蒋涛
- 作品数：26 被引量：74H指数：6
- 供职机构：复旦大学上海医学院病理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 醛糖还原酶影响转化生长因子β1诱导的大鼠系膜细胞纤连蛋白和Ⅳ型胶原蛋白表达及其机制的研究被引量：7
- 2005年
- 目的探讨醛糖还原酶(AR)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的大鼠系膜细胞(MsC)细胞外基质成分纤连蛋白(FN)和IV型胶原(ColIV)蛋白表达的影响及其可能涉及的信号传导通路。方法经亚克隆构建AR真核表达质粒pCDNA3AR,经脂质体介导及G418筛选后,将pCDNA3AR稳定转染至大鼠MsC中。应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、Western印迹法和免疫荧光法检测转染MsC表达AR情况;以Western印迹法检测正常MsC、AR转基因MsC,应用醛糖还原酶抑制剂(ARI)Sorbinil和Zopolrestat分别孵育的MsC:在TGFβ1刺激前后的FN、ColIV以及MAPK/phosphoMAPK表达变化。结果与正常MsC相比,两种ARI———Sorbinil和Zopolrestat均可下调MsC的FN和ColIV蛋白表达,而AR转基因MsC中FN和ColIV表达均升高(均P<0.05);TGFβ1作用后,MsC的FN和ColIV蛋白表达升高,预先使用Sorbinil或Zopolrestat孵育后,二者表达均下降,而AR转基因MsC中二者表达进一步增高(均P<0.05)。各组细胞在TGFβ1刺激前后总ERK、JNK和p38表达均无明显变化。正常MsC在TGFβ1刺激后phosphoERK、phosphoJNK、phosphop38表达升高,与之相比,若预先使用Sorbinil或Zopolrestat孵育后,则phosphoJNK、phosphop38表达下降,AR转基因MsC中phosphoJNK表达更为升高(P<0.05)。结论AR基因作为TGFβ1反应性基因之一,可能参与TGFβ1诱导的FN和ColIV表达的调控,且AR的作用有可能与TGFβ1刺激后的JNKMAPK和p38MAPK信号通路的活化有关。AR可能参与了非糖尿病导致的肾小球纤维化、硬化的病理发展过程。
- 蒋涛车祺林伊凤赵仲华陈琦张农
- 关键词：转化生长因子Β1纤连蛋白系膜细胞细胞外基质成分蛋白表达
- PKC信号通路与醛糖还原酶对转化生长因子β1诱导人肾系膜细胞纤连蛋白表达的影响被引量：5
- 2010年
- 目的 探讨PKC信号通路与醛糖还原酶在非高糖条件下对转化生长因子（TGF）-β1诱导人肾系膜细胞（HMC）细胞外基质成分纤连蛋白表达的影响.方法 应用醛糖还原酶抑制剂、PKC信号通路抑制剂G（O）6983、转染pcDNA3-醛糖还原酶及siRNA分别作用于人系膜细胞后,再用TGF-β1刺激,观察刺激前后人系膜细胞表达纤连蛋白的情况.Western blot检测系膜细胞内纤连蛋白和醛糖还原酶的变化,即时RT-PCR鉴定转染和干扰效果.结果 系膜细胞在TGF-β1作用后,醛糖还原酶和纤连蛋白表达升高;单独使用醛糖还原酶抑制剂并不能下调纤连蛋白的表达;但预先使用醛糖还原酶抑制剂孵育后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达减少为对照组的34%（P〈0.05）.单独使用PKC信号通路抑制剂并不能下调纤连蛋白的表达;用PKC信号通路抑制剂后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达下降为对照组的42%（P〈0.05）.预先使用醛糖还原酶抑制剂、PKC抑制剂孵育细胞后,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达下降;转染pcDNA3-醛糖还原酶后,系膜细胞中醛糖还原酶mRNA表达增多超过10倍,纤连蛋白表达增加了2.5倍（P〈0.05）,再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达增加了3.6倍（P〈0.05）;转染siRNA后,系膜细胞中醛糖还原酶mRNA表达减少为对照组的20%,纤连蛋白表达减少为对照组的6%（P〈0.01）,即使再用TGF-β1刺激,纤连蛋白表达仍然下降,为对照组的12%（P〈0.01）.结论 醛糖还原酶基因参与了系膜细胞中TGF-β1诱导纤连蛋白表达过程的调控,这一过程可能与PKC信号通路的活化有关.
