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董小岩

作品数：32 被引量：203H指数：6
供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室更多>>
发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划病毒基因工程国家重点实验室开放课题基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>

合作作者

文献类型

  • 24篇期刊文章
  • 6篇专利
  • 1篇学位论文

领域

  • 17篇医药卫生
  • 12篇生物学
  • 1篇文化科学
  • 1篇理学

主题

  • 18篇基因
  • 9篇细胞
  • 8篇腺相关病毒
  • 7篇肿瘤
  • 7篇基因治疗
  • 7篇病毒
  • 6篇单纯疱疹
  • 6篇单纯疱疹病毒
  • 6篇疱疹
  • 6篇病毒载体
  • 5篇肿瘤细胞
  • 5篇基因表达
  • 4篇蛋白
  • 4篇荧光
  • 4篇腺病
  • 4篇腺病毒
  • 3篇荧光素
  • 3篇制剂
  • 3篇体外
  • 3篇重组腺相关病...

机构

  • 19篇中国疾病预防...
  • 8篇复旦大学
  • 5篇上海市第一人...
  • 4篇中国人民解放...
  • 4篇温州医学院
  • 4篇中国预防医学...
  • 2篇宁夏医科大学...
  • 2篇中南大学
  • 1篇吉林大学
  • 1篇华西医科大学
  • 1篇南方医科大学
  • 1篇四川大学华西...
  • 1篇中国科学院研...
  • 1篇南方医科大学...
  • 1篇中国检验检疫...
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  • 1篇863计划生...
  • 1篇基因技术股份...

作者

  • 31篇董小岩
  • 28篇吴小兵
  • 9篇田文洪
  • 7篇王刚
  • 6篇侯云德
  • 5篇黄倩
  • 4篇张圣海
  • 4篇谭淑萍
  • 4篇吴继红
  • 3篇尉迟捷
  • 3篇李川源
  • 3篇伍志坚
  • 3篇伍志坚
  • 3篇谭文杰
  • 3篇付昕阳
  • 2篇柳云帆
  • 2篇高基民
  • 2篇王岳
  • 2篇陈素云
  • 2篇彭忞

传媒

  • 9篇病毒学报
  • 5篇生物工程学报
  • 2篇中国肿瘤生物...
  • 1篇生物技术通讯
  • 1篇中国科学（C...
  • 1篇科学通报
  • 1篇中华医学杂志
  • 1篇第一军医大学...
  • 1篇中华血液学杂...
  • 1篇医学与哲学
  • 1篇中国科学：生...

