冯梦蝶
- 作品数：18 被引量：23H指数：3
- 供职机构：昆明理工大学更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究计划面上项目国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子筛选方法的建立
- 2015年
- 目的:通过构建p CAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。方法:PCR无义突变去除p CAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点,并在CAT片段的5’端引入CalⅠ的酶切位点,构建启动子陷阱载体p CAT3。TaqⅠ酶切噬菌体LSPA1基因组,插入p CAT3载体中,转化至大肠杆菌DH5α,通过氯霉素抗性平板筛选获得噬菌体LSPA1基因文库菌;随机挑取1株提取质粒,测序及比对分析插入序列;根据分析结果设计引物,扩增可能的启动子序列,并插入验证载体p-3lysm-egfp,转化DH5α,荧光显微镜观察。结果:成功构建p CAT3启动子陷阱载体,获得约100启动子文库菌,其中1株文库菌质粒中随机插入片段可能对应噬菌体LSPA1的ORF4启动子;插入待验证DNA片段的p-3lysm-egfp载体重组菌在荧光显微镜下能见到明显绿色荧光。结论:该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子,为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。
- 曾韦锟毛普加洪愉冯梦蝶许泽仰宋武战杨洪文赵继华王纪爱黄芬井申荣
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌噬菌体启动子
- CAT为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定被引量：3
- 2014年
- 以CAT（chloramphenicol acetyltransferase,CAT）为报告基因,构建p CAT2启动子探针载体从绿脓杆菌基因文库中筛选启动子。Sau3AⅠ酶切铜绿假单胞菌的基因组,回收（500-1 500 bp）片段并与p CAT2载体连接构建铜绿假单胞菌的基因组文库,PCR鉴定文库的多样性,利用氯霉素（10μg/m L）和卡那霉素（50μg/m L）双抗平板筛选了16株阳性菌株,并用PCR、测序、NCBI比对进行鉴定。构建的基因文库的库容量可达50 000个,覆盖基因全长的3.5倍,插入率达90%,具有较强的随机性。采用双抗平板进行启动子的筛选,筛选效率高达96%。获得了绿脓杆菌基因组中的9个启动子,同源性达99%以上,并对其活性进行初步鉴定,为铜绿假单胞菌基因表达调控的进一步研究奠定基础。
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- 关键词：报告基因
- LSPA1早期基因gp22细菌双杂交诱饵载体与筛选文库的建立
- 2015年
- 构建细菌双杂交系统中的诱饵载体p KT25-gp22和甲型副伤寒沙门氏菌基因文库以便后续的筛选实验。PCR扩增获得gp22基因,插入p KT25构成诱饵质粒p KT25-gp22。提取甲型副伤寒沙门氏菌基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到p UT18C质粒的Bam HⅠ位点,获得基因组DNA表达文库。用化转的方法将诱饵质粒与p UT18C共转入BTH101,检测诱饵质粒自激活作用,并检测诱饵蛋白对宿主菌的毒性。将文库质粒电转至JM109感受态,PCR鉴定文库的多样性。诱饵载体p KT25-gp22无自激活报告基因的能力且对细菌的生长无毒性。所构建的副甲基因组文库覆盖基因组达8倍,满足文库筛选需要。成功构建细菌双杂交系统中诱饵载体p KT25-gp22,筛选文库质量良好,可应用于细菌双杂交实验。
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- 关键词：诱饵载体基因组文库早期基因甲型副伤寒沙门氏菌
- 甲型副伤寒沙门菌PagC蛋白在乳酸乳球菌中的表达研究
- 2015年
- 目的构建能够表达甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白(Pag C)的乳酸乳球菌。方法 PCR扩增pag C基因,亚克隆至p MD18-T载体并测序,从亚克隆载体中酶切回收pag C基因,插入p MG36e并命名为p MG36e-pag C,转化乳酸乳球菌MG1363。溶菌酶加超声的方法破碎重组乳酸乳球菌,SDS-PAGE以及Western blot检测Pag C蛋白的表达。结果 p MG36e-pag C鉴定正确,Western blot检测到p MG36e-pag C/MG1363表达的Pag C蛋白。结论成功构建能组成型表达Pag C蛋白的乳酸乳球菌。
