强
- 关键词：化学结构
- 多糖蛋白结合疫苗中残留ADH和EDAC同时定量检测的液相色谱串联质谱法的建立被引量：2
- 2020年
- 目的建立同时定量检测己二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺[N-(3-dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodimide,EDAC]的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法,实现多糖蛋白结合物(肺炎球菌结合物、脑膜炎球菌结合物和b型流感嗜血杆菌结合物)中残留ADH和EDAC的定量研究。方法通过检测EDAC在纯水、中性水溶液[(50 mmol/L磷酸缓冲溶液(pH 6.8)、200 mmol/L氯化钠水溶液和疫苗培养基)]及0.1%甲酸(formic acid,FA)水溶液中的稳定性,确定实现EDAC完全转换为EDU的前处理条件。优化了色谱柱种类对ADH、EDU和EDAC的保留,以及质谱条件如产物离子、碰撞电压、Q1和Q3电压等对ADH和EDU定量灵敏度的影响,建立以C18WCX(2.1 mm×150 mm,5μm)为固定相,pH 2~3的0.1%FA-水和0.1%FA-乙腈为流动相的LC-MS/MS方法,实现ADH和EDAC(实际检测对象为EDAC的转换产物EDU)的高灵敏度定量分析。对建立方法的精密度、准确度、线性范围、检出限(LOD)和定量限(LOQ)进行验证。结果ADH在水溶液中较稳定,EDAC自溶解开始即水解为EDU,且难以完全转换,导致EDAC测定困难;在样品和标准品溶液中加入FA,可实现EDAC完全且快速的转换为EDU。ADH、EDU和EDAC在C18色谱柱上保留弱,在色谱柱的死时间附近出峰,无法实现这些化合物与样品基质的分离,而本文所选C18WCX固定相可实现目标化合物的保留且峰形较好。通过前体离子扫描、产物离子扫描,选择目标化合物的前体离子和响应强度较好的产物离子作为MRM的离子对,并用MRM自动优化程序获得目标化合物的最佳Q1、CE和Q3电压值。建立的方法检测的ADH和EDAC含量与峰面积线性关系良好,R2均大于0.999;ADH的LOD为3.96μg/L、LOQ为15.63μg/L,EDAC的LOD为0.58μg/L、LOQ为1.17μg/L,灵敏度较高;精密度(峰面积RSD<2%)及准确度(回收率为90%~105%)较高。结论建立的LC-MS/MS方法实�
- 李茂光龙珍李亚南王春娥李月琪毛琦琦叶强
- 关键词：ADH肺炎球菌结合疫苗脑膜炎球菌结合疫苗B型流感嗜血杆菌结合疫苗
- 多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵和去氧胆酸残留量液相色谱串联质谱检测方法的建立及验证被引量：5
- 2021年
- 目的建立多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)和去氧胆酸(deoxycholic acid,OBA)残留量的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并进行验证。方法建立以Kinetex色谱柱C18(2.1 mm×50 mm,2.6μm)为固定相,5 mmol/L甲酸铵、乙腈为流动相的LC-MS/MS法,并验证方法的线性范围、精密性、准确度、检出限及定量限。采用建立的方法检测23批肺炎球菌多糖(1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17A、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F)、3批b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)粗糖和精糖、3批A、C、Y、W135群脑膜炎球菌粗糖和精糖中CTAB及OBA残留量。结果 CTAB浓度在1.56~50μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=133 056 X-290 15,R2=0.999 9;OBA浓度在6.25~100μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=250.5 X-59.1,R2=0.999 7;OBA及CTAB对照品6次重复进样检测的保留时间和峰面积RSD均<2%;OBA和CTAB加标回收率均在91.8%~103.5%之间;OBA的检出限为1.02μg/L,定量限为2.04μg/L,CTAB的定量限为1.56μg/L。