年份

  • 3篇2011
  • 8篇2010
  • 4篇2009
  • 2篇2008
  • 3篇2007
  • 1篇2005
  • 1篇2004
  • 1篇2003
  • 1篇2001
  • 2篇2000
  • 2篇1999
  • 1篇1998
  • 1篇1997
  • 1篇1996
共 32 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
体外实时动态监测水动力注射分泌型荧光素酶基因的表达被引量：6
2009年
为了建立体外实时动态监测转导基因的体内表达,本研究选择分泌型的荧光素酶基因Gluc作为报告基因,对其体内外表达特性和检测方法进行了研究。首先构建了Gluc表达质粒pAAV2neo-Gluc。将pAAV2neo-Gluc转染体外培养的Huh7、HepG2细胞后,细胞培养上清和细胞裂解液中分别检测到Gluc的活性,而上清比细胞中的含量高约100倍。表明表达的Gluc以分泌形式为主。用水动力法经小鼠尾静脉注射pAAV2neo-Gluc质粒,活体成像表明Gluc在小鼠体内呈全身分布,而注射了萤火虫荧光素酶质粒pAAV2neo-Fluc的对照小鼠则主要在肝脏显像。将剂量分别为0.1、1、10、50μg每只的pAAV2neo-GlucDNA用水动力法尾静脉注射小鼠,不同时间点连续尾静脉采血测定其中的Gluc酶活性,观察其Gluc体内表达和分泌的动态变化。结果显示,各剂量组的Gluc表达变化规律高度一致:注射后2h即可检测到Gluc表达,10h后达到高峰,之后逐渐下降;Gluc的表达水平与注射质粒DNA的量呈正相关;为了进一步观察Gluc检测的灵敏性,本研究又比较了注射更低的质粒剂量(包括0.001、0.01和0.1μg每只)时Gluc体内表达情况。结果发现注射剂量低至0.001μg每只小鼠都能在血中检测到Gluc表达,这一结果提示了Gluc检测的高度灵敏性。本研究首次报道了以Gluc为报告基因体外实时动态监测水动力注射基因的表达规律,为动态分析水动力注射基因的体内表达调控及功能研究提供了新的有效手段。
田文洪王刚罗顺涛董小岩付昕阳谭文杰吴小兵
关键词：基因表达EXVIVO
一种高效快速浓缩腺相关病毒载体的方法被引量：4
2005年
腺相关病毒载体(adeno associatedviralvector,AAVvector)是一种具有良好应用前景的基因治疗载体。研究中往往需要高滴度的重组AAV病毒(>105v g /细胞),为此利用完整的腺相关病毒颗粒具有耐受有机溶剂的特点,创造性地采用了一种用乙醇沉淀重组AAV病毒的方法,达到了高效、快速浓缩AAV载体的目的。结果表明,乙醇沉淀法可以高效浓缩AAV载体,并且对病毒的结构和活性没有明显影响。用这种方法可以方便地将低滴度的AAV病毒变成高滴度,解决动物体内实验中每点注射体积受到限制的问题。
彭建强彭忞谭淑萍曹晖连忠辉董小岩吴小兵
关键词：腺相关病毒载体滴度基因治疗载体
含乙型肝炎表面抗原基因重组腺相关病毒的构建及其基因的表达和功能初步研究被引量：2
2003年
目的构建含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的重组腺相关病毒(rAAV)并观察目的基因的表达和功能。方法采用PCR法从PTHBV-1质粒中扩增HBsAg基因(ayw 亚型);将PCR扩增产物插入腺相关病毒(AAV)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-HBsAg;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418筛选得到转入重组质粒并能表达目的基因的细胞系BHK-HBsAg;用具有rAAV包装功能的HSV-1- HSV1-rc/△UL2感染BHK-HBsAg,纯化后得到rAAV-HBsAg;ELISA检测重组病毒表面抗原基因在BHK-21细胞和293细胞中的表达;用rAAV-HBsAg免疫BalB/C小鼠,RIA法检测血清中表面抗体的滴度。结果ELISA法检测到混合细胞系BHK-HBsAg中HBsAg的表达量为(28.6±6.7)ng/5×106细胞;rAAV-HBsAg感染BHK-21细胞和293细胞后均能检测到HBsAg的表达,表达量随感染复数的增加而升高;rAAV-HBsAg免疫的BalB/C小鼠能产生表面抗体(抗-HBs抗体)。结论rAAV-HBsAg在体外能表达,免疫动物能诱导体液免疫反应的产生。rAAV-HBsAg有希望成为乙型肝炎候选疫苗,也可以进一步用于探索慢性乙型肝炎的免疫治疗。
胡贵方吴小兵俞守义董小岩陈清候云德
关键词：乙型肝炎表面抗原基因表达重组腺相关病毒
一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法被引量：109
2000年
利用2型腺病毒伴随病毒(adeno-associated virus type 2, AAV-2)能够抵抗氯仿的特性, 采用"氯仿处理-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提" 3个步骤分离、浓缩和纯化重组腺病毒伴随病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV), 整个纯化过程可在4 h内完成. 最终从5个转瓶生长的4×109个载体生产细胞中可得到5×1013 病毒颗粒/mL, SDS-聚丙烯酰胺凝胶结果表明, rAAV的纯度大于95%, 电子显微镜下绝大多数病毒颗粒的结构完整. 纯化后的rAAV仍保持较强的感染性, 其感染性滴度达到2×1012 转导单位(transducing unit, TU)/mL, 总的病毒颗粒数与感染性病毒颗粒数的比值为25. 为rAAV 大规模生产后的纯化提供了一种简便、快速、低成本的方法.
吴小兵董小岩伍志坚屈建国侯云德
关键词：氯仿纯化病毒学
阿糖胞苷与腺相关病毒的复合制剂及其用途