- 黄平张月娟黄渊赵晶晶蒋涛张农
- 关键词：转化生长因子Β1纤连蛋白
- TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞ⅩⅧ型胶原表达的影响
- 2004年
- 目的 探讨转化生长因子 β1(TGF β1)对ⅩⅧ型胶原在大鼠肾小球系膜细胞中表达的影响 ,以及两者在大鼠抗Thy 1肾小球肾炎中的相互关系。方法 采用RT PCR、Westernblot法观察外源性TGF β1对大鼠肾小球系膜细胞中ⅩⅧ型胶原表达的影响 ;制备大鼠抗Thy 1肾小球肾炎模型 ,应用免疫组织化学ABC方法分别观察TGF β1和ⅩⅧ型胶原在大鼠肾组织中的表达 ,并对其染色强度作图像定量分析。结果 外源性TGF β1作用后 ,大鼠肾小球系膜细胞中ⅩⅧ型胶原的表达升高 ,并显示出一定的时间与浓度依赖性。大鼠抗Thy 1肾小球肾炎中TGF β1的表达在 1、3和 5d仅有微量表达 ,第 7天开始其表达明显且随时间增强 ;ⅩⅧ型胶原和Ⅳ型胶原的表达趋势都与TGF β1吻合 ,ⅩⅧ型胶原的表达与TGF β1的表达间具有显著的相关性。结论 ⅩⅧ型胶原的表达与TGF β1的作用相关 ,可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程 。
- 杨静蒋涛李慧赵仲华张秀荣张农
- 关键词：外源性TGF-Β1胶原表达肾小球系膜细胞胶原肾小球肾炎BLOT法
- 瞬时转染SARS-CoVM基因对大鼠肺成纤维细胞生长特性及生物学功能的影响
- 2005年
- 目的通过观察转染SARS-CoV M基因的大鼠肺间质成纤维细胞(fibrob last,FB)生长及功能的改变,初步探讨SARS病毒通过肺组织损伤而引发肺纤维化的可能机制和途径。方法碱裂解法扩增纯化质粒,酶消化法分离大鼠肺间质成纤维细胞;采用脂质体介导的方法瞬时转染M基因入FB;采用RT-PCR法和W estern b lot鉴定转染结果;四唑盐(MTT)比色法和流式细胞技术(FCM)检测转染后的大鼠肺成纤维细胞的生长情况;采用半定量RT-PCR和Realtim e PCR检测转染后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因转录水平的变化。结果与转染空载体的成纤维细胞相比,转染M基因的成纤维细胞在转染48 h时生长明显增强,G0/G1期比例下降,S期比例增高;转染M基因后MMP-2的转录明显增强。结论成功地将携带有M基因的真核表达质粒瞬时转染入大鼠肺间质成纤维细胞,目的基因在肺间质成纤维细胞中表达并具有与SARS-CoV M相似的抗原性;SARS-CoV M蛋白可能促进肺间质成纤维细胞生长;并促进MMP-2的表达。
- 刘乾陈琦蒋涛王震闫明霞许祖德
- 关键词：瞬时转染基质金属蛋白酶-2肺纤维化
- 醛糖还原酶对大鼠肾脏系膜细胞表达纤连蛋白和Ⅳ型胶原蛋白的影响被引量：4
- 2005年
- 目的探讨醛糖还原酶(AR)对大鼠肾脏系膜细胞(MsC)表达细胞外基质成分纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白的影响,以及AR在肾小球硬化病变过程中的可能作用及其机制。方法采用酶切、连接方法构建真核表达质粒pCDNA3-AR,采用脂质体介导以及G418筛选的方法,将pCDNA3-AR稳定转染至MsC中,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法和免疫荧光检测转染MsC表达AR情况;以Western印迹法检测正常MsC、AR转基因MsC、应用AR抑制剂Sorbinil和Zopolrestat的正常MsC、转化生长因子-β1(TGF-β1)作用后的正常MsC的FN和ColⅣ蛋白表达情况。结果与正常MsC相比,TGFβ1作用后的正常MsCFN和ColⅣ蛋白表达水平分别增高1.6和1.7倍(P<0.01);AR转基因MsC的FN、ColⅣ表达分别增加1.8倍和1.5倍;应用Sorbinil时,FN和ColⅣ分别降低1.8倍和1.4倍(P<0.05);应用Zopolrestat时,FN和ColⅣ分别降低1.7倍和1.4倍(P<0.05)。结论AR高表达或活性受抑制时可以明显影响MsCFN、ColⅣ的蛋白表达,提示AR可能与肾小球硬化的病理过程有关。
- 蒋涛车琪赵仲华张秀荣张农
- 关键词：FN系膜细胞纤连蛋白醛糖还原酶大鼠肾脏PCDNA3
- 醛糖还原酶基因转染对体外培养大鼠肾脏系膜细胞增殖的影响被引量：7
- 2005年
- 目的观察醛糖还原酶(AR)基因转染对体外培养大鼠肾脏系膜细胞(MsC)增殖的影响,并对其机制进行初步探讨。方法脂质体转染法将AR基因转入大鼠MsC,蛋白印迹鉴定转染效率。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期与凋亡,对比正常MsC和AR转染MsC的生长速度及AR抑制剂(ARI)Sorbinil和Zopolrestat对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)和小牛血清(NBS)促MsC增殖作用的影响。蛋白印迹检测PDGF-BB作用后AR和c-Jun表达的变化,EMSA检测转录因子AP-1的活性。结果(1)转染MsCAR表达较正常MsC明显增高;(2)AR转染MsC较正常MsC生长速度快(P<0.01);(3)ARI可部分抑制PDGF-BB对正常MsC、AR转染MsC以及NBS对AR转染MsC的促增殖作用(P<0.01,P<0.05),而对NBS促正常MsC的增殖无显著影响;(4)PDGF-BB刺激MsC后可上调AR和c-Jun蛋白的表达,ARI可减弱c-Jun的这种表达增高;(5)PDGF-BB可活化转录因子AP-1,而ARI可削弱此作用。结论AR可能参与了MsC在病理情况下的过度增殖过程,其作用机制与AP-1活化有一定关系。
