隆文杰
- 作品数：9 被引量：42H指数：5
- 供职机构：广西大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 费氏中华根瘤菌HN01 smrA所在基因簇的启动子结构及调控初步研究
- 在生物固氮体系中，根瘤菌的结瘤能力是决定共生固氮效率的一个重要因素。费氏中华根瘤菌HN01由于生长速度快，胞外多糖少而被用作生物固氮研究的模式菌株。本实验室利用转座子突变法从费氏中华根瘤菌HN01基因组中筛选到一个与硫代...
- 隆文杰
- 关键词：启动子GUS
- 文献传递
- 一起诺如病毒引起的急性胃肠炎RT-PCR检测被引量：8
- 2007年
- 目的对急性胃肠炎疫情标本进行疑似诺如病毒核酸RT-PCR检测,以确诊其致病原。方法从34例病人粪便中提取RNA,用引物JV13i、JV12y进行诺如病毒核酸RT-PCR扩增,再对其扩增产物进行琼脂糖凝胶检测;同时采用ELISA法检测粪便中的诺如病毒抗原,并用基因序列分析进行检测结果验证。结果34份标本中有26份诺如病毒核酸RT-PCR检测阳性,阳性率为76.5%,经基因序列分析,也证实为诺如病毒;而ELISA只检测到9份标本为阳性,阳性率为26.5%。结论RT-PCR和ELISA的阳性结果均证实该起疫情为诺如病毒感染所致。RT-PCR法比ELISA法灵敏度高,特异性强,且成本较低,但是操作较为繁琐。
- 邓丽丽刘巍隆文杰石玲玲董柏青李艳韦一知林玫龚健杨进业
- 关键词：诺如病毒急性胃肠炎RT-PCRELISA
- 碱性土壤基因组DNA的分离纯化和基因文库的构建被引量：6
- 2004年
- 直接从广西南宁市凤凰纸业排污沟碱性土壤样品中抽提和分离纯化混合基因组 DNA,所获得DNA的产量为每克土壤样品 1 0～ 3 0μg。采用限制性内切酶 Eco R1酶处理后 ,构建了以 p GEM-3 Zf(+)为载体的 DNA部分文库。文库的容量为 2 3 65 0个转化子 ,外源片段 DNA平均大小为 3 .2 kb。建库效率为每克环境样品获得 60 0 0个左右的含 1～ 1 5 kb外源随机插入片段的克隆。通过 DNA序列测定和同源性比较 ,对从文库随机调取的 1 6个转化子序列进行分析 ,发现 1 3个外源插入片段包含序列尚未确定的 DNA片段。
- 蒋承建隆文杰梁璇孙栋武波
- 关键词：碱性土壤基因组纯化基因文库
- 应用实时荧光定量RT-PCR技术快速检测基因Ⅱ型诺如病毒被引量：8
- 2007年
- 目的建立基因Ⅱ型诺如病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并应用于临床标本的检测。方法二氧化硅法提取粪便中的病毒RNA,使用针对基因Ⅱ型诺如病毒N/S结构域的引物和探针建立荧光定量PCR方法,对罗城县急性胃肠炎疫情的34份标本进行检测,并与常规RT-PCR和ELISA检测结果比较;还用该法对2006年2月至2007年1月广西急性胃肠炎暴发及散发病例粪便样本305份做了临床检测。结果用实时荧光定量RT-PCR法成功地从罗城疫情样本中检测出基因Ⅱ型诺如病毒,实时荧光定量RT-PCR、常规RT-PCR和ELISA的检出率分别为为85.3%、76.5%和26.5%。而实时荧光定量RT-PCR对114份对急性胃肠炎暴发疫情及191份散发病例样本的基因Ⅱ型诺如病毒检出率分别为56.1%和23.6%。结论诺如病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法具有快速、灵敏和特异的优点,不但能对标本中病毒浓度进行定量检测,还能鉴别诺如病毒基因型别。同时也发现基因Ⅱ型诺如病毒感染在广西急性胃肠炎暴发疫情和散发病例中较常见。
- 刘巍隆文杰石玲玲邓丽丽董柏青唐振柱李艳方志峰杨进业
- 关键词：荧光定量
- 碱性土壤基因组DNA的分离纯化和基因文库的构建
- 直接从广西南宁市凤凰纸业排污沟碱性土壤样品中抽提和分离纯化混合基因组DNA,所获得DNA的产量为每克土壤样品10～30g。采用限制性内切酶EcoR1酶处理后,构建了以pGEM—3Zf(+)为载体的DNA部分文库。文库的容...