本发明属于生物医药领域，涉及新的基因治疗复合制剂及其用途和使用方法。公开了在使用腺相关病毒作为基因传递载体时，联合使用一定剂量的阿糖胞苷，可以明显增加腺相关病毒对正常和肿瘤细胞的转导效率，使腺相关病毒介导的外源基因的表达...
黄倩张圣海吴继红吴小兵董小岩李川源
文献传递
抗AAV2单克隆抗体的制备及特性研究
2009年
以纯化的重组AAV2病毒颗粒为抗原免疫小鼠,获得7株稳定分泌抗AAV2衣壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其中B10和G4两株单克隆抗体具有中和活性,抗体亚型分别为IgG1和IgG2a型。对这两株单克隆抗体与rAAV病毒结合的特性进行了研究。单克隆抗体B10和G4对rAAV2病毒颗粒的结合均具有良好的血清型特异性,并且这种特异结合作用不被肝素阻断。这两株抗体都不阻断AAV2病毒与敏感细胞的结合,提示它们与病毒颗粒的结合位点都不处于AAV2病毒与主要受体结合的部位内。Western blotting检测结果显示,B10与AAV2的三种衣壳蛋白VP1、VP2和VP3均能结合,而G4不能与AAV2的这三种衣壳蛋白结合。这说明B10与AAV2结合的位点位于衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的重叠部分处并且可能是线性表位,而G4则可能是针对AAV2病毒颗粒构象表位的抗体。这两种结合特性不同的单克隆抗体为研究AAV2病毒颗粒的表面特性和感染特性提供有用的工具。
谭淑萍袁振华田文洪董小岩吴小兵
关键词：单克隆抗体中和抗体
双萤光素酶共表达载体构建及特性研究被引量：4
2010年
利用来源于TaV的自剪切多肽2A的编码序列构建一种分泌型萤光素酶Gluc和非分泌型萤光素酶Fluc共表达的载体,对其体内外表达及活体成像特点进行研究。采用重叠PCR技术获得Gluc-2A-Fluc片段,克隆入表达质粒pAAV2neoCAG中,获得重组质粒pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc。将重组质粒瞬时转染BHK-21细胞,24h后在细胞上清液和细胞裂解液中均能检测到Gluc和Fluc的表达,其中Gluc98%以上分布在上清液中,而Fluc98%以上存在于细胞中,随时间延长Gluc活性在上清液中逐步增加,而细胞内Fluc活性则保持相对平稳。用水动力法经小鼠尾静脉注射pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc质粒DNA,通过尾静脉微量采血(2.5μl/次)即可实时地监测体内Gluc的表达情况。活体成像结果显示,注射Gluc的底物腔肠素时小鼠明显表现为全身显像,显像在10min内迅速衰减;而注射Fluc的底物D-Luciferin时显像主要集中在肝脏,显像在30min内都比较稳定。本研究设计和构建的pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc质粒实现了分泌型和非分泌型萤光素酶的共表达,既可以在不裂解细胞或处死动物的情况下直接在细胞培养上清或血液中动态检测Gluc的活性,又可以利用活体成像技术准确定位Fluc表达部位,比单一的萤光素酶报告载体在细胞标记和体内示踪研究方面更具优越性。
付昕阳王刚田文洪陈素云董小岩吴小兵谭万龙
关键词：共表达
以粘粒为基础构建重组单纯疱疹病毒及其用途
本发明叙述了一种以含有HSV1全基因组的5个粘粒(cos6,cos28,cos14,cos56,cos48)为基础的简便而高效地产生重组单纯疱疹病毒的方法。将含有外源基因的粘粒与其余4个粘粒等摩尔混合,经PacI酶切后共...
吴小兵伍志坚董小岩侯云德
文献传递
质粒型单纯疱疹病毒系列载体的构建和用途
本发明涉及3种质粒型单纯疱疹病毒载体的构建和用途。这些载体分别含有以下共同元件:HSV－1复制起点oriS序列及IE68启动子、lacZ基因、SV40polyA、HSV－1包装信号“a”序列和大肠杆菌质粒骨架。首先构建了...
吴小兵董小岩蒋立新伍志坚侯云德
文献传递
重组AAV2/hFⅨ病毒制备及其基因治疗血友病B的实验研究被引量：4
2004年
目的　制备携带人凝血因子Ⅸ (hFⅨ )基因的重组AAV2病毒 (rAAV2 /hFⅨ ) ,并对用rAAV2 /hFⅨ肌肉注射治疗血友病B模型小鼠的疗效进行评价。方法　通过“一株载体细胞 /一株辅助病毒”的双因素包装策略制备出rAAV2 /hFⅨ ,体外转导BHK 2 1、C2C12细胞后 ,检测细胞培养上清中hFⅨ的表达量 ;肌肉直接注射血友病B模型小鼠后 ,检测其血浆中hFⅨ的抗原水平和凝血活性等指标。结果　转导 2 4h后在细胞上清中即可检测到hFⅨ ,连续检测 12 0h都有表达 ,BHK 2 1、C2C12细胞 2 4h最高表达量分别达到 (5 1.0± 6 .5 )ng/ 10 5细胞和 (6 8.0± 7.2 )ng/ 10 5细胞。rAAV2 /hFⅨ经肌肉直接注射后 ,高、中、低三个剂量组均能检测到小鼠体内高效表达hFⅨ ,在给药后第 3周达到高峰 ,小鼠血浆中hFⅨ的表达量与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ,之后缓慢下降 ,到第 10周仍可检测到低水平hFⅨ表达 ;取第 3周小鼠血浆样品检测凝血功能 ,高、中、低剂量组FⅨ活性均得到明显改善 ,小鼠的割尾实验出血时间明显缩短 ,5min失血量也相应显著减少 ,其中高剂量组hFⅨ最高表达量达到 (387.0± 12 .5 )ng/ml血浆 ,FⅨ活性达到正常水平的 (30 .0± 5 .5 ) % ;给药后第 10周 ,除在注射点外 ,其它主要脏器均未检测到AAV载体DNA。
彭建强董小岩彭忞陈立谭淑萍袁洪陈方平薛京伦吴小兵
关键词：血友病B模型小鼠基因治疗C2C12细胞转导
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