通过研究PKB/Akt与Girdin蛋白之间的关系,目的在于揭示Girdin蛋白在PKB/Akt调控小鼠受精卵微丝聚集中的作用。研究中首先结合软件(http://scansite.mit.edu//)预测了PKB/Akt对Girdin蛋白的磷酸化位点,并制定特定位点磷酸化抗体,通过蛋白免疫印迹检测经PKB/Akt m RNA或PKB/Akt si RNA处理后的小鼠受精卵中Girdin蛋白磷酸化改变情况。同时检测了磷酸化的Girdin蛋白亚细胞定位及同微丝骨架的定位关系。进一步通过显微注射PKB/Akt m RNA再注射Girdin si RNA检测小鼠受精卵微丝骨架的聚集。结果显示经持续激活型PKB/Akt m RNA、野生型PKB/Akt m RNA处理后的小鼠受精卵中p-Girdin-1 417分布位置更加集中在2-细胞分裂沟处。经野生型和持续激活型PKB/Aktm RNA注射组p-Girdin-1 417表达增强,但是并不影响Girdin蛋白的总的表达。说明si RNA介导的PKB/Akt表达敲低非常明显地降低了Girdin蛋白的磷酸化。激光共聚焦研究显示在Akt m RNA和Girdin si RNA共注射组微丝骨架分布明显散乱。本研究结果充分说明Girdin蛋白在小鼠受精卵中受到PKB/Akt的调节,PKB/Akt通过磷酸化Girdin蛋白改变微丝骨架的聚集。
目的:探讨Girdin蛋白在调控小鼠受精卵早期发育微丝聚集中的作用。方法:采用免疫荧光染色观察Girdin蛋白和F-actin在小鼠受精卵中的共定位情况。激光共聚焦显微镜观察Girdin表达敲低后小鼠受精卵分裂形态及分裂率。结果:在小鼠受精卵中存在Girdin蛋白并且Girdin蛋白与F-actin存在共定位。敲低Girdin蛋白的表达,小鼠受精卵出现不规则分裂,10μmol/L Girdin si RNA处理组小鼠受精卵有28.93%到达2-细胞期,而注射20μmol/L Girdin si RNA组小鼠受精卵只有15.1%到达2-细胞期。并且Girdin表达敲低的受精卵微丝不能正确聚集。结论:Girdin蛋白在调控小鼠受精卵早期分裂微丝聚集中发挥作用。