- 蒋承建隆文杰梁璇孙栋武波
- 关键词：克隆
- 文献传递
- 费氏中华根瘤菌HN01pmrA所在基因簇的结构分析
- 2007年
- 经原位杂交,从费氏中华根瘤菌HN01基因组文库中钓出含有pmrA基因的阳性克隆pGXHN 300,对其进行亚克隆测序得到pm rA两翼6.8 kb的DNA序列。生物信息学分析显示,该序列包括6个完整的ORF和1个不完整ORF。pm rA所在的基因簇含有4个ORF:ORF a、ORFb、ORF c、ORFd(pm rA)。其中,ORF a与Rh izobium etli的cy sG(CAA 04958.1)在氨基酸水平一致性为79%,相似性为87%。对ORF c序列分析发现与亚硫酸及亚硝酸还原相关的保守结构域。通过融合PCR方法,将两个潜在的启动子序列分别连在gus上游,以pTR102为载体导入HN 01中。在完全培养基YMA上两个启动子均不表达,在以硝酸钠为氮源,亚硫酸钠、硫酸钠或甲硫氨酸分别为硫源的MM培养基上生长均表达出GU S活性,表明这两个潜在的启动子与硫、氮代谢相关。
- 曹永强隆文杰梁善范陈钢陆祖军武波
- 关键词：费氏中华根瘤菌基因文库启动子
- 广西首起诺如病毒感染性腹泻病原基因测序分析被引量：17
- 2007年
- 目的对广西首起诺如病毒急性胃肠炎疫情进行病原基因测序分析,以确证其病原体,并对其基因分型。方法采用荧光定量PCR法对8份疫情病例样本进行诺如病毒RNA检测,取其中4份阳性标本再经RT-PCR扩增,然后纯化、克隆、测序和进化树分析。结果8份标本均测出诺如病毒RNA,阳性率100%;其中4株病毒的N/S区序列与GenBank中的雪山病毒参考株同源性最高,达95%。结论序列测定结果证实广西大新县的急性胃肠炎疫情是诺如病毒感染所致,其病毒基因型为GⅡ.2型。
- 刘巍隆文杰石玲玲董柏青邓丽丽农梁伟黄春光黄丽华李艳杨进业
- 关键词：诺如病毒REAL-TIMERT-PCR
- 碱性土壤微生物基因的克隆和多样性分析被引量：8
- 2006年
- 从碱性土壤样品中直接抽提和分离宏基因组DNA,首先构建了包含5562个阳性克隆的碱性土壤16SrDNA文库,随机抽取9个克隆测序后构建的系统进化树表明了碱性土壤环境微生物种群基因的多样性。纯化土壤宏基因组DNA后采用EcoRⅠ酶部分酶切处理,我们又构建了以pGEM-3Zf(+)为载体的DNA部分文库AL01。AL01文库包含23650个克隆,随机插入载体的外源DNA片段平均大小为3.2kb左右,DNA文库的总容量为75.68Mb。建库效率为从每克环境样品中获得6000个左右的含随机外源DNA片段插入载体的克隆。采用酶活筛选策略,我们从AL01文库中筛选到一个编号为pGXAA2011的阳性克隆携带有一个完整的碱性蛋白酶基因。蛋白酶活性检测其酶活作用最佳温度为40℃,最适作用pH值为9.5。另外,我们还克隆和表达了一个新型-葡萄糖苷酶基因unglu01,该基因和现有数据库中的-葡萄糖苷酶基因没有任何DNA或者氨基酸水平的同源性。将unglu01基因的ORF与表达载体pETBlue-2连接后导入宿主菌株Tuner(DE3)pLacI中,该重组表达克隆在含柠檬酸高铁铵和七叶苷的LA平板上表现清晰的-葡萄糖苷酶活性,SDS-PAGE电泳可以检测到29kDa大小的目的蛋白。
- 胡婷婷蒋承建梁璇隆文杰武波
- 关键词：宏基因组文库未培养微生物碱性蛋白酶Β-葡萄糖苷酶