- 车祺蒋涛林伊凤李慧张农
- 关键词：体外培养基因转染系膜细胞增殖肾脏系膜细胞AP-1活化
- 大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎TGF-β1和calponin h1表达变化的初步研究被引量：5
- 2005年
- 目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和碱性调宁蛋白(calponin h1)在大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎 中的表达及其意义。方法 制备大鼠抗Thy-1系膜增生性肾肾炎模型,提取其肾组织的总蛋白和总RNA。应 用免疫组织化学ABC法、Western blot、RT-PCR等方法分别从蛋白和核酸水平检测TGF-β1和calponin h1在肾 炎模型1、3、5、7、14、21、28 d组织中的表达,研究其相互关系。结果 大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎中TGF-β1 的蛋白表达从7天组起明显随时间延长增强,至21 d组达高峰后回落,核酸表达差异不明显;calponin h1的少量 表达见于正常对照组,1、3、5 d组起表达明显增强,7 d组达到最高峰后开始回落,核酸表达的变化趋势则与 TGF-β1的蛋白表达变化趋势一致。结论 大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎组织中calponin h1表达增强,并在肾 炎病变早期呈增强趋势,后者与TGF-β1在肾炎早期的增强表达趋势相似。calponin h1可能在肾炎早期发挥抗 细胞增殖的作用。
- 李慧蒋涛杨静赵仲华张秀荣张农
- 关键词：系膜增生性肾炎免疫组织化学ABC法调宁蛋白
- 组织因子途径抑制剂-1诱导大鼠肾系膜细胞凋亡作用的研究
- 目的观察重组人组织因子途径抑制剂-1（human recombinant tissue factor pathway inhibitor-1,hrTFPI-1）对大鼠肾系膜细胞 （mesangial cell,MsC）凋...
- 林伊凤马端蒋涛郭泓珅张农
- 关键词：系膜细胞凋亡
- 文献传递
- 转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞基质表达的影响被引量：7
- 2004年
- 目的 通过对大鼠系膜细胞(MsC)转染人TGF-β1基因,观察该基因对MsC表达细胞外基质成分的影响。方法 采用脂质体介导法转染人TGF-β1基因至大鼠MsC,Western blot法鉴定;细胞爬片ABC免疫酶标法观察纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原、Ⅰ型胶原、层黏蛋白(LM)的表达,并对结果定量分析。结果 重组质粒pcDNA 3.0-TGF-β1成功转染至大鼠MsC,Western blot及免疫组化检测均证实TGF-β1蛋白表达增强;与正常的MsC相比,TGF-β1转染的MsC表达FN、Ⅳ型胶原增强,其差异有显著性意义;而Ⅰ型胶原、LM表达改变不明显。结论 TGF-β1可通过对大鼠MsC ECM成分表达的影响,而在肾小球硬化的发生发展过程起着重要作用。
- 刘国元蒋涛曾文姣刘学光赵仲华张农
- 关键词：系膜细胞转化生长因子Β1纤维连接蛋白肾小球硬化
- 醛糖还原酶参与大鼠MsC表达iNOS和NO及其调控机制的研究被引量：3
- 2008年
- 目的采用醛糖还原酶抑制剂(aldose reductase inhibitor,ARI)抑制醛糖还原酶(aldose reductase,AR)活性,观察其对大鼠系膜细胞(mesangical cells,MsC)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNFα)作用后表达诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthesis,i NOS)的影响,并对这一现象进行初步的机制探讨。方法实验分为对照组、Sorbinil作用组、Zopolrestat作用组。分别采用NO测试盒检测亚硝酸盐含量;免疫荧光、Western blot检测i NOS表达;Real-ti me PCR检测iNOS mRNA,对比正常生长MsC及ARI(Sorbinil和Zolpor-estat)预处理的MsC在TNFα作用不同时间后上述指标的变化。分别采用非放射性标记的分光光度检测法检测转录因子NFκB p65亚基试剂盒(colori metric nonradioactive NFκB p65 transcription factor assay kit)以及Western blot的方法对以上各组细胞进行转录因子NFκB活性检测,及其上游通路IκB信号通路活化情况检测。结果与正常MsC相比,TNFα可上调培养大鼠MsC中i NOS mRNA和蛋白的表达,以及NO合成水平,但此作用可以被两种ARI不同程度地抑制;抑制TNFα导致的NFκB的活化及IκBα信号通路的磷酸化,并具有一定的时间相关性。结论AR参与调控TNFα诱导i NOS表达上调的过程,且此调控可能是通过影响转录因子NFκB的活性以及上游信号通路的活化而实现的。
- 瞿俊杰蒋涛林伊凤李慧陈琦张农
- 关键词：醛糖还原酶肿瘤坏死因子Α诱导型一氧化氮合酶NFΚB
