代晓朋
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用
- 本发明公开了一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用。HNF1α的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。HNF1α能够抑制肝细胞分泌表达s抗原（HBsAg），e抗原（HBeAg）以及降低HBV DNA载量，HNF1α...
- 周育森李军锋代晓朋张伟孙世惠寇志华赵光宇于虹郭彦
- 文献传递
- 重组人血清白蛋白-干扰素α-2b 融合蛋白体外抗乙型肝炎病毒活性评价被引量：9
- 2014年
- 目的检测重组人血清白蛋白-干扰素α-2b融合蛋白(HSA-IFNα-2b)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法构建含1.6倍HBV基因组及绿色荧光蛋白的重组腺病毒(AdGFP-HBV),感染人肝细胞系HepG2细胞,构建HBV复制细胞模型;ELISA法检测HBV乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)表达;MTT法检测HSA-IFNα-2b对HepG2细胞的毒性作用;定量PCR法检测细胞内HBV RNA的相对表达以及细胞上清中HBV DNA绝对表达水平;双报告基因法检测HSA-IFNα-2b对HBV增强子Ⅰ活性的影响。结果 AdGFP-HBV感染HepG2细胞后可以复制表达HBV。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1加入AdGFP-HBV感染的HepG2细胞,使HBsAg表达降低51.32%(P<0.01),HBeAg降低50.26%(P<0.01),而相同浓度的HSA-IFNα-2b并不抑制细胞的增殖。随HSA-IFNα-2b浓度增加,其对HBsAg表达的抑制作用逐渐升高,HSA-IFNα-2b对HBsAg表达的抑制率(Y)与其浓度(X)的回归方程是Y=21.11 lgX+11.91(r2=0.954),IC50为63.76 kU·L-1。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使细胞中HBV RNA下降52.83%(P<0.01),培养上清中HBV DNA降低53.07%(P<0.01)。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使HBV增强子Ⅰ活性下降40.04%(P<0.01)。结论构建了可用于药物评价的HBV复制细胞模型,HSA-IFNα-2b体外具有抗HBV活性。
- 张伟张伟代晓朋武福军祁碧玉刘志敏刘志敏李军锋
- 关键词：乙型肝炎病毒血清白蛋白干扰素Α-2B融合蛋白
- microRNA-15b在乙型肝炎病毒复制中的作用及分子机制研究
- 乙型肝炎病毒(HBV)感染宿主后，HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)可整合入宿主细胞的染色体中，并能够在宿主细胞中复制，可形成慢性持续性感染状态。对于HBV的治疗，虽然临床上应用干扰素α和核苷类似物治疗HB...
- 代晓朋
- 关键词：乙型肝炎病毒基因复制分子机制
- 文献传递
- 表达miR-192的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达分析被引量：1
- 2013年
- 目的:构建表达miR-192的重组腺病毒,感染HepG2细胞建立miR-192高表达的细胞模型,以研究miR-192在肝细胞中的功能。方法:将miR-192前体基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack,构建miR-192穿梭载体pAdTrack-miR-192,经线性化和同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-miR-192;线性化后,在QBI-293A细胞中进行病毒包装;用包装成功的重组腺病毒感染HepG2细胞,72 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后进行定量PCR,检测miR-192和潜在靶分子视网膜母细胞瘤基因1(RB1)mRNA的变化。结果:获得670 bp的miR-192前体基因,经过穿梭载体后重组构建表达miR-192的腺病毒载体pAd-miR-192;将pAd-miR-192转染QBI-293A细胞,第8 d细胞病变及荧光的表达结果表明重组腺病毒成功包装;感染HepG2细胞后,定量PCR检测表明miR-192的表达较对照增加了835.87倍,同时检测到细胞中RB1 mRNA的表达显著降低。结论:构建了高效表达miR-192的腺病毒,建立了miR-192高表达的肝细胞模型,证明在肝细胞中抑制的RB1是miR-192靶分子,为后续miR-192在肝细胞中功能的研究奠定了基础。
- 代晓朋李军锋张红飞张伟赵光宇于虹郭彦周育森
- 关键词：腺病毒载体肝癌细胞
- 抗GPC3 C端抗体辅助杀伤肝癌细胞HepG2的活性检测及抗原表位鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的：检测制备的7株抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）蛋白C端单克隆抗体是否具有辅助杀伤肝癌细胞的活性，并研究其识别的抗原表位。方法：用细胞增殖法检测制备的抗体是否具有抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）活性；用生物信息软件分析GPC3蛋白C端（359～580残基）的结构及抗原特征，并据此将其分为4个截短片段，将克隆的各基因片段分别连接到原核表达载体pGEX-4T-1中，进行蛋白表达和纯化，用间接ELISA和Western印迹分析GPC3C端单克隆抗体的表位识别情况。结果与结论：制备的7株单克隆抗体对肝癌细胞HepG2均具有不同程度的辅助杀伤作用，其中5号单克隆抗体的辅助杀伤效果最好；表达并纯化了GPC3C端4个截短片段的重组蛋白；间接ELISA和Western印迹检测结果表明，7株抗体均特异性结合GPC3蛋白的473～525残基区段。
- 张红飞张慧娜李军锋于虹代晓朋赵光宇郭彦王凯娟张建营周育森
- 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖3肝癌细胞HEPG2
- 一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用
- 本发明公开了一种新型抗HBV内源蛋白HNF1α及其应用。HNF1α的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。HNF1α能够抑制肝细胞分泌表达s抗原（HBsAg），e抗原（HBeAg）以及降低HBV DNA载量，HNF1α...
- 周育森李军锋代晓朋张伟孙世惠寇志华赵光宇于虹郭彦
- 文献传递
- 用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因表达的抗肝纤维化药物双报告基因系统的构建及其有效性鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的构建一种双报告基因系统，用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因（COLIAl）表达的抗肝纤维化药物。方法RT-PCR克隆转化生长因子β1（TGFβ1）全长基因，酶切后插入载体pcDNA3．1和pJW4303，构建真核表达载体pcDNA3.1-TGFβ1和pJW4303-TGFβl；以基因组DNA为模板，克隆COLlAl启动子，插入报告基因载体pGL4.29，构建含COLlAl启动子的报告基因载体pGL4.29-COLlAl promoter。上述重组载体鉴定使用酶切和序列测定。将pcDNA3.1-TGFβ1或pJW4303-TGFβ1与pGL4-COLlAl promoter、内参报告基因载体pRL-null共转染入肝星形细胞系LX-2中，构建转录激活的双报告基因系统。使用地塞米松鉴定该双报告基因系统评价抗肝纤维化药物的有效性。组间比较用Studant t检验分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果成功构建TGFβ1的两种真核表达载体和含COLlAl启动子的报告基因载体。通过双报告基因检测两种方式表达TGFβ1对COLlAl启动子活性的影响，结果表明：分泌表达的TGFβ1使cOLlAl启动子活性提高200倍以上（t=21.78，P=0.0001），非分泌表达的TGFβ1仅使cOLlAl启动子活性提高了不到2倍t=3.396，P=0.0274）。成功构建了转录激活的双报告基因系统。用COLlAl表达抑制剂地塞米松作为模式药物来鉴定该系统的有效性，结果显示地塞米松对COLlAl启动子有抑制作用，且呈有剂量依赖性。结论成功构建了用于筛选和评价抑制COLlAl表达的抗肝纤维化药物的双榀告基因系统并答定该系统的有效件．
- 张伟代晓朋于虹王鲁燕孙世惠李军锋周育森
- 关键词：肝硬化转化生长因子Β1
