程远国
- 作品数：78 被引量：200H指数：8
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 跨膜型肿瘤坏死因子α稳定表达细胞株的构建
- 2013年
- 目的:在体内,相对分子质量为26×103的跨膜型肿瘤坏死因子α(mTNF-α)可被TNF转化酶(TACE)酶解成相对分子质量为17×103的游离型TNF-α(sTNF-α)。为评价新研发的TNF-α全人源单克隆抗体与mTNF-α的结合能力,以及该单抗的ADCC作用,须构建只能稳定表达mTNF-α而不受TACE影响的Sp2/0细胞株。方法:PCR扩增缺失了TACE酶切位点的人TNF-α野生型基因序列,构建pcDNA3.1(+)-dTNF-α重组质粒并测序鉴定;重组质粒转染Sp2/0细胞,构建只能稳定表达mTNF-α的细胞株,用流式细胞仪检测其表达情况。结果:pcDNA3.1(+)-dTNF-α重组质粒测序结果与设计缺失基因的碱基序列完全一致,重组质粒构建成功;转染的阳性细胞株经流式细胞仪检测有表达,其中Clone11、15、16的表达量最高。结论:跨膜型TNF-α稳定表达细胞株构建成功,可用于TNF-α全人源单克隆抗体体外药效的评价。
- 童欣程远国钱爱东
- 关键词：基因缺失流式细胞术
- 长角血蜱唾液腺中胶原特异性血小板聚集抑制因子的纯化及其作用机制研究
- 我们从长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)唾液腺中纯化了一种新的胶原特异性血小板聚集抑制因子——longicornin,并对其作用机制进行了初步研究.
- 程远国吴厚永李德昌
- 关键词：长角血蜱唾液腺胶原血小板
- 文献传递
- LC-MS/MS测定荷瘤裸鼠血浆中和厚朴酚脂质体浓度及其药代动力学研究被引量：3
- 2015年
- 目的：建立测定荷瘤裸鼠血浆中和厚朴酚脂质体的高效液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）法,并进行荷瘤裸鼠体内药代动力学研究。方法：采用YMC C18（100 mm×2.1 mm,1.7μm）色谱柱,流动相B为0.025%氨水乙腈,A为0.025%氨水,在线脱气,流速0.8 m L/min。梯度洗脱：0~2 min,B相85%~85%;2~4 min,B相85%~10%;4~6 min,B相10%~85%;6~8 min,B相85%~85%,柱温40℃。进样量10μL。质谱条件：离子源电喷雾电离源（ESI）,负离子电离模式,扫描方式多级反应监测（MRM）,监测离子对m/z和厚朴酚（265.0→223.0）和内标（253.0→225.0）。结果：血浆中无干扰测定的内源性物质,每个样品的分析时间为8 min;和厚朴酚在0.500~1000 ng/m L呈良好的线性关系,定量下限为0.500 ng/m L,日内、日间精密度RSD均小于15%,低、中、高3种浓度的提取回收率〉64.71%。稳定性实验中,在各种贮存条件下血浆中和厚朴酚均较稳定。结论：本方法操作简便,特异性强,灵敏度高,可用于和厚朴酚脂质体的药代动力学研究,以期为临床应用提供参考。
- 丁士雯马红霞李娴刘运龙陈知航单成启程远国陈俐娟
- 关键词：液质联用梯度洗脱药代动力学
- 重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体免疫原性检测方法的建立被引量：2
- 2015年
- 目的：建立一种灵敏、特异、操作简单的ELISA方法,用于检测食蟹猴血清中抗CD20单克隆抗体的免疫原性。方法：首先采用桥连ELISA法对抗药物抗体（ADA）进行定性筛选,以抗CD20单克隆抗体作为包被抗体,以生物素标记的抗CD20单克隆抗体作为检测抗体,二者共同结合血清中存在的ADA,以D450/560nm值超过临界值作为阳性判断标准;初筛为阳性的样本采用免疫清除法进一步确证,并同时进行免疫交叉试验考察ADA对供试品和原研对照品的免疫反应有无差异。结果：建立了检测ADA的筛选方法和确证方法,确定了检测的临界值和归一化因子,血清中抗药物抗体的检测灵敏度达3.5 ng/m L,批内/批间精密度介于3.1%~7.4%,准确度介于-1.2%~9.5%;食蟹猴连续给药后,部分个体产生特异性抗体,且抗体滴度随时间延长而增高。结论：建立的ADA筛选方法和确证方法可用于毒性试验的免疫原性检测;动物给药剂量对抗体的产生有较大影响,低剂量连续给药更易诱发特异性抗体产生。
- 孟庆芳马志强陈知航李丽刘运龙单成启钱小红程远国
- 关键词：抗CD20单克隆抗体免疫原性
- 检测HSA-GLP-1融合蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立被引量：2