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- 关键词：乳酸乳球菌黏膜免疫BLOT
- 抗生物膜感染的群体效应抑制剂被引量：2
- 2016年
- 生物膜是微生物群落附着在基质或表面并被自身合成的胞外基质包裹形成的复合物。细菌生物膜为细菌提供保护层,阻止抗生素进入,使细菌表现出抗抗生素能力。据临床统计表明,80%病原菌感染与其群体效应(QS)介导的生物膜相关,因此,要根治病原菌的感染,抑制生物膜的形成至关重要。QS分子参与生物膜形成,而QS抑制剂(QSI)能抑制生物膜形成。该文就QSI在抗生物膜方面的进展进行综述。
- 冯梦蝶洪愉毛普加许泽仰曾韦锟
- 关键词：生物膜
- phoA为报告基因的甲型副伤寒沙门氏菌启动子文库的建立及初步鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的：构建以phoA为报告基因的甲型副伤寒沙门氏菌启动子文库。方法构建了以phoA为报告基因的“启动子陷阱载体” pPhoA，将甲型副伤寒沙门氏菌基因组DNA的随机酶切片段（500～1500 bp）连接到载体上，启动phoA表达产物与BCIP产生蓝色反应筛选启动子，经过PCR、测序、比对等分析文库质量。结果库容量达到30000个，覆盖基因组全长的2.6倍，同时验证了4个能够在加入BCIP的平板中表现出蓝色的菌落，发现了4个启动子插入片段。结论成功构建高质量的甲型副伤寒沙门氏菌启动子文库，为进一步研究甲型副伤寒沙门氏菌的基因表达与调控奠定了基础。
- 许泽仰洪愉冯梦蝶毛普加宋武战杨洪文赵继华黄芬井申荣曾韦锟
- 关键词：甲型副伤寒沙门氏菌PHOA
- 宿主菌抗噬菌体机制的研究进展被引量：4
- 2015年
- 噬菌体又称细菌病毒,是公认最丰富的微生物,也是最多样性的,这种多样性是适应所面对选择性压力例如普遍存在宿主菌的噬菌体抗性机制。噬菌体通过6步(吸附、注入、复制、转录翻译、组装和释放)侵入细菌并使之裂解,但是当噬菌体感染细菌,就会面临细菌抗噬菌体的机制,宿主菌能够进化出多种抗噬菌体的机制来避免噬菌体的侵染和裂解。本文就对宿主菌抗噬菌体各种机制作一综述。
- 毛普加曾韦锟洪愉冯梦蝶许泽仰
- 关键词：宿主菌噬菌体抗性机制
- 抗菌药物跨生物膜传递方式的研究进展
- 2016年
- 生物膜是指单一或混合微生物附着于生物或者合成的表面具有一定组织结构的微生物聚集体,其组成成分包括微生物自身及其分泌的多糖基质、纤维蛋白及脂质蛋白。生物膜除了能够帮助细菌耐受多种环境压力,例如紫外线、噬菌体等,更为重要的是它能够阻碍抗生素进入和扩散,是病原菌耐药性形成的重要机制之一。因此,在治疗病原体感染的过程中,选择一种有效的抗菌药物是必要的,但对于形成生物膜的微生物如何将抗菌药物有效地传递至生物膜从而彻底治愈成膜病原菌感染是至关重要的,所以本文就抗菌药物传递至生物膜的运输方式进行综述。
- 冯梦蝶曾韦锟
- 关键词：抗菌药物生物膜
- 甲型副伤寒沙门氏菌噬菌体PSPA1感染宿主相关基因分析被引量：6
- 2014年
- 目的分析影响甲型副伤寒沙门氏菌（副甲）噬菌体（PSPA1）感染宿主相关基因。方法诱导副甲利福平抗性株（副甲Rif^＋）；将副甲Rif^＋与SM10λpir／pSC189接合转座，噬菌体PSPA1处理转座菌液后，涂布卡那霉素、利福平双抗平板筛选转座突变菌；提取抗噬菌体突变菌基因组，热不对称PCR、回收片段并测序；测序结果提交NCBI进行序列比对，确定转座质粒插入副甲基因组的位点。结果成功诱导出副甲Rif^＋；筛选到6株抗噬菌体的突变菌；测序、NCBI比对发现6个不同的插入基因。结论利用转座子插入获得抗噬菌体感染甲型副伤寒沙门氏菌突变体，对这些突变体进行PCR、测序分析，说明可能有6个基因及相应的酶或蛋白与抗噬菌体相关，为进一步分析噬菌体与寄主菌相互作用关系提供基础。
- 毛普加洪愉冯金冯梦蝶许泽仰黄芬井申荣曾韦锟
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌噬菌体
- 随机转座子插入构建甲型副伤寒杆菌启动子文库被引量：1
- 2016年
- 目的构建携带氯霉素乙酰转移酶(CAT)的转座子自杀性质粒,通过接合转座获得甲型副伤寒沙门氏菌(副甲)启动子文库。方法 PCR扩增CAT的基因亚克隆至pMD-18T载体,鉴定正确后酶切插入转座子自杀性质粒pSC189,获得新的转座子载体pSC-CAT,将携带pSC-CAT的供体菌与副甲受体菌进行接合转座,涂布氯霉素平板筛选转座的细菌,以随机筛选出来的细菌基因组为模板,热不对称PCR扩增插入位点侧翼序列,并进行测序、比对分析。结果筛选获得约1000个突变菌,随机挑取6个菌,转座子插入位点的上游分别对应6个可疑启动子区域。结论通过自杀性转座子载体pSC-CAT可高效获得副甲菌启动子文库,为进一步研究副甲菌基因表达与调控奠定了基础。
- 许泽仰洪愉冯梦蝶毛普加赵继华杨洪文宋武战王纪爱黄芬井申荣曾韦锟
- 关键词：甲型副伤寒沙门氏菌
