陈元美
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：上海交通大学第九人民医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 移植表达δ-SG基因的骨髓间充质干细胞对TO-2型仓鼠心功能的影响
- 2011年
- 目的采用基因与细胞相结合的新方法,研究将经重组腺相关病毒(rAAV)介导的δ-SG基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)植入缺失δ-SG基因的TO-2型仓鼠心肌内,对其心功能的影响。方法将遗传性DCM鼠(TO-2仓鼠)分为MSCs组(n=15)、rAAV-δ-SG组(n=15)、rAAV-δ-SG-MSCs组(n=15),心室壁注入移植细胞。移植后5w和10w,分别进行心超检测左室舒张末直径(LVDd)、左室收缩末直径(LVSd),舒张末室间隔厚度(IVSd),舒张末左室后壁厚度(LVPW),左室射血分数(LVEF);免疫组化测心肌细胞特异蛋白;RT-PCR检测心肌中δ-SG基因表达;免疫荧光检测细胞分化、迁移;电镜检测新生细胞。结果与rAAV-δ-SG、MSCs组相比较,rAAV-δ-SG-MSCs组LVDd、LVSd减小(P<0.05),EF、IVSd、LVPW增大(P<0.05),而rAAV-δ-SG与MSCs组相比较无统计学差异;rAAV-δ-SG-MSCs组心肌细胞较成熟,结构较完整,心肌细胞特异蛋白表达增多,毛细血管密度增加(P<0.01);电镜中,可见结构完整的心肌细胞及新生血管出现。结论 rAAV-δ-SG-MSCs能与宿主细胞有效结合,与rAAV-δ-SG、MSCs治疗相比较,能更有效地修复TO-2仓鼠心肌细胞肌膜骨架蛋白,持续修复受损心肌,改善心功能,延缓心腔扩大。
- 黄海怡黄琳吴士尧陈元美
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌修复细胞移植
- 腺相关病毒介导的仓鼠δ-SG基因在TO-2型仓鼠骨髓间充干细胞的表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建含有δ-SG基因的腺相关病毒载体并检测经腺相关病毒介导基因转染的TO-2型仓鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中目的基因的表达。方法用EcoRI酶和XhoI酶酶切含有δ-SG基因的pUC57-SG质粒,获得δ-SG基因。片段回收后定向插入腺相关病毒载体质粒pITR-GFP中重组成pITR-GFP-SG,并同pXX680、pHelper三质粒经钙磷沉淀法共转染HEK293细胞,斑点杂交法测定重组病毒颗粒滴度,再将重组病毒颗粒转染TO-2型仓鼠的MSCs,利用RT-PCR法,免疫荧光检测目的基因的表达,MTT检测转染细胞增殖能力。结果成功构建了δ-SG基因的腺相关病毒载体。含δ-SG基因的腺相关病毒感染TO-2型仓鼠MSCs48h后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳出现884bp-DNA片段;免疫荧光检测显示TO-2型仓鼠MSCs中呈现绿色颗粒,大小深浅不一;MTT证实转染后细胞的增殖能力未受明显影响。结论采用腺相关病毒介导的方法,可以将δ-SG基因导入TO-2型仓鼠的MSCs并成功表达。
- 黄琳吴士尧黄海怡陈元美
- 关键词：腺相关病毒载体基因转染
