黄锦
- 作品数：9 被引量：42H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向PEG10的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨靶向PEG10的siRNA真核表达载体(psiRNA-PEG10)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响。方法建立人肝癌细胞HepG2的荷瘤裸鼠模型,在接种后第14天分别将psiRNA空载体和psiR-NA-PEG10瘤内多点注射进行治疗,观察肿瘤大小变化、组织形态学及超微病理改变。结果psiRNA-PEG10治疗组肿瘤生长受到明显抑制,与生理盐水组和psiRNA组比较差异有显著性(P<0.001),抑瘤率明显高于其他两组,电镜下可见明显的细胞凋亡。结论靶向PEG10的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长有抑制作用。
- 黄锦唐滔林菊生董旭旸
- 关键词：SIRNA裸鼠肝癌移植瘤
- 靶向遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体的构建及鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的构建并鉴定针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体。方法根据PEG10基因cDNA序列,设计针对目的基因的4个siRNA靶序列,将其插入H1启动子下游,克隆到真核表达载体psiRNA-hH1neo中,通过酶切鉴定和DNA测序鉴定。结果酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。结论本研究成功构建针对PEG10的真核表达载体,可能成为肝癌基因治疗中的一种新型、高效的治疗载体。
- 黄锦林菊生常莹周秀敏
- 关键词：PEG10SIRNA真核表达载体
- Stathmin/Oncoprotein 18(Op18)在肝细胞癌中的表达及其意义被引量：5
- 2007年
- 目的探讨Stathmin/oncoprotein 18(Op18) mRNA和蛋白在肝细胞癌中的表达程度及其与肝癌临床病理特征的关系。方法应用RT-PCR技术检测33例肝癌、相应癌旁组织和肝癌细胞株SMMC7721和HepG2中Stathminm RNA的水平,同时应用免疫组织化学方法检测了上述组织和细胞株中Stathmin蛋白的表达。结果肝癌组织Stathmin mRNA的表达水平高于相应的癌旁组织(P<0.05)。肝癌组织Stathmin蛋白的阳性表达率为51.5%,癌旁组织为6%,阳性染色位于胞质内。两种肝癌细胞株中亦有Stathmin表达。Stathmin过表达与肿瘤大小、门脉受侵、TNM分期及Edmondson分级有关(P<0.05)。结论Stathmin在肝癌中过表达,可能与肝癌的发生及进展有关。
- 董旭易继林李兴睿黄锦陶露薇林菊生
- 关键词：肝细胞肝癌STATHMIN基因治疗
- RNA干扰在肝癌中的应用
- 2004年
- 近年来,RNA干扰(RNAi)技术已成为癌症基因治疗中令人关注的研究热点,以其高效、特异、应用广泛的特点,展示了诱人的临床应用前景.
RNAi是内源性或外源性双链RNA诱发的mRNA水平上的基因沉默机制.RNAi技术有3个重要的特点,首先它具有高效性.从刚开始的21～23 nt的小干扰RNA(siRNA)分子,到后来研究应用的27～29nt的小发夹RNA(shRNA)分子,RNAi都具有高效抑制作用,抑制率均在90%以上.其二,RNAi有严格的序列特异性.针对变异基因设计的siRNA或shRNA分子抑制异常基因,而正常基因不受影响.其三,siRNA具有高度的稳定性.它是3′端悬挂TT碱基的双链RNA,化学性质很稳定,不需要修饰.如果加入一个6 nt环(1oop)的shRNA,则更进一步增加其稳定性和高效性.
- 黄锦林菊生
- 关键词：肝癌RNA干扰癌症基因
- PEG10基因siRNA真核表达载体的构建及其对肝癌HepG2细胞凋亡的影响被引量：9
- 2007年
- 目的:构建针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体,体外观察其对肝癌HepG2细胞凋亡的影响.方法:设计针对PEG10基因的3个siRNA靶序列,构建真核表达载体siRNA1,siRNA2和siRNA3,脂质体分别转染HepG2细胞后实时定量PCR,检测其对HepG2细胞PEG10基因表达的影响,MTT法、流式细胞仪和激光共聚焦检测转染siRNA后的HepG2细胞的生长活性及凋亡.结果:成功构建了针对PEG10基因的3个特异性siRNA表达载体.它们不同程度地抑制了HepG2细胞PEG10基因的表达,以siRNA2抑制效率最高,可达93.99%.HepG2细胞的生长也明显受到抑制(P<0.05),大量HepG2细胞凋亡,siRNA2凋亡率最高,为66.91%.结论:靶向PEG10基因的siRNA表达载体可抑制肝癌HepG2细胞的生长,诱导细胞凋亡,该作用与降低PEG10基因的表达有关.
