张红飞
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：郑州大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 深圳和郑州市急性呼吸道感染及流感认知调查被引量：1
- 2011年
- 目的了解甲型H1N1流感大流行不同阶段中国深圳和郑州两城市人群的急性呼吸道感染两周罹患率及流感相关知识、态度和行为。方法运用分阶段按容量比例概率抽样法对两城市分阶段进行6次电话调查。其中深圳市调查1 217人,郑州市调查1 214人。结果深圳市受访人出现急性呼吸道感染症状者占10.1%,6次调查受访家庭成员罹患率6.1%;郑州市分别是5.6%、3.0%。深圳市季节性流感疫苗接种率10.9%,甲型H1N1流感疫苗接种率9.2%;郑州市分别是6.0%、7.5%。深圳甲型H1N1流感疫苗免费接种知晓率是62.2%;郑州为67.5%。结论急性呼吸道感染罹患率、甲型H1N1疫苗接种率深圳均高于郑州。两市人群流感相关知识掌握尚不全面,需要针对性地加强健康宣传教育。
- 李海霞冯录召冯云霞张军慧张红飞聂绍发王凯娟
- 关键词：急性呼吸道感染电话调查
- 用于鉴定microRNA靶基因的新型双萤光素酶报告基因系统的构建及应用被引量：4
- 2011年
- 目的:构建用于鉴定microRNA靶基因的报告基因系统。方法:在pGL3-Basic载体的luc基因上游插入CMV启动子,下游插入用于克隆靶基因3'UTR的多克隆位点,构建报告基因载体pMIR-luciferase;将pMIR-lu-ciferase载体的luc基因替换成Rluc基因,构建内参载体pMIR-control;将补体因子H(CFH)的3'UTR插入pMIR-luciferase载体的多克隆位点处,构建含有CFH 3'UTR的报告基因载体;用pIRES2-EGFP载体构建microRNA146a真核表达载体;将含有CFH 3'UTR的报告基因载体、microRNA146a真核表达载体及内参载体共转染HepG2细胞,进行报告基因的活性检测。结果:构建了报告基因载体、内参载体和microRNA146a真核表达载体,经酶切和测序鉴定正确;microRNA146a真核表达载体转染细胞72 h后,经荧光显微镜观察确认载体转染及表达;用实时定量PCR检测,microRNA146a的表达水平显著上调(P<0.01);用构建的报告基因系统检测,结果表明microRNA146a显著地抑制了含CFH 3'UTR的报告基因的活性(P<0.05)。结论:构建了一种新型的报告基因载体系统,该系统可用于miRNA靶基因的鉴定。
- 鲍春旸李军锋张慧娜张红飞孙世惠于虹周育森
- 关键词：MICRORNA
- 重组表达乙肝病毒x蛋白的腺病毒构建及在HepG2细胞的表达被引量：1
- 2012年
- 目的:构建重组表达HBx的腺病毒,并通过感染细胞建立HBx高表达的细胞模型。方法:首先将HBx基因插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,限制性酶切鉴定正确后将其用PmeⅠ酶切线性化,转到BJ5183感受态细菌进行同源重组,重组后的腺病毒载体pAd-HBx经PacⅠ酶切线性化后,转染到QBI-293A细胞中,根据EGFP的表达判断重组腺病毒的包装情况。RT-PCR鉴定重组腺病毒的HBx基因表达。根据GFP的表达检测病毒滴度和感染效率。将病毒感染人肝癌HepG2细胞,48h后收集裂解细胞,Westernblot检测HBx蛋白的表达。结果:重组腺病毒载体pAd-HBx经酶切鉴定确认构建成功。将pAd-HBx转染到QBI-293A细胞,荧光检测提示病毒获得成功包装,RT-PCR检测到细胞中HBx基因的表达。重组病毒感染人肝癌HepG2细胞,Westernblot检测到HBx蛋白表达。结论:成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒,感染肝癌HepG2细胞后检测到了HBx蛋白的表达,提示建立了HBx高表达的细胞模型,为后续的HBx的功能研究奠定了基础。
- 张红飞李军锋户义张慧娜鲍春旸王凯娟周育森
- 关键词：腺病毒载体HBX基因肝癌细胞
- 表达miR-192的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达分析被引量：1
- 2013年
- 目的:构建表达miR-192的重组腺病毒,感染HepG2细胞建立miR-192高表达的细胞模型,以研究miR-192在肝细胞中的功能。方法:将miR-192前体基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack,构建miR-192穿梭载体pAdTrack-miR-192,经线性化和同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-miR-192;线性化后,在QBI-293A细胞中进行病毒包装;用包装成功的重组腺病毒感染HepG2细胞,72 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后进行定量PCR,检测miR-192和潜在靶分子视网膜母细胞瘤基因1(RB1)mRNA的变化。结果:获得670 bp的miR-192前体基因,经过穿梭载体后重组构建表达miR-192的腺病毒载体pAd-miR-192;将pAd-miR-192转染QBI-293A细胞,第8 d细胞病变及荧光的表达结果表明重组腺病毒成功包装;感染HepG2细胞后,定量PCR检测表明miR-192的表达较对照增加了835.87倍,同时检测到细胞中RB1 mRNA的表达显著降低。结论:构建了高效表达miR-192的腺病毒,建立了miR-192高表达的肝细胞模型,证明在肝细胞中抑制的RB1是miR-192靶分子,为后续miR-192在肝细胞中功能的研究奠定了基础。
- 代晓朋李军锋张红飞张伟赵光宇于虹郭彦周育森
- 关键词：腺病毒载体肝癌细胞
- 抗GPC3 C端抗体辅助杀伤肝癌细胞HepG2的活性检测及抗原表位鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的：检测制备的7株抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）蛋白C端单克隆抗体是否具有辅助杀伤肝癌细胞的活性，并研究其识别的抗原表位。方法：用细胞增殖法检测制备的抗体是否具有抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）活性；用生物信息软件分析GPC3蛋白C端（359～580残基）的结构及抗原特征，并据此将其分为4个截短片段，将克隆的各基因片段分别连接到原核表达载体pGEX-4T-1中，进行蛋白表达和纯化，用间接ELISA和Western印迹分析GPC3C端单克隆抗体的表位识别情况。结果与结论：制备的7株单克隆抗体对肝癌细胞HepG2均具有不同程度的辅助杀伤作用，其中5号单克隆抗体的辅助杀伤效果最好；表达并纯化了GPC3C端4个截短片段的重组蛋白；间接ELISA和Western印迹检测结果表明，7株抗体均特异性结合GPC3蛋白的473～525残基区段。
- 张红飞张慧娜李军锋于虹代晓朋赵光宇郭彦王凯娟张建营周育森
- 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖3肝癌细胞HEPG2