4、9N、9V和15B型肺炎球菌多糖无明显CTAB检出,其他血清型均有不同程度检出;大部分血清型肺炎球菌多糖中无明显OBA检出。3批A、C、Y、W135脑膜炎球菌粗糖中CTAB残留量为112.40~1 709.60μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量为0.08~43.20μg/L。3批Hib粗糖中CTAB残留量分别为1 265.10、1 189.00和1 513.30μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量分别为6.50、166.60、6.65μg/L。结论建立了多糖疫苗中CTAB和OBA的LC-MS/MS检测方法,该方法具有良好的精密性及准确度,可用于多糖疫苗及多糖结合疫苗中CTAB和OBA残留量的检测。
- 李茂光龙珍陈琼李月琪许美凤王春娥李亚南叶强
- 关键词：十六烷基三甲基溴化铵去氧胆酸肺炎球菌多糖
- 食品检验用标准菌株分子水平质控方法的建立与应用被引量：4
- 2018年
- 目的建立食品检验用标准菌株分子水平质控方法,并进行应用。方法使用16S rRNA基因序列分析、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型等分子生物学技术手段,对食品安全国家标准中使用的标准菌株进行分子确认,并对不同的批号进行验证。结果 16S rRNA基因序列比对结果符合该菌株所在的菌属,并获得标准菌株16S rRNA基因标准序列,不同批号的标准菌株16S rRNA基因序列完全一致;确定了每株标准菌株的ST型和基因型,并对不同批号的菌株进行了基因型比较,未发现型别改变;对无PulseNet标准操作方法的菌株,开展方法学研究,获得了最适用的限制性内切酶和电泳参数,建立了标准菌株分子指纹图谱,比较不同批号菌株的PFGE图谱,相似性均为100%。结论本研究首次将分子生物学技术应用到标准菌株的质量控制,突破了使用传统质控方法的瓶颈,从分子水平实现对标准菌株稳定性的评价,保证了标准菌株在食品检验过程中的稳定性和一致性。
- 徐潇石继春王春娥梁丽李康孙文媛陈翠萍叶强
- 关键词：标准菌株脉冲场凝胶电泳多位点序列分型食品检验
- HPSEC-MALS法检测多糖并与Sepharose CL-4B法关联的方法
- HPSEC‑MALS法检测多糖并与Sepharose CL‑4B法关联的方法，利用高效分子排阻色谱柱，采用高效分子排阻色谱‑多角度激光散射仪(HPSEC‑MALS)方法，测定多糖分子大小及其分布，并将其转化为琼脂糖凝胶(...
- 李茂光李亚南毛琦琦陈苏京王春娥赵丹许美凤叶强
- 文献传递
- 6群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因的分子生物学研究被引量：3
- 2017年
- 目的利用分子生物学方法,对25株6群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因(cps loci)进行研究。方法采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术,对25株6群肺炎链球菌进行分型;依据Gen Bank中收录的6群肺炎链球菌cps loci设计合成引物,以25株肺炎链球菌基因组DNA作为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行基因测定及分析;采用相邻合并分析(neighbour-joining analysis),根据MLST的7个管家基因和wciP、wzy、wzx这三个cps loci的代表基因分别绘制出系统发育树。结果根据MLST技术分析发现7株新的ST型菌株。25株6群肺炎链球菌cps loci的G+C含量为35.4%~35.5%,均属于I类;所有6C型wzy基因均有6个碱基的缺失。根据MLST的7个管家基因绘制的系统发育树,并根据cps loci的3个代表基因wciP、wzy和wzx绘制的系统发育树,差异很大。3个代表基因绘制的系统发育树,6C型为进化距离比较远的分枝,6A型和6B型的分枝进化距离相对较近;6D型与6B型在同一分枝内。结论获得了25株6群肺炎链球菌ST型和全长cps loci,完善了6群肺炎链球菌的菌种档案。
