张秋婷
- 作品数：20 被引量：33H指数：3
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 逆转录病毒为载体制备转基因鸡的初步研究
- 为了建立更加完善的逆转录病毒法生产转基因鸡的技术体系。本研究选用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)为外源基因（亦为报告基因）、pEASY-T3为克隆载体、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)为骨架的puro-pBabe质粒为...
- 张秋婷
- 关键词：转基因鸡逆转录病毒增强型绿色荧光蛋白
- 文献传递
- 转Temporin-GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选和鉴定
- 2014年
- 为了获得山羊乳腺特异表达中国林蛙抗菌肽的转基因细胞株,研究利用前期工作中获得的山羊乳腺特异表达载体Tem-GFP-pBC1转染传代培养的山羊乳腺上皮细胞,并经G418筛选获得转基因阳性细胞。其结果,获得特异表达GFP和抗菌肽基因的转基因阳性细胞;转基因阳性细胞和冷冻复苏的转基因阳性细胞经培养,其细胞形态和生长曲线均正常;经PCR检测Tem-GFP-pBC1已整合入山羊乳腺上皮细胞的基因组中,且与对照组相比,转基因细胞可以检测到Tem-GFP的表达。结果表明,获得了能够在山羊乳腺中特异表达Tem-GFP融合蛋白的转基因阳性细胞。
- 王春生张志崇张秋婷朴善花仇雨歌安铁洙
- 关键词：中国林蛙山羊乳腺上皮细胞
- MSTN基因敲低绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1
- 2014年
- 为了获得绵羊MSTN基因敲低成纤维细胞株,克隆获得MSTN基因序列构建其真核表达载体;设计合成并筛选3种MSTN基因干涉序列(M1、M2和M3),构建相应的3种RNA干涉载体;将MSTN基因真核表达载体单独或分别与3种RNA干涉载体共转染绵羊成纤维细胞后,分别检测其对MSTN基因表达的干涉效率以获得最佳的MSTN基因RNA干涉载体;将筛选的RNA干涉载体线性化后转染绵羊成纤维细胞,通过筛选获得转基因细胞株。结果显示,成功克隆得到与GenBank中序列同源性为100%的绵羊MSTN基因序列,并获得真核表达载体pcDNA3.1(+)-MSTN;构建获得MSTN基因RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2和pRNAT-M3;与单独转染pcDNA3.1(+)-MSTN后293GP细胞中MSTN基因的相对表达量相比,转染干涉载体后MSTN基因相对表达量明显下降,其中pRNAT-M1干涉效率最佳;将pRNAT-M1线性化后转染绵羊成纤维细胞并利用G418筛选获得转基因阳性细胞;获得的转基因阳性细胞的细胞形态、生物学特性均呈现正常;PCR检测结果显示,pRNAT-M1已整合到细胞基因组中。上述结果表明,成功获得了MSTN基因敲低的绵羊成纤维细胞株。
- 李昊薛超张秋婷王春生朴善花宋红卫安铁洙
- 关键词：绵羊成纤维细胞MSTN基因RNA干涉转基因细胞
- 转Temporin-GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选
- 获得山羊乳腺特异表达中国林蛙抗菌肽的转基因细胞株,本研究利用前期工作中获得的山羊乳腺特异表达载体Tem-GFP-pBC1转染传代培养的山羊乳腺上皮细胞,并经G418筛选获得转基因阳性细胞.其结果,获得特异表达GFP和抗菌...
- 王春生张志崇张秋婷朴善花安铁洙
- 关键词：山羊抗菌肽
- 小鼠Lin28基因的克隆及原核表达
- 2011年
- 目的探讨获取小鼠Lin28蛋白的方法。方法 提取8.5 d ICR小鼠胚胎mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点(NcoⅠ及XhoⅠ)引物,从该cDNA中扩增出Lin28基因编码区序列;将获得的Lin28基因编码区序列克隆到pMD18-T载体上。对质粒双酶切回收其中Lin28基因片段,与pET-30a(+)载体相连接并转化Rosetta(DE3)型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对表达结果进行分析。结果对所克隆的Lin28蛋白编码区的DNA序列分析表明,Lin28 CDS区包括终止密码子在内为630 bp,与参照DNA(NM_145833)相比同源性为99.37%,与参照氨基酸序列相比同源性为100%;在IPTG诱导下pET-30a(+)-Lin28重组质粒可表达与预期相符的约为27.5×103的蛋白质。结论利用克隆的小鼠Lin28基因,采用原核表达方法,成功获得小鼠Lin28蛋白,为进一步开展以重组蛋白诱导体细胞重编程研究奠定基础。
- 宁方勇王春生张秋婷安星兰朴善花安铁洙
- 关键词：ICR小鼠克隆原核表达
- 鸡输卵管特异性表达载体的构建与检测
- 目的：本研究旨在构建并检测鸡输卵管组织特异性表达载体.方法：以鸡心提取的基因组DN为模板扩增出约3 kb的卵清蛋白调控序列50V;应用基因重组技术以50V部分启动序列50V-1.7k替换pIRES2-FGFP载体中CMV...