- 2013年
- 目的：为检测血清中HSA-GLP-1融合蛋白整体分子的浓度，建立一种特异、灵敏的定量检测食蟹猴体内HSA-GLP-1融合蛋白浓度的双抗体夹心ELISA的方法。方法：采用双抗体夹心ELISA方法，以GLP-1单克隆抗体为包被抗体、HSA-GLP-1融合蛋白为夹心抗原、anti-HSA-Biotin为检测抗体，用Streptavidin-HRP进行免疫放大，TMB显色。结果：建立了检测HSA-GLP-1融合蛋白的ELISA方法，其线性范围为15.6~1000 ng/mL，最低检测限为15.6 ng/mL，与GLP-1、HSA、IL2-HSA均无交叉反应，板内和板间精密度均小于15%，准确度为±15%，冻融稳定性和稀释稳定性良好。结论：建立的HSA-GLP-1蛋白检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求，可用于HSA-GLP-1融合蛋白在临床前药代动力学试验的定量检测。
- 王秋实刘运龙张玉民陈知航钱爱东程远国
- 关键词：双抗体夹心ELISA
- 恶性疟原虫海南株(FCC1)翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的克隆及序列测定被引量：4
- 2002年
- 为了获得翻译控制肿瘤蛋白 (TCTP)基因 ,提取恶性疟原虫海南株 (FCC1)总RNA ,直接用总RNA反转录成单链DNA ,再用长距PCR方法扩增出双链cDNA .根据小鼠约氏疟原虫TCTP基因序列设计引物 ,以cDNA为模板合成了恶性疟原虫海南株TCTP基因 .以pMD18 T为载体 ,用大肠杆菌XL1 blue对基因克隆 .测序结果表明 ,此基因序列与小鼠约氏疟原虫TCTP基因序列有 85 %同源性 .由此基因序列推导出的TCTP氨基酸序列 ,与小鼠约氏疟原虫TCTP氨基酸序列有 88%同源性 .进入GenBank国际基因库 (美国 )检索 ,所克隆的基因与基因库中恶性疟原虫基因同源性为 97% ;由所克隆的基因序列推导的TCTP氨基酸序列 ,与国际基因库恶性疟原虫TCTP基因推导的TCTP氨基酸序列仅有 1个氨基酸差异 .
- 傅作申程远国张玉静阮承迈单成启侯禹男陈知航陈泽建李英
- 关键词：恶性疟原虫海南株克隆
- 疟原虫翻译控制肿瘤蛋白TCTP过表达及基因敲除载体的构建
- 目的构建翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）过表达及基因敲除载体,转染恶性疟原虫,筛选TCTP- 过表达及缺陷型虫株。以期了解TCTP结构、功能及其在寄生虫生活史中的作用并阐明TCTP与蒿素作用及抗性机制的关系。方法（1）构建T...
- 陈知航侯禹男单成启程远国
- 关键词：基因敲除过表达疟原虫
- 文献传递
- 新型抗心绞痛药物雷诺嗪研究进展被引量：2
- 2008年
- 心肌缺血通常导致一系列的代谢变化,通过改善缺血心肌的代谢和心肌功能,可治疗缺血性心脏病。论文对代谢性治疗药物雷诺嗪抗心绞痛的作用机制及临床应用进行综述。
- 王焕章程远国刘学龙
- 关键词：心肌缺血心肌代谢雷诺嗪心绞痛
- 蛋白质多肽长效微球注射剂的体内药动学及分析方法研究进展被引量：4
- 2007年
- 长效微球注射剂作为一类处于热点研究中的新型释药系统,在蛋白质、多肽的递送中受到了日益广泛的重视和应用。但是,微球的释药机制复杂,蛋白质、多肽的体内药物分析又存在着诸多困难,因而蛋白质、多肽长效微球注射剂的体内药物释放及评价是此类药物制剂研发的瓶颈之一。现介绍近年来蛋白质、多肽长效微球注射剂的体内释药机制及药动学研究进展,并着重对蛋白质、多肽长效微球注射剂的体内药物分析方法进行综述。
- 艾国程远国
- 关键词：蛋白质多肽微球药动学分析方法
- 检测脂肪酸化胰岛素放射免疫分析方法的建立
- 2014年
- 目的：建立一种高灵敏度、高特异性、操作简单快捷的放射免疫分析法（RIA）,用于检测比格犬血浆中的脂肪酸化胰岛素。方法：所用试剂盒主要以豚抗胰岛素抗体为主要特异性试剂,利用均相竞争抑制原理,采用平衡竞争法对比格犬血浆进行直接测定。在该系统中加入未标记的标准品或样品,则标记抗原和非标记抗原将竞争有限且定量的抗体结合位点。结果：建立了检测脂肪酸化胰岛素的RIA法并进行了确证,方法的线性范围为3.125~800μU/mL,最低检测限为3.125μU/mL,批内和批间精密度分别为4.5%~7.0%和3.9%-7.6%,冻融稳定性和稀释稳定性等良好。结论：方法学确证结果表明,本研究建立的脂肪酸化胰岛素RIA检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于脂肪酸化胰岛素在临床前药代动力学试验的检测。
- 谌瑛钱爱东程远国
- 关键词：放射免疫分析法
