陈英兰
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
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- 发文基金：海南省自然科学基金海南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核杆菌融合蛋白DNA疫苗构建及免疫保护研究
- 2006年
- 目的:评价结核DNA疫苗免疫鼠产生细胞因子和抵抗结核分枝杆菌攻击的能力。方法:将结核菌Mtb8.4基因和谷胱甘肽S转移酶基因插入pVAX1载体,构建表达Mtb8.4和GST融合蛋白的DNA疫苗pVS8.4G。小鼠分成5组,用pVS8.4G、pVAX1、pIL2S 100μg和PBS 0.1mL各免疫3次,间隔2w。另一组用BCG免疫1次。每组10只鼠在加强后,无菌取脾培养。另外10只小鼠用H37Rv攻击,2w后取脾、肝和肺培养结核菌并计数。结果:pVS8.4G免疫鼠脾细胞培养上清mIL-2和mIFN-γ平均为380.9和422.1pg/mL,显著高于阴性对照组,与BCG组无显著差异。5个组的平均mIL-6和mIL-10无显著差异。pVS8.4G免疫小鼠脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为42 093.2、43 264.1和37 264.8CFU/g,低于pVAX1、pIL2S和PBS组相应器官的载量。结论:DNA疫苗pVS8.4G能刺激产生Th1型免疫应答,免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力增强。
- 朱中元王海波谢勇陈英兰郑冰冰张春发张颖
- 关键词：结核DNA疫苗免疫保护
- 表达结核分枝杆菌融合蛋白的DNA疫苗构建及免疫保护被引量：5
- 2006年
- 目的评价构建的结核DNA疫苗pVS3in1免疫的小鼠体外产生细胞因子能力和抵抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的效果。方法将结核菌mtb8.4、Mr38 000和ag85b插入pVAX1载体,构建表达结核菌Mtb8.4-Mr38 000 CTL表位-Ag85B融合蛋白的DNA疫苗pVS3in1。将雌性C57BL/6小鼠分成5组,每组20只,分别用pVS3in1、pVAX1、pIL2S和PBS免疫3次,每隔2周。另一组用BCG(105CFU)皮内免疫1次。每组10只鼠在最后1次免疫后,培养脾细胞,检测上清液细胞因子。另10只用结核菌H37Rv经静脉攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并计数。结果pVS3in1组鼠脾细胞培养上清液mIL-2和mIFN-γ含量分别为(379.6±58.2)pg/mL和(529.7±63.7)pg/mL,显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG组无显著性差异(P>0.05)。5组的mIL-6和mIL-10无显著性差异。pVS3in1组的脾、肝和肺结核菌载量分别为(17 443.6±3 202.5),(19 047.2±3 395.5)和(14 822.2±2 882.2)CFU/g,低于pVAX1、pIL2S和PBS等3组相应器官的载量(P<0.001),仅脾菌落数显著高于BCG组。结论pVS3in1能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答,诱导小鼠抵抗H37Rv攻击的能力与BCG相当。
- 朱中元王海波谢勇陈英兰郑冰冰张春发张颖
- 关键词：结核DNA疫苗融合蛋白细胞因子免疫保护
- 结核杆菌DNA疫苗pVS84与pIL2质粒联合免疫的保护效率研究
- 2006年
- 目的用构建的人hIL-2质粒和结核杆菌DNA疫苗pVS84联合免疫后,对小鼠的细胞因子进行了测定并对抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力进行了评估。方法将hil-2插入pVAX1,构建了人hIL-2的质粒pIL2。将雌性C57BL/6鼠分成6组,分别用pVS84和pIL2各50μg,pVS84,pVAX1,pIL2S和PBS免疫3次,间隔2周,加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)皮内免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强后,取脾培养,检测上清细胞因子。另10只用结核菌H37Rv攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并计数。结果pVS84+pIL2联合免疫组的鼠血清hIL-2平均浓度为720.5±114.5pg/ml,显著高于其它组。pVS84+pIL2组、pVS84组的脾细胞培养上清的mIL-2和mIFN-γ平均含量显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。pVS84+pIL2组脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为12471.4±2269.3,13622.6±2404.0和14742.0±2378.7CFU/g,低于pVS84组和3个阴性对照组相应器官的结核菌载量(P<0.001),与BCG对照组无显著差异。结论pIL2质粒与pVS84联合免疫能够刺激机体产生Th1型免疫应答,抵抗H37Rv攻击的能力与BCG的效果相当。
- 朱中元谢勇王海波刘建兵陈英兰郑冰冰张春发张颖
- 关键词：结核DNA疫苗联合免疫
- 等位特异PCR检测结核分支杆菌耐异烟肼基因katG突变研究被引量：1
- 2002年
- 目的 建立等位特异多聚酶链反应检测结核分支杆菌耐异烟肼基因katG突变的快速敏感检测方法。方法 利用在PCR时 ,3′端的碱基如果与模板DNA不配对 ,PCR扩增阴性的原理 ,根据我们对katG基因突变特点的研究结果 ,建立了AS -PCR检测katG基因突变的方法。结果 AS -PCR检测结核菌耐异烟肼相关基因katG的敏感性为85 %,特异性达 90 %。 15株经测序证实有katG突变的菌株 ,AS -PCR检测均为阳性。二者的符合率为 10 0 %。与PCR-SSCP检测的总符合率为 88%,阳性符合率 81.0 %,阴性结果的符合率为 93.1%。检测试验可在数小时内完成。结论 AS -PCR方法是检测结核菌耐异烟肼基因突变的敏感方法 ,可为临床医师提供判断结核菌对异烟肼是否敏感的依据。
- 朱中元王海波刘建兵谢勇陈英兰林丽英
- 关键词：异烟肼结核分支杆菌AS-PCR
- 等位基因特异PCR技术检测结核分支杆菌rpoB基因突变研究
- 2002年
- 目的 建立并评价等位特异多聚酶链反应检测结核分支杆菌耐利福平基因rpoB突变的方法。方法 设计与rpoB基因突变后的碱基配对的引物用于扩增突变基因,建立AS-PCR检测rpoB基因突变的方法,并对58株结核菌进行了检测。结果AS-PCR检测结核菌耐利福平相关基因rpoB的敏感性为77.3％,特异性达91.7％。AS-PCR检测rpoB基因,有1628A→T、1657C→T,G和1673C→T突变分别占耐利福平结核菌株的18.2％,22.7％和36.4％。检测rpoB突变与MIC测定RFP耐药率和PCR-SSCP检测的总符合率分别为86.2％和74.1％。检测试验可在3～4h内完成。结论 AS-PCR方法是检测结核菌耐利福平基因突变的敏感和快速方法,可在临床实验室使用并为临床医师提供治疗依据。
- 朱中元王海波陈英兰谢勇刘建兵林丽英
- 关键词：RPOB基因突变结核分支杆菌利福平
