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异基因造血干细胞移植后人巨细胞病毒感染临床毒株UL54基因的克隆及序列分析被引量：2: 2005年; 目的　研究异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)后感染人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株UL54基因的克隆与鉴定。方法　从异基因造血干细胞移植后感染HCMV的患者体内分离出HCMV临床毒株,根据GenBank提供的实验室标准病毒株HCMVAD169UL54基因DNA全序列及有关文献,从该临床毒株DNA中扩增分离出UL54基因片段,并克隆入pEGM3Z载体。对重组体pEGM3Z UL54进行测序鉴定,并进行初步的序列分析。结果　从临床病毒株中扩增出约3728bp的片段,克隆产物经琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定,证实为HCMVUL54基因,其序列保守区域与GenBank报道AD169基本一致,但在第519、618、723、910、1188、1641、2070、2278、2279、2442、3140等11个位点发生碱基突变,涉及到编码氨基酸C304R、T760N、Y1047C、R1054K等位点发生改变,其中T760N为UL54保守区域改变。结论　成功克隆出AlloHSCT后感染野生型人巨细胞病毒的UL54基因,初步的序列分析证实其存在11个碱基发生突变,并导致编码产物4个氨基酸位点发生改变。; 田传军李月琴王波叶铁真张纯青苏运贞何华坤周天鸿; 关键词：异基因造血干细胞移植人巨细胞病毒

M1RNA核酶抑制HCMV IE1和IE2基因表达的体内研究: ＜正＞人类巨细胞病毒（HCMV）是重要的母胎感染病毒之一。本文研究可抑制 HCMV IE1和 IE2 基因表达的 M1RNA 核酶。为在细胞内可表达出 M1RNA 核酶,我们将作用于 HCMV 的 IE1和 IE3重叠区...; 李月琴周天鸿王波李弘剑何华坤; 文献传递

核酶对人巨细胞病毒mRNA片段的体外切割被引量：8: 2003年; 引导序列GSs(GuideSequences)是能与mRNA互补 ,引导核酶RNaseP催化核心M1RNA对互补区域特异切割的小片段游离RNA。针对人巨细胞病毒HCMV(humancytomegalovirus)DNA聚合酶mRNA序列设计GS ,共价结合到大肠杆菌来源M1RNA中 ,构建成M1GS T7核酶。通过对巨细胞病毒DNA聚合酶亚克隆片段转录产物体外切割实验。; 陈浩军李弘剑周天鸿周乐平何华坤魏威程华胜; 关键词：核酶人巨细胞病毒体外切割 DNA聚合酶

RNase P核酶对人巨细胞病毒UL54基因mRNA体外切割作用被引量：2: 2004年; 外部引导序列(EGSs)是mRNA靶序列互补并引导RNase P切割的小RNA片段。我们设计与人巨细胞病毒HCMV(Human Cytomegalovirus) UL54基因mRNA序列互补的EGSs,将其与大肠杆菌来源RNase P催化核心M1 RNA构建成M1GS核酶。通过对UL54基因亚克隆片转录产物体外切割研究,证实该核酶具备对UL54 mRNA片段的特异切割能力,可以发展成为一种抗病毒试剂。; 周乐平李弘剑陈浩军李月琴何华坤王波周天鸿; 关键词：MRNA

核酶M1GS-T6对HCMV UL97基因RNA片段体外切割作用被引量：3: 2007年; 目的:研究M1GS核酶对HCMV UL97 mRNA的体外切割作用。方法:针对HCMV UL97 mRNA T6位点设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,GS),将其共价结合至大肠杆菌核酶P催化亚基(M1 RNA)的3′末端,构建M1GS-T6核酶,并用其对UL97基因亚克隆片段转录产物进行体外靶向切割实验。结果:核酶M1GS-T6具备特异性切割靶分子UL97mRNA的能力。结论:核酶M1GS-T6具备特异性切割活性,为进一步研究HCMV病毒基因功能和治疗提供了新的途径。; 张欣李弘剑李月琴何华坤邹奕周天鸿

