高冬生
- 作品数：59 被引量：97H指数：7
- 供职机构：河南农业大学更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 表达PEDV中国变异株S蛋白复制型重组人腺病毒4型的构建及其免疫原性研究被引量：2
- 2018年
- 为构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白复制型重组人腺病毒4型(HAdV-4)及评价其免疫原性,本研究利用RT-PCR扩增得到PEDV中国变异株纤突(S)基因的N-末端区域(1 bp^1 140 bp),构建重组质粒p Ad4FAST-Shuttle-S,重组质粒经线性化和同源重组,得到含有PEDV S基因的重组HAdV-4感染性克隆,纯化的感染性克隆DNA经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞,拯救得到表达PEDV变异株S蛋白的重组病毒rAd4△E3-S。将该重组病毒免疫小鼠,间接ELISA测定其血清中抗S蛋白抗体水平,利用体外淋巴细胞转化试验和流式细胞技术检测免疫小鼠T淋巴细胞反应。结果显示,重组病毒能够表达PEDV S蛋白,并且能刺激小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答。本实验结果为进一步研究重组病毒在猪体上的免疫反应奠定基础,也为PEDV活载体疫苗的研发提供实验依据。
- 王晓雪刘延珂杨东东吴艳阳高冬生王永生李永涛赵军王川庆张改平
- 关键词：S基因活载体疫苗
- 基于PEDVNsp7蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用被引量：2
- 2017年
- 本研究旨在建立检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)不同毒株抗体的间接ELISA方法。试验以纯化的非结构蛋白7(nonstructural protein 7,Nsp7)作为包被抗原,通过优化ELISA反应条件建立了PEDV不同毒株抗体检测的间接ELISA方法。结果显示,其最佳反应条件为:抗原包被量为0.2μg/孔,包被条件为37℃孵育1h后4℃过夜;血清稀释度为1∶300,作用时间为2h;酶标二抗最适稀释度为1∶10 000,作用时间为1.5h;TMB显色液作用时间为15min。在优化条件下,临界值的判定标准为:样品S/P值>0.1694判为阳性,S/P值<0.1398判为阴性。所建立的ELISA方法特异性、重复性及敏感性均良好。用所建立的ELISA方法对40份来自于疑似猪PEDV血清样品进行检测,该方法与商品化试剂盒检测之间的符合率为95%。本研究建立的ELISA方法在临床上可用于PEDV不同毒株抗体水平的检测,也有用于PEDV早期诊断的潜质,从而为制定有效防控PEDV的措施提供一定的参考依据。
- 李红杰任豪杰刘延珂高冬生赵军
- 关键词：间接ELISA
- 一种禽腺病毒4型毒株、疫苗组合物及其应用
- 本发明公开了一株新分离的禽腺病毒4型HNJZ株，其微生物保藏编号为CGMCC NO.13385，该毒株具有良好的特异性和免疫原性，可作为灭活疫苗生产毒株及检验用毒种，用于预防禽类的肝炎‑心包积液综合症。本发明还公开了一种...
- 赵军王川庆杨霞常洪涛陈陆王新卫李永涛刘红英姚慧霞高冬生刘延珂
- 文献传递
- 胞内劳森菌LsaA蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
- 引言胞内劳森菌主要引起猪的增生性肠炎。发病猪食欲下降、拉稀和生长发育迟缓,给养猪业造成巨大的经济损失。亟需建立一种能够快速、准确的检测胞内劳森菌特异性抗体的高通量血清学方法。由于胞内劳森菌是一种严格的细胞内寄生细菌,培养...
- 吴艳阳杨东东高冬生李永涛常洪涛陈陆王川庆赵军
- 河南及山西省21株鸡杆菌分离株16S rRNA基因序列分析被引量：3
- 2011年
- 对21株分离自河南及山西地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列进行研究,以此分析分离株的进化关系并确定其在鸡杆菌属中所属的具体种。采用PCR方法扩增其16SrRNA基因序列,然后克隆测序。用DNAStar软件对21个菌株的序列及GenBank中已公布的鸡杆菌属相关菌株序列进行同源性比较,结果发现21株分离株之间的核苷酸序列同源性为96.0%～100%,同鸭源鸡杆菌F279(Gallibacterium anatis F279)(AF228002)的同源性为95.3%～99.3%,同输卵管炎鸡杆菌F150(Gallibacterium salpingitidis F150)(EU424000)的同源性为88.3%～91.5%,同虎皮鹦鹉鸡杆菌F450(Gallibacterium melopsittaci F450)(EU339196)的同源性为90.3%～93.3%,同海藻糖发酵鸡杆菌52-S3-90(Gallibacterium trehalosifermentans 52-S3-90)(EU339199)的同源性为88.2%～91.4%,同多杀性巴氏杆菌CCUG 179(P.multocida CCUG 17977)(AF294411)的同源性为85.5%～88.8%,对21株细菌的序列同以上菌株的16SrRNA基因序列进行遗传进化树分析,显示21株细菌同鸭源鸡杆菌F279(AF228002)构成一个单独的大分支。结果表明,所有分离株均属于鸭源鸡杆菌,首次大量报道了来源于河南、山西省不同地区的鸡杆菌的16SrRNA基因序列,为鸡杆菌分类的研究提供了参考。
- 高冬生刘红英杨霞赵军陈陆王新卫常洪涛姚慧霞迪丽拜尔.阿木提王川庆
- 关键词：鸭源鸡杆菌克隆测序同源性比较系统进化分析
- 一种表达猪圆环病毒2型ORF2基因重组猪伪狂犬病病毒株及其构建方法
- 本发明属于猪伪狂犬病病毒技术领域，公开一种表达猪圆环病毒2型ORF2基因重组猪伪狂犬病病毒株及其构建方法。所述重组猪伪狂犬病病毒株为rPRV‑gE<Sup>‑</Sup>/TK<Sup>‑</Sup>/ORF2<Sup>...