- ZHANG Qiu-ting张秋婷WU Zhi-hao吴治昊WANG Chun-sheng王春生PAO Shan-hua朴善花AN Tie-zhu安铁洙
- 关键词：卵清蛋白基因调控特异性检测
- 饲养层及细胞因子对鸡PGCs体外培养的影响被引量：3
- 2009年
- 原始生殖细胞(PGCs)具备发育全能性,而且数量较多,与数量较少的内细胞团(ICM)相比更有利于进行分离克隆。不同动物的PGCs的生长条件不同,因此建立适宜的培养体系是PGCs培养的关键。对饲养层细胞及细胞因子对鸡PGCs体外培养的影响作了简单的介绍。
- 张秋婷苗向阳安铁洙
- 关键词：原始生殖细胞饲养层细胞因子细胞培养
- 山羊c-Myc基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2014年
- 为了克隆出山羊c-Myc基因的CDS区序列,本研究利用RT-PCR技术,参照GenBank报道的绵羊、牛、猪、马等的c-Myc基因CDS区序列设计出特异性引物,从山羊胚胎皮肤组织中扩增出山羊c-Myc CDS区序列并进行序列分析。结果表明,山羊c-Myc基因CDS区全长1320bp(包括终止密码子),与绵羊c-Myc基因核苷酸序列(GenBank登录号:Z68501.1)比对仅有10处存在差异,其核苷酸序列同源性为99.17%,推导的氨基酸序列同源性为99.09%;与其他物种进行同源性分析结果显示,山羊c-Myc基因CDS区与猪、狼、人、大鼠、小鼠的核苷酸序列同源性分别为91.2%、92.0%、90.2%、86.9%、86.0%,推导的氨基酸序列同源性分别为93.6%、96.1%、92.3%、91.1%、89.6%;生物信息学软件分析结果表明,山羊c-Myc蛋白产物定位于细胞核并含有HLH结构域。本研究为进一步了解c-Myc基因的功能及探讨其在山羊体细胞重编程过程中的作用奠定了基础。
- 安辰瑞安铁洙张秋婷李昊朴善花王春生
- 关键词：C-MYC基因基因克隆
- 用于制备抗菌肽的山羊成纤维细胞系与鸡输卵管上皮细胞系的建立
- 抗菌肽因具有广谱杀菌、抗肿瘤、抗病毒和抗原虫等特点而成为新型抗生素类药物的研究热点。为了加快抗菌肽的生产速度，提高抗菌肽的产量，本研究在克隆获得中国林蛙皮肤抗菌肽基因Temporin-1CEa的基础上，构建山羊乳腺特异性...
- 张秋婷
- 关键词：抗菌肽
- 抗菌肽Thanatin转基因小鼠建立的初步研究
- 2010年
- 人工合成抗菌肽Thanatin基因的3条片段,利用重叠延伸PCR扩增技术得到完整的Thanatin基因,通过分子克隆方法构建出pIRES2-EGFP-Thanatin重组表达载体。然后与脂质体混合,采用睾丸打点注射将新构建的抗菌肽基因注入小鼠睾丸内,共注射公鼠5只。6周后与雌鼠交配,对新生仔鼠进行断尾,提取尾尖基因组DNA,利用PCR和Southern印迹方法对其进行检测。结果显示,得到的52只新生仔鼠中PCR检测阳性率为38.46%,Southern印迹检测阳性率为30.77%;在活体荧光成像系统下转基因小鼠呈现绿色荧光表达。通过睾丸注射法使Thanatin基因在小鼠的基因组中得到整合,为进一步研究抗菌肽的作用机理、培育抗病动物品种以及通过建立转基因动物生物反应器进行抗菌肽的大量生产奠定了基础。
- 张鑫尹逊河苗向阳曲朝杰张秋婷马艳芳
- 关键词：抗菌肽转基因鼠