PHEMA—MMA材料的细胞毒性试验被引量：6: 2003年; 用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)及直接接触细胞培养法对不同配比的甲基丙烯酸羟乙酯(HENA)和甲基丙烯酸甲酯(MMA)共聚物PHEMA-MMA进行了细胞毒性试验,结果一致,都为0级。表明该聚合物同样具有良好的生物相容性。两种方法比较,我们认为,直接接触细胞培养法对于生物材料毒性评估而言,方法简单、结果直观、效率更高。; 覃百花黄海狄静芳何华坤; 关键词：生物材料细胞毒性细胞培养

大肠杆菌来源核酶P M1亚单位对人巨细胞病毒磷酸转移酶基因mRNA片段的体外切割研究: 背景：大肠杆菌来源RNase P为一催化tRNA前体5′端成熟的核糖蛋白复合体,催化核心M1 RNA由377个核苷酸组成,可在一定盐离子环境下体外单独对RNA底物进行特异切割。RNase P为结构识别酶,其底物至少包括两...; 何华坤; 关键词：核酶人巨细胞病毒; 文献传递

BMPR-Ⅱ基因及其研究进展: 2002年; 骨形成蛋白受体-Ⅱ(bone morphogenetic protein re-ceptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ)基因编码一个跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体,在骨形成蛋白(BMP)信号传递中起重要作用.近年来,在BMPR-Ⅱ作用机制,及其与遗传病、骨的形成与再生、哺乳动物的发育、肿瘤的转移恶化、早期神经系统的分化等关系的研究中,取得了一些重要的进展,本文就BMPR-Ⅱ基因与肺动脉高压及在肿瘤细胞中的表达方面进行了综述.; 何华坤周天鸿; 关键词：基因结构肿瘤细胞

利用PCR-ASO技术分析MR基因多态性及与妊高征相关性研究: 2003年; 目的　探讨中国人群中盐皮质激素受体基因 (MR)外显子 3上C944T多态性与妊高征的相关性。方法　通过聚合酶链式反应 -等位特异性寡核苷酸杂交 (PCR -ASO)方法测定MR外显子 3上C944T多态性频率并通过统计学方法探讨这些多态性与妊高征的相关性。结果　MR外显子 3上C944T多态性位点中C等位基因和T等位基因在正常孕妇组中分别为 5 8 0 0 %与 42 0 0 %,在妊高征组中分别为 5 3 45 %与 46 5 5 %,在随机人群组中分别为 5 5 15 %与44 85 %。结论　中国人群中MR基因外显子 3上存在C944T多态性。; 郭芬莫雪华李月琴何华坤王莹周天鸿; 关键词：多态性妊高征

工程菌BL21-PET21a(+)-phy A表达植酸酶的研究被引量：5: 2004年; 对来源于Aspergillusniger的植酸酶基因phyA进行了改造 ,去除了内含子和信号肽编码序列后重组到表达载体PET2 1a( + )上 ,导入大肠杆菌BL2 1 (DE3)中 ,构建工程菌株BL2 1 PET2 1a( + ) phyA。植酸酶基因在工程菌株中得到了高效表达。表达产物主要以包涵体形式存在 ,表达量达到菌体蛋白的 30 %以上。改进了包涵体复性技术 ,包涵体蛋白经复性、纯化后 ,生物活性达到 1 5 0 0U mg ,并且复性蛋白具有较好的热稳定性 ,经过 75～ 95℃、30min的热处理后 ,仍然保持了生物活性 ,同时有明显的热激活现象。热激活后最高生物活性达到 5 0 0 0U mg。; 魏威李弘剑李月琴方玲陈浩军周乐平何华坤周天鸿; 关键词：植酸酶包涵体复性热稳定性工程菌

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