罗曼
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 供职机构：浙江大学化学工程与生物工程学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 体外重折叠核糖核酸酶A及其荧光结构表征被引量：3
- 2006年
- 核糖核酸酶A(RNase A)作为蛋白质体外重折叠研究的模型蛋白,考察了稀释复性过程中脲浓度、稀释倍数、氧化还原环境(GSH浓度和GSH/GSSG比例)、pH值、温度以及聚集抑制剂的添加对该酶活性回收率的影响.在变性蛋白浓度为100μg?mL-1,复性液含有2 mol?L-1脲,GSH浓度2 mmol?L-1,GSH/GSSG比为4∶1,pH8.0,并添加终浓0.1%的PEG,转速为150 r?min-1,温度37℃的条件下复性,RNase A的活力回收率可达70%以上.利用荧光分析法对RNase A复性过程的结构变化进行了表征,在此基础上对RNase A体外重折叠过程蛋白质分子的构象变化以及活性中心的形成过程进行了阐述.
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- 关键词：核糖核酸酶A稀释复性荧光分析法分子结构
- 大肠杆菌二硫键形成蛋白A(DsbA)研究进展被引量：6
- 2007年
- 二硫键形成蛋白A(DisulfidebondformationproteinA,DsbA)是存在于大肠杆菌周质胞腔内的一种参与新生蛋白质折叠过程中催化二硫键形成的折叠酶。综述了DsbA三维结构、进化过程、协助蛋白质体内外复性方面的研究进展。DsbA比硫氧还原蛋白具有更强的氧化性,其强氧化性来自于Cys30残基异常低的pKa值和不稳定的氧化型结构,通过定点突变的研究表明了Cys30残基是DsbA活性中心最关键的氨基酸残基之一。DsbA不论在体内与目标蛋白融合表达还是在体外以折叠酶形式添加,都能有效地催化蛋白质的折叠复性,同时DsbA还具有部分分子伴侣的活性。
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- 关键词：DSBA蛋白质折叠
- 核糖核酸酶A的稀释复性及其荧光结构表征的研究
- 随着基因工程技术的发展,DNA重组技术大量应用于蛋白质的异源表达。但是,许多异源表达产物通常是错误折叠的并聚集成团,以不溶性的包涵体形式存在于细胞之中。对蛋白质分子的折叠过程的研究,不仅可以阐明蛋白质分子的氨基酸序列与其...
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- 文献传递
- 重组二硫键异构酶的纯化及其协助蛋白质重折叠研究
- ＜正＞二硫键异构酶（Disulfide bond formation protein A,DsbA）存在于大肠杆菌周质腔中,具有很强的氧化性,分子量约为23kD。二硫键的形成在蛋白质的折叠过程中是一个限速步骤,DsbA能...
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- 文献传递
- 重组二硫键异构酶在大肠杆菌中表达条件的统计优化被引量：4
- 2005年
- 二硫键形成蛋白A (disulfidebondformationproteinA ,DsbA)是大肠杆菌周质胞腔中辅助多种含有二硫键的蛋白质正确折叠并具有生物学活性的一种二硫键异构酶.通过统计实验设计的方法将生产重组DsbA的发酵过程进行了优化.首先通过Plackett Burman设计挑选出了对DsbA表达量影响较大的四个因素,然后再利用杂合设计进行实验,并通过拟合得到了响应曲面函数,但该函数的驻点是鞍点,因此不具有全局的极值.最后通过约束优化得到了较佳的实验点,在该实验点下DsbA的表达量比基本培养条件下提高了5 0 .14 % .
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- 重组DsbA表达统计优化及其协助溶菌酶体外复性研究
- 二硫键形成蛋白A (Disulfide bond formation protein A, DsbA) 是大肠杆菌周质胞腔中辅助多种含有二硫键的蛋白质正确折叠并具有生物学活性的一种二硫键异构酶，通过统计实验设计的方法将生...
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- 关键词：PLACKETT-BURMAN设计响应面法溶菌酶体外复性
- 文献传递
- 小分子伴侣协助重组人γ-干扰素体外复性研究被引量：8
- 2004年
- 考察了小分子伴侣在游离和固定化两种情况下 ,对重组人γ 干扰素 (rhIFN γ)体外重折叠复性的作用 .实验结果表明 ,小分子伴侣GroEL191～ 345的加入有效地促进了rhIFN γ的复性 ,在初始蛋白质浓度为 10 0mg/L时 ,rhIFN γ复性后蛋白质回收率提高了 2 2倍 ,总活性提高了近 3倍 ;将小分子伴侣固定化在NHS activatedSepharoseFastFlow凝胶后 ,不但能重复利用 ,而且进一步提高了rhIFN γ复性效率 ,在初始蛋白质浓度为4 0 0mg/L时 ,仍使蛋白质回收率达到 4 6 2 9%和比活达到 1 95× 10 7U/mg .
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- 关键词：重组人Γ-干扰素复性包涵体
- 分子伴侣介导的基因工程药物γ-干扰素体外重折叠复性技术
- 干扰素(Interferon,IFN)是一种高活性、多功能诱生蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等生理功能,因而在医药、临床医学等领域有着重要的应用。与IFN-α/β相比,IFN-γ具有更强的免疫调节和细胞抑制活性,因而...
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- 文献传递
