邱枫
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国科学院研究生院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 中华根瘤菌NP1氨单加氧酶基因的克隆与功能鉴定被引量：3
- 2010年
- 以中华根瘤菌NP1(Sinorhizobium sp.NP1)为原始菌株,通过同源克隆与Tail-PCR方法,获得1089bp的氨单加氧酶基因(amo)全长序列.该基因编码362个氨基酸,其二级结构与Sinorhizobium meliloti1021AMO的二级结构相似,该蛋白有9个跨膜区段.以自杀穿梭质粒pJQ200SK为原始载体,构建NP1amo基因敲除质粒pJQ200SK-amo-Tc.采用三亲本杂交的方法将该质粒转入原始菌株NP1中,获得amo基因敲除菌株NP1∷amo.通过本贝洛氏(Berthelot)法对氨氮进行测定,发现NP1∷amo的脱氮效率比原始菌株NP1下降约35%.该结果表明,本实验中所克隆的氨单加氧酶基因为脱氮关键酶基因.
- 刘钰莹邱枫宋琴窦鑫许雷
- 关键词：基因克隆基因敲除生物脱氮
- 中华根瘤菌NP1腺苷酸激酶基因的克隆与功能鉴定
- 2012年
- 以中华根瘤菌NP1(Sinorhizobium sp.NP1)为原始菌株,通过同源克隆的方法,获得了579bp的腺苷酸激酶基因(adk)全长序列.该基因编码192个氨基酸,其二级结构和三级结构与Sinorhizobium meliloti 1021 ADK的二级结构和三级结构相似.以表达载体pET21b为原始载体,构建成NP1 adk原核表达载体pET21b-adk,转化E.coli BL21菌株,SDS-PAGE检测表明:adk基因获得高效表达.HPLC测定证实:重组表达菌中ATP含量约为对照的1.3倍.上述结果证明本实验中所克隆的腺苷酸激酶基因具增强ATP合成的功能.
- 窦鑫邱枫许玮徐汉卿许雷
- 关键词：腺苷酸激酶基因克隆原核表达高效液相色谱
