蒲静
- 作品数：63 被引量：136H指数：7
- 供职机构：北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目质检公益性行业科研专项项目北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV RTase)的制备
- 2016年
- 反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达。利用Ni2+柱亲和层析纯化载有6x His标记的重组MMLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase。通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光RT-PCR检测来评价重组酶的活性并估测其活性单位。将活性单位相当的重组酶和商品酶进行比较,结果显示,制备的重组酶活性高,对不同浓度病毒RNA的检测结果与商品酶相当。研制的M-MLV RTase可以用于动物RNA病毒的分子诊断。
- 牛建蕊高志强蒲静张伟刘环刘文晓张鹤晓
- 关键词：纯化RT-PCR
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因A、D抗原共表达的复制缺陷型重组腺病毒构建及鉴定
- 本研究通过RT-PCR技术和重叠PCR技术扩增出含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的A抗原表位和D抗原表位，构建复制缺陷型腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经PacI线性化之后，共同转染AD-293细胞，获得共表达A、D...
- 刘文晓高志强蒲静张伟刘环牛建蕊张鹤晓
- 关键词：猪传染性胃肠炎复制缺陷型腺病毒疫苗
- 2009大流行H1N1流感病毒与经典H1N1猪流感病毒核酸扩增检测标准物质研究
- 根据已发表的A/California/04/2009(H1N1)基因序列,通过基因合成获得该毒株的完整M、HA和NA的基因序列,并克隆于pET32a.从经典猪流感病毒A/swine/2003(H1N1)提取的RNA中扩增...
- 高志强张鹤晓乔彩霞蒲静张利峰刘环汪琳谷强张伟
- 关键词：计量学H1N1流感病毒核酸扩增标准物质
- 文献传递
- 韦塞尔斯布朗病
- 2015年
- 韦塞尔斯布朗病(Wesselsbron disease,WSL)是一种经蚊虫传播的虫媒人畜共患传染病,主要感染羊和其他一些反刍动物,可引起绵羊和山羊的流产及羔羊死亡,也会感染人。随着我国与非洲国家交往的不断加强,国际贸易范围不断扩大,韦塞尔斯布朗病传入我国的风险不断加大,我国已明确将其列入从非洲进口反刍动物议定书的检疫要求中,掌握该病的流行状况、开展相应的诊断检测技术研究以及制订相关技术标准不仅十分必要而且迫在眉睫,而目前我国对该病的系统研究和技术储备等均处于空白状态。因此,作者总结大量国外相关资料就韦塞尔斯布朗病的病原、流行病学、临床症状、病理变化、实验室诊断、治疗预防和公共卫生等方面作一综述。
- 刘艳华高志强张伟蒲静汪琳乔彩霞张利峰凌凤俊尹羿
- 关键词：病原流行病学
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的保守基因序列设计合成引物和TaqMan荧光探针,并对其进行了优化筛选;对荧光RT-PCR的反应条件进行优化,建立了PRRSV荧光RT-PCR检测方法。将PRRSV细胞培养物系列稀...
- 蒲静谷强段向英高志强赖平安张鹤晓柏亚铎汪琳吴丹乔彩霞张伟
- 关键词：PRRSV繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测
- 文献传递
- 实验室质量控制关键要素管理系统的建立与运行被引量：1
- 2014年
- 利用RFID等现代信息化技术,以"人、机、样、法、溯"为关键要素,建立人员、设备、样品、方法、试剂等数据库,开发相应管理和溯源软件,搭建动物检疫实验室质量控制关键要素管理系统并运行,提高实验室管理工作效率并有效地节约成本。本文阐述了系统核心技术的实现方法。
- 张玉红韩瑞徐慧芳秦奕尹羿柏亚铎蒲静乌日古玛拉李江宇汪琳
- 关键词：实验室BS架构
- 猪传染性胃肠炎病毒S基因A、D抗原共表达的复制缺陷型重组腺病毒构建及鉴定被引量：2
- 2016年
- 通过RT-PCR技术和重叠PCR技术扩增出含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的A抗原表位和D抗原表位,构建复制缺陷型腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经PacI线性化之后,共同转染AD-293细胞,获得共表达A、D抗原表位的复制缺陷型重组腺病毒。经Western Blotting检测,该重组腺病毒能够正确表达目的蛋白基因,而且目的蛋白能够与猪传染性胃肠炎阳性血清反应。本研究结果为猪传染性胃肠炎重组疫苗研发奠定基础。
- 刘文晓高志强蒲静张伟刘环牛建蕊张鹤晓
- 关键词：猪传染性胃肠炎复制缺陷型腺病毒疫苗
- 禽流感病毒通用和H5亚型特异性核酸检测用标准物质的研制
- 基因克隆和体外转录技术，将禽流感病毒M基因和H5亚型HA基因分别转录合成cRNA，经初步定值，稀释分装后作为禽流感病毒通用和H5亚型特异性核酸标准物质候选物。采用荧光定量RT-PCR方法对标准物质候选物进行检测，确定其均...
- 乔彩霞马贵平张鹤晓高志强蒲静
- 文献传递
- 流感病毒H1/H3亚型通用双重短探针实时RT-PCR检测技术与标准质控品研究
- 2012年
- 采用TaqMan方法,在对人、禽、猪以及马流感病毒代表株HA序列多重比对基础上,设计合成动物流感病毒H1亚型和H3亚型的兼并引物和LNA和MGB修饰短探针,经反应条件优化,建立了针对流感病毒H1亚型及H3亚型的双重实时RT-PCR检测方法。应用建立的方法分别对人、禽、猪以及马流感病毒核酸进行检测,结果显示,建立的方法通用性良好,可有效检测和鉴别H1和H3亚型流感病毒,但对其他亚型的流感病毒以及新城疫病毒核酸检测结果为阴性,表明建立的方法特异性强。进一步经体外转录制备了猪流感病毒H1和H3亚型HA完成编码区的核酸标准品cRNA,经稀释、分装、定量、均匀性和稳定性检验后,作为方法的质控品对建立的方法进行评价,结果表明,所建立的双重短探针实时RT-PCR方法灵敏度可达2.0×102拷贝/反应。在对586份临床样品的检测中,进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好,可满足动物流感病毒H1/H3亚型的早期快速检测的需求。
- 高志强张鹤晓乔彩霞蒲静张利峰张伟谷强
- 关键词：实时RT-PCR
- 内含猪繁殖与呼吸综合征病毒保守基因序列假病毒粒子的构建及应用被引量：6
- 2016年
- 为构建内含猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因序列的假病毒粒子,将MS2噬菌体基因组中5′非编码区、成熟酶蛋白基因、衣壳蛋白基因、包装位点和复制酶基因部分起始位点的cDNA序列克隆于原核表达载体pET32a,在其下游插入PRRSV ORF7和3′非编码区保守序列,获得重组表达载体pET-MS2-PRRSV。将重组质粒pET-MS2-PRRSV转化表达菌株BL21(DE3),经诱导表达、纯化,获得高纯度的病毒样颗粒。病毒样颗粒经RT-PCR和PCR鉴定含有PRRSV ORF7和3′非编码区RNA且没有质粒DNA残留,并能耐受RNase降解。采用荧光定量RT-PCR对病毒样颗粒定值后,制备了用于PRRSV核酸检测的标准品,该标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为PRRSV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控。
- 乔彩霞张鹤晓高志强尹羿蒲静汪琳刘环张伟
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7病毒样颗粒
