赵忠良
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 克隆、表达及测序一体化的原核表达载体pLCM182的构建及在细胞因子表达中的应用被引量：1
- 2000年
- 目的 构建利于PCR产物克隆、表达、测序一体化的载体。方法 构建载体并以酶切鉴定 ,该载体以强启动子pL及终止子rrnBT1T2 控制外源基因转录及终止 ,以T7噬菌体基因 10的RBS序列来提高目的基因的翻译水平 ,同时在目的基因的上下游引入测序引物序列以便于直接进行序列测定 ,从而减少克隆步骤 ,降低在多次克隆过程中碱基发生错误的机率。对多克隆位点改造 ,使表达外源基因时能对其翻译起始序列进行自由的设计。结果 构建并鉴定了pLCM182。利用该载体成功地表达了hIL 4、hIL 17及hIL 1RA及hIFN β等数种细胞因子基因 ,表达量均高于报道水平。结论 该载体的构建极大地方便了基因克隆。
- 赵忠良黄欣陈苏民曹雪涛
- 关键词：大肠杆菌细胞因子
- 人白细胞介素4在大肠杆菌中的优化表达被引量：9
- 1999年
- 目的：通过优化设计利用大肠杆菌表达人白细胞介素４（ＩＬ４） 并提高其表达量。方法：根据原核翻译起始序列的局部二级结构自由能，设计了ＡＵＧ 上下游序列，并在人ＩＬ４ 基因下游插入部分大肠杆菌ＬａｃＺ 序列以提高ｍＲＮＡ 的稳定性。结果：成功地构建了人ＩＬ４ 的高效表达克隆，命名为ｐＬＣＭ１８２ｈＩＬ４ 。ＳＤＳＰＡＧＥ 分析显示所表达的重组ＩＬ４ 蛋白质占细菌总蛋白的３０ ％ 。目的基因下游没有插入ＬａｃＺ序列所构建的表达克隆ｐＣＺＨｈＩＬ４ 在大肠杆菌中的表达量则占细菌总蛋白的２０ ％ 左右。结论：所设计的优化表达方法对人ＩＬ４ 基因的表达是成功的，在细胞因子的工程化表达中，优化设计对基因的表达量至关重要。
- 黄欣赵忠良曹雪涛
- 关键词：IL-4基因表达大肠杆菌
- 一种核不均一核糖核蛋白M4缺失突变体的克隆
- 2000年
- 利用减法杂交技术筛选人树突状细胞（ＤＣ）经抗原刺激后特异表达的基因，成 功地获得了十多个特异表达基因，其中包括一种核不均一核糖核蛋白（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｎＲＮＰ）Ｍ４第１５９～１９７位氨基酸缺失的新基因．对部分肿瘤细 胞系及原代培养细胞进行ＲＴ－ＰＣＲ检测发现，它的表达与ｈｎＲＮＰ Ｍ４基因是一致的，同 时证实了该基因表达于经ＫＬＨ刺激后的ＤＣ而非正常的ＤＣ．组织分布分析显示，该基 因高表达于脾脏、外用血淋巴细胞、肺和肝脏．另外，通过多种细胞因子刺激的骨髓基 质细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ， ＢＭＳＣ）也表达这两种分子，但ＴＮＦ－α处理后 ｍＲＮＡ的表达消失．这一发现增加了对ＤＣ在抗原提呈过程中基因表达变化的认识，为 ｈｎＲＮＰ家族增添了新成员．
- 黄欣赵忠良袁正隆张明徽朱学军陈国友曹雪涛
- 关键词：基因克隆免疫学
- 人白细胞介素17(IL-17)的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 1998年
- 白细胞介素17(IL-17)是一新近发现的由活化T淋巴细胞产生的细胞因子,初步研究表明它可能参与T淋巴细胞与造血系统的相互作用,由于IL-17的研究工作刚刚起步,对其确切功能并不完全清楚.为了进一步了解IL-17的生物学功能及可能机制,我们从活化的人外周血单个核细胞中克隆了人IL-17基因的编码序列,将其克隆至本室构建的克隆、表达、测序一体化载体 pLCM182中,经序列测定结果与报道基因序列一致后在大肠杆菌中进行表达,结果发现经诱导后其表达量可达30%以上.IL-17的表达产物在体外能刺激原代培养的人成纤维细胞分泌IL-6和GM-CSF,证明所表达的IL-17具有生物学活性.
- 曹雪涛黄欣赵忠良
- 关键词：白细胞介素17基因克隆大肠杆菌
- 树突状细胞特异表达新基因的大规模筛选
- 1999年
- 树突状细胞在抗原提呈过程中起极其重要的作用．为大规模筛选抗原刺激后人树突状细胞特异表达基因，建立了一种基于“长距离” Ｐ Ｃ Ｒ 技术的减法杂交技术，在实验中取得了较好的效果．初步测序分析了 ２００ 个插入片段为 ０７～２ ｋｂ 的克隆，结果发现新基因片段占 ５０％ ，其中 ３０％ 的片段包含基因编码区，１５％ 的片段包含完整编码区，打点杂交分析新基因中 ８０％ 为抗原刺激后树突状细胞所表达．从已知和未知基因中发现了一些与树突状细胞生物学功能可能相关的基因，这将有助于进一步揭示与阐明树突状细胞的生物学功能．更多及更长片段的测序工作正在进行中．
- 赵忠良黄欣李楠朱学军曹雪涛
- 关键词：树突状细胞基因克隆PCR