- 陈琼龙新星李红黄洋王春娥陈翠萍叶强
- 关键词：多位点序列分型系统发育树
- 淋球菌核酸检测试剂盒的质量评价被引量：3
- 2016年
- 目的对12种淋球菌核酸检测试剂盒进行质量评价。方法应用12种淋球菌PCR试剂盒质控参考品，按照各试剂盒说明书的方法提取模板及核酸扩增，检测各试剂盒的阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、批内精密度及最低检测限，并进行比较分析。结果12种试剂盒的阳性参考品符合率及阴性参考品符合率均为100％；批内精密度：各试剂盒检测结果D值的变异系数均小于5．0％；12种试剂盒中有10种试剂盒的最低检出限能达到1×10^3个菌／mL，其中3种能达到1×10^2个菌／mL，但另外2种试剂盒的最低检出限仅达到1×10^4个菌／mL。结论12种淋球菌核酸检测试剂盒质量均较好，性能可靠。
- 王春娥卢旭石继春刘茹凤李红陈琼唐静陈翠萍叶强
- 关键词：淋球菌试剂盒国家参考品实时PCR
- 14、18C、19F及23F型肺炎链球菌血清抗体定量检测方法验证被引量：3
- 2015年
- 目的验证14、18C、19F及23F型肺炎链球菌荚膜多糖血清Ig G抗体定量ELISA检测方法。方法以国际参考血清007sp为标准,测定4份国际质控血清的14、18C、19F及23F型Ig G抗体值,计算线性、检测限及定量限;同时计算准确度;连续测定15份质控血清,计算精密度。利用3份质控血清进行抑制试验,绘制抑制曲线,计算特异性。结果该方法的R2、检测限和定量限均可达到可接受标准,准确度较高,精密度良好,特异性较好。结论该定量检测方法经过验证可用于肺炎球菌疫苗临床血清检测。
- 李红陈琼唐静王春娥石继春叶强
- 关键词：肺炎链球菌抗体ELISA
- 屋尘螨变应原制品中铝含量微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱检测方法的建立被引量：1
- 2014年
- 目的建立微波消解-电感耦合等离子体原子发射光谱（inductively coupled plasma atomic emission spectrometry,ICP-AES）法检测屋尘螨变应原制品中铝含量,并进行验证。方法采用微波消解法对样品进行消解处理后,用ICPAES法测定样品中的铝含量,并对建立的方法进行线性范围、精密度、准确性验证,确定最低检出限和最低定量限;用建立的方法检测2批次屋尘螨变应原制剂中的铝含量。结果该方法铝元素浓度在0~0.30μg/ml范围内与分析线的响应值具有良好的线性关系（r=0.999 552）;0.10μg/ml标准品溶液连续进样11次,铝含量平均值为0.100 2μg/ml,相对标准偏差（RSD）为1.2%;6份样品溶液的铝含量平均值为10.90μg/ml,RSD为1.4%;3份样品溶液的平均加标回收率为95.5%,RSD为4.9%;该方法最低检出限为0.008 5μg/ml,最低定量限为0.028μg/ml。2批次共5份屋尘螨变应原制剂样品中铝含量测定结果均符合该企业注册标准中铝含量标准要求。结论微波消解法对样品消解完全,采用微波消解-ICP-AES法可以对屋尘螨变应原制品中的铝含量进行准确定量,该方法操作简便,灵敏度、精密度、准确度良好。
- 王春娥王瑾石继春王珊珊陈翠萍叶强
- 关键词：屋尘螨变应原微波消解电感耦合等离子体原子发射光谱
- 淋病奈瑟球菌国家参考品菌株的分子生物学特征分析被引量：3
- 2015年
- 目的对中国医学细菌保藏管理中心收集保藏的淋病奈瑟球菌(NG)国家参考品菌株进行分子生物学特征分析。方法对13株NG国家参考品菌株进行16S rRNA和隐蔽性质粒cppB基因扩增和分析,并采用多位点序列分型(MLST)、NG多抗原序列分型(NG-MAST)技术对菌株进行分子分型。结果 13株菌种均扩增出预期大小的16S rRNA基因片段,与NG模式菌株参考序列(X07714.1)的相似性均>99%;13株菌种均扩增出预期大小的cppB基因;MLST结果显示,13株菌种共分为10个ST型,其中含7个新的ST型;NG-MAST结果显示,13株菌种含9个por等位基因和9个tbpB等位基因,配对后是10个不同的ST型,其中含6个新的ST型。结论该研究完善了NG国家参考品菌株的分子生物学方面的质控指标,为今后NG参考品候选菌株的选择提供了新的技术手段。
- 王春娥刘茹凤石继春李康陈琼陈翠萍叶强