- 陈陆时庆贺石昂常洪涛王永生王新卫高冬生王川庆
- 文献传递
- 检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒双重RT-PCR的建立与初步应用被引量：5
- 2016年
- 为了快速检测临床样品中新城疫病毒(NDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的混合感染,根据NDV的F基因和IBV的N基因保守序列分别设计了2对特异性引物,优化双重RT-PCR反应条件,建立了可同时检测NDV和IBV的快速双重反转录PCR(RT-PCR)诊断方法。敏感性试验表明,此方法对NDV和IBV的RNA最小检出量分别为0.014 3和0.013 6ng;NDV的扩增片段大小为459bp,IBV的扩增片段为282bp。对其他病毒如IBDV、AIV和EDSV的检测结果均为阴性,表明此方法具有较好的特异性。对58份临床疑似样品进行检测,NDV和IBV的阳性率分别为44.82%和31.03%,NDV和IBV混合感染率为20.68%,表明本研究建立的NDV与IBV双重RT-PCR检测方法,可用于临床发病病料中NDV和IBV混合感染的快速鉴别诊断。
- 刘金玲李晓静李红杰王晓雪高冬生李永涛常洪涛赵军王川庆
- 关键词：新城疫病毒鸡传染性支气管炎病毒
- IBV肾型毒株与呼吸型疫苗株鉴别方法的建立与应用被引量：3
- 2011年
- 【目的】建立基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的反转录-复合PCR方法,为IBV流行毒株和呼吸型疫苗株的分型鉴定提供技术支持。【方法】根据IBVN基因序列设计合成1对特异性通用引物,建立IBV的分子生物学检测方法,用以对IBV进行检测。通过对GenBank上公布的IBVS1基因全序列的分析比对,找出呼吸型疫苗株和地方肾型流行毒株相对保守的差异序列,设计合成2对引物,建立可以对这2类IBV毒株进行鉴别的反转录-复合PCR方法,同时对该方法的敏感性和重复性进行检测,并对该方法进行了实际应用。【结果】建立了区别IBV肾型毒株和呼吸型毒株的分型方法,该方法敏感性好,能检出经106稀释后的基因组RNA,且具有可重复性;临床应用显示,该方法对呼吸型毒株和近年来的地方肾型分离株具有较好的分型效果,而对较早时期的肾型分离株(YI株和澳大利亚T株)的扩增结果为阴性;经鉴定,近年来感染鸡群并引起高死亡率的分离毒株主要为肾型IBV。【结论】建立了区别IBV肾型毒株和呼吸型毒株的分型方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,能将我国地方流行的肾型IBV毒株与呼吸型疫苗株完全区分开来。
- 徐雪高冬生王川庆陈陆杨霞皇甫和平刘慧敏郑鹿平杨猛张金来李昆明张九洲
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒N基因S1基因
- 一种用于同时检测NDV、IBV和H9N2亚型AIV的多重RPA引物和探针及其检测方法
- 本发明公开了一种用于同时检测新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和H9N2亚型禽流感病毒的多重RPA引物和探针，所述多重RPA引物和探针是由检测新城疫病毒的引物和探针、检测传染性支气管炎病毒的引物和探针、检测H9N2亚型禽流感...
- 赵军王川庆杨霞李永涛常洪涛陈陆王新卫刘红英姚慧霞高冬生
- 文献传递
- SPF蛋鸡人工感染鸡杆菌的病理形态学观察被引量：4
- 2010年
- 采用鸡杆菌自然病例分离纯化的鸡杆菌人工感染开产前(105日龄)和开产后(163日龄)的SPF蛋鸡,运用组织学的方法对鸡杆菌自然病例和试验病例进行比较病理学观察。结果表明,自然病例和试验病例均可引起蛋鸡产蛋高峰推迟,产蛋量下降,且多产畸形蛋;病变主要在呼吸道和生殖道,主要表现为呼吸道和生殖道黏膜层严重充血、水肿、浆液性及炎性渗出等反应。但是试验病例未出现自然病例中常见的腹膜炎和输卵管炎症状。输卵管的病变主要在膨大部和子宫部,这种特征性病变可作为该病病理诊断的重要指征之一。这表明鸡杆菌单因子感染可引起SPF开产蛋鸡生产性能明显降低以及呼吸道和生殖道的病理变化。
- 刘慧敏陈陆杨霞常洪涛郑鹿平王永生高冬生王珊王川庆
- 关键词：病理学输卵管