- 黄锦林菊生董旭旸常莹宋宇虎
- 关键词：RNA干扰
- PEG10基因siRNA真核表达载体对HepG2细胞周期的影响被引量：9
- 2007年
- 目的观察针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体对人肝癌HepG2细胞周期及细胞周期调控蛋白表达水平的影响。方法以脂质体法将psiRNA-PEG10真核表达载体转染HepG2细胞,RT-PCR检测PEG10 mRNA的表达,流式细胞仪观察细胞周期分布的变化;RT-PCR和Western Blotting法分别检测细胞周期调节蛋白D1(CyclinD1)和P27 mRNA和蛋白水平的表达变化。结果RT-PCR结果显示,转染psiRNA-PEG10的HepG2细胞中PEG10 mRNA的表达明显降低;流式细胞仪检测发现,与未转染组和空载体组相比,转染psiRNA-PEG10后处于G0/G1期的HepG2细胞百分比明显升高(P<0.01),而G2/M期的细胞百分比明显降低(P<0.01);在mRNA和蛋白水平上,转染psiRNA-PEG10的细胞CyclinD1表达明显降低;而P27表达明显升高(P<0.01)。结论PEG10可通过影响细胞周期调控蛋白CyclinD1和P27表达,干扰肿瘤细胞的细胞周期发挥抗瘤作用,针对PEG10的siRNA真核表达载体有望成为研究肝癌治疗的有力工具。
- 黄锦林菊生董旭旸唐滔
- 关键词：PEG10RNA干扰肝癌
- PEG10基因RNA干扰对人肝癌细胞系Hep3B体外增殖的影响
- 2009年
- 目的研究PEG10基因RNA干扰对肝癌细胞系Hep3B体外增殖的影响。方法psiRNA-PEG10真核表达载体转染Hep3B细胞,MTT法检测细胞体外增殖速度,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果psiRNA-PEG10真核表达载体转染Hep3B细胞后,明显沉默了Hep3B mRNA和蛋白的表达,转染后48 h抑制效率最高。Hep3B细胞体外增殖受到抑制(P<0.05),流式细胞仪分析结果显示大量Hep3B细胞凋亡,激光共聚焦显微镜观察到凋亡细胞形态。结论PEG10基因RNA干扰在体外可明显沉默肝癌细胞内PEG10基因的表达,抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡。
- 黄锦林菊生董旭旸宋宇虎常莹
- 关键词：肝癌RNA干扰PEG10
- 肝癌组织中遗传印记基因PEG10表达的特异性及其意义被引量：29
- 2005年
- 目的:研究PEG10在肝癌组织中表达的特异性,为其作为一个潜在的肝癌基因治疗的新的分子靶点提供实验依据.方法:从来自不同器官组织的肿瘤细胞系(人肝癌细胞株HepG2、人胃癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株Lovo、人胰腺癌细胞株PC3、人黑色素瘤细胞株A375、人T淋巴瘤细胞株Jurkat)、正常人胎肝细胞株L02、32例肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织、10例良性肝病患者肝组织、10例正常人外周血单个核细胞中抽提总RNA,经RT逆转录合成cDNA,再以PCR方法检测PEG10的表达.同时,肝癌组织和癌旁组织标本经RT-PCR检测AFP的表达.结果:经RT-PCR扩增的PEG10基因片段为455bp,AFP基因的扩增片段为140bp,与原设计一致;PEG10在人肝癌细胞株HepG2中明显表达,人胃癌细胞株SGK7901、人结肠癌细胞株Lovo、人胰腺癌细胞株PC3中弱表达,而正常人胚胎肝细胞株LO2和其他肿瘤细胞株(人T淋巴细胞瘤、人黑色素瘤)中表达均为阴性雇32例肝癌及相应癌旁组织中,PEG10的表达阳性率分别为78.1%和0%;而AFP基因的阳性率分别为93.8%和59.4%.经McNemar检验,显示PEG10基因在肝癌组织中表达的敏感性与AFP表达敏感性之间无显著性差异(X20.01,1=1.78,P>0.05);而癌旁组织中PEG10表达率(0/32)明显低于AFP表达率(19/32)(X20.01,1=17.05,P<0.01).另外10例良性肝病患者(肝硬化4例,自身免疫性肝病2例,肝血管瘤2例,丙型肝炎1例,血色素病1例)肝组织标本及正常人的外周血细胞进行PEG10基因检测,结果均为阴性.结论:PEG10的表达不但具有比AFP更高的肝癌组织特异性,而且具有相对器官组织特异性.本实验为PEG10作为一个新的肝癌标志物和基因治疗的分子靶点提供了实验依据.
- 常莹陶璐薇陈孝平周秀敏宋宇虎黄锦张琼林菊生
- 关键词：肝癌组织特异性基因治疗
