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SB转座子介导的hLF乳腺表达载体的构建及鉴定: 引言"睡美人"(sleeping beauty,SB)转座子是Tcl/mariner转座因子超家族中的一员,是应用于脊椎动物中的第一个功能性Ⅱ型转座子,具有易生产、易标准化、分子纯度高、安全性高以及可将外源基因稳定整合到...; 宋洋张艳丽王子玉钟部帅孟立闫益波王锋; 文献传递

小鼠胚胎干细胞单层定向诱导分化为肝样细胞的研究: 2011年; 在建立小鼠胚胎干细胞(ES细胞)无饲养层单层培养体系的基础上,使用丁酸钠(NaB)和表皮生长因子(EGF)作为前期诱导分化剂,诱导分化7 d,再用肝细胞生长因子(HGF)和地塞米松(Dex)诱导分化12 d,建立了体外两步法单层诱导ES细胞分化为肝样细胞的方法,并对诱导分化所得的肝样细胞从形态学、基因表达、蛋白分子标记及细胞功能等方面进行了检测,证明了分化所得细胞为肝细胞,肝细胞分化率为41.67%,为肝细胞来源提供了新的方法。; 闫益波齐巍巍钟部帅樊懿萱宋洋黄荣万永杰王锋; 关键词：小鼠胚胎干细胞肝样细胞诱导分化小鼠

SB转座系统介导的hLF基因乳腺表达载体的构建及其表达研究: “睡美人”'(Sleeping Beauty, SB)转座系统,作为Tcl超家族中的一员,是对斑马鱼基因组进行了分子水平的重建,逐步恢复其ORF、核定位活性、DNA结合活性以及整合活性,并对其进行改造,使之恢复跳跃能力,...; 宋洋; 关键词：人乳铁蛋白 Β-乳球蛋白基因; 文献传递

人乳铁蛋白cDNA乳腺特异性表达载体的构建及其生物学功能分析: 本试验的目的是构建人乳铁蛋白(hLF)基因的乳腺特异性表达载体并验证其在乳腺细胞中的表达情况。本载体以山羊β-casein基因上游包括启动子、外显子1、内含子1、部分外显子2作为5’端调控序列,下游包括部分外显子7、内含...; 孟立张艳丽许欣钟部帅闫益波黄荣宋洋王子玉王锋; 关键词：HLF 生物学功能; 文献传递

精子载体法在转基因家畜中的应用与前景被引量：3: 2010年; 论文综述了精子载体法在家畜(猪、牛、羊)遗传育种、乳腺生物反应器和异种器官移植中的应用,并对其今后发展方向进行了展望。; 黄荣闫益波王子玉张艳丽宋洋孟立王锋; 关键词：精子转基因

人乳铁蛋白cDNA基因乳腺表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2011年; 为了构建人乳铁蛋白基因（hLF）的乳腺表达载体并验证其在乳腺细胞中的表达情况,本载体以山羊β-casein基因上游包括启动子、外显子1、内含子1、部分外显子2作为5′端调控序列,下游包括部分外显子7、内含子7、外显子8、内含子8、外显子9及3′部分基因组片段作为3′端调控序列,长度分别为6.2 kb和7.1 kb,将hLF基因（目的基因）和Neo基因（筛选标记）分别插入到5′端调控序列和3′端调控序列的下游,构建成pBC1-hLF-Neo载体,其全长为25.348 kb。为了检测该载体的生物学功能,用脂质体介导法将其分别导入到山羊乳腺上皮细胞GMC和小鼠乳腺癌细胞株C127中进行表达验证,经G418抗性筛选8~10 d,得到了药物抗性细胞克隆,经催乳素、胰岛素及氢化可的松诱导培养,通过RT-PCR、Western blotting以及重组hLF抑菌圈试验表明,山羊β-casein基因启动子驱动的hLF基因能够在C127和GMC乳腺上皮细胞中转录翻译,且重组hLF具有抑制大肠杆菌生长的生物活性,这为下一步建立稳定整合hLF基因奶山羊胎儿成纤维细胞系奠定了基础。; 孟立张艳丽许欣王子玉闫益波庞训胜钟部帅黄荣宋洋王金玉王锋; 关键词：HLF 生物学功能

SB转座子介导的hLF乳腺表达载体的构建及鉴定: 2011年; 构建了以睡美人(Sleeping beauty,SB)转座子为载体元件、β-乳球蛋白质(β-lactoglobulin,BLG)为调控区的人乳铁蛋白质(Human lactoferrin,hLF)乳腺表达载体及增强型绿色荧光蛋白质(EGFP)表达载体,便于验证SB转座子的转座效率,为hLF乳腺表达载体成功转染乳腺上皮细胞(GMC)奠定基础。采用PCR法从绵羊基因组中扩增5'、3'BLG,经TA克隆,在中间载体pcDNA3.1(-)的作用下,与hLF连接,得到pcDNA3.1(-)-BLG-hLF,然后与pT2连接,构建pT2-BLG-hLF;此外,还构建了pT2-BLG-EGFP。采用测序、酶切、PCR 3种方法鉴定阳性克隆,并用脂质体法将pT2-BLG-EGFP转染至GMC细胞中进行观察。分子鉴定结果:5'BLG、3'BLG克隆成功,pT2-BLG-hLF及pT2-BLG-EGFP构建正确;细胞鉴定结果:SB转座子介导的EGFP能在GMC细胞中高效表达。成功克隆了5'BLG、3'BLG调控区,并成功构建了乳腺表达载体pT2-BLG-hLF。; 宋洋王子玉张艳丽钟部帅张国敏孟立黄荣王昌龙闫益波王锋; 关键词：Β-乳球蛋白乳腺上皮细胞

SB转座子介导的hLF乳腺表达载体的构建及鉴定: 本研究利用“睡美人”(SB)转座子高效的转座能力，以5'、3'β-乳球蛋白(β-lactoglobulin，BLG)为调控区，成功构建了能够指导人乳铁蛋白(Human Lactoferrin，hLF)在动物乳腺中高效稳定...; 宋洋张艳丽王子玉钟部帅孟立闫益波王锋; 关键词：哺乳动物人乳铁蛋白

SB转座子介导的hLF乳腺表达载体的构建及鉴定: 本研究采用PCR方法从绵羊基因组中扩增β-乳球蛋白(β-lactoglobulin，BLG)3’、5’调控区，经TA克隆，在中间载体pcDNA3．1(-)的作用下，与人乳铁蛋白(Human Lactoferrin，hLF...; 宋洋张艳丽钟部帅王子玉孟立闫益波王锋; 关键词：生物反应器; 文献传递

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