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DNA-EGS1386胞内诱导核酶P抑制人巨细胞病毒UL49基因的表达被引量：1: 2009年; 外部引导序列(EGSs)是一类与mRNA靶序列互补并能引导核酶P切割靶mRNA的小分子RNA。本实验构建稳定表达UL49基因的HeLa细胞系,设计合成了针对于人巨细胞病毒(HCMV)UL49基因的12ntDNA性质的EGS1386,通过转染稳定表达UL49基因的细胞系,荧光定量PCR和Western blotting检测细胞内目的基因UL49的表达情况。结果显示在DNA-EGS1386作用下UL49基因的表达量降低了50%,表明DNA-EGS1386可以有效引导人的核酶P切割目标mRNA。因此,DNA-EGS可以发展成为一种新的基因沉默技术和潜在的抗病毒试剂。; 崔延伟曾志锋李弘剑李月琴周琪杨丹邹奕杨光周天鸿; 关键词：基因沉默

引导RNase P核酶的外部引导序列及其在制备抗HCMV药物中的应用: 本发明公开一种可引导RNase P核酶的12nt的EGS，包括以RNA为基础的EGS其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，和以DNA为基础的EGS，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明的EGS能够高效抑制...; 周天鸿曾志锋李弘剑李月琴张欣; 文献传递

应用载体介导的RNAi技术抑制HCMV的UL49基因表达被引量：2: 2005年; 为了研究RNA干涉抑制HCMV UL49基因的作用,以pLXSN(U6启动子)为模板通过两步PCR的方法扩增含U6启动子的siRNA表达片段,并通过TA克隆将siRNA表达片段克隆到pMD18-T载体构建成siRNA表达质粒,同时以人巨细胞病毒AD169病毒株基因组为模板PCR扩增UL49基因,将其克隆到pEGFP-N1构建融合质粒pEGFP-UL49。通过脂质体介导将siRNA表达质粒和pEGFP-UL49质粒共转染人宫颈癌细胞系HeLa,在荧光显微镜下观察RNA干涉结果。通过这种方法得到具有介导RNA干涉的siRNA片段,为UL49基因沉默研究提供技术基础。; 曾志锋李月琴唐冬生张欣王莹郭芬周天鸿; 关键词：RNAI技术 RNA干涉技术人巨细胞病毒基因表达载体介导

RNA干涉效应分子siRNA分子特性的研究: RNA干涉是近年来发现的小片段双链RNA分子能够特异地沉默基因表达的现象,它被广泛应用于功能基因组的研究、疾病治疗的研究、干细胞的研究及植物抗病毒等领域,各类型的实验室及研究机构广泛开展RNA干涉实验。RNA干涉实验首要...; 曾志锋; 关键词：RNA干涉; 文献传递

引导RNase P核酶的外部引导序列及其在制备抗HCMV药物中的应用: 本发明公开一种可引导RNase P核酶的12nt的EGS，包括以RNA为基础的EGS其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，和以DNA为基础的EGS，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明的EGS能够高效抑制...; 周天鸿曾志锋李弘剑李月琴张欣; 文献传递

腺病毒介导的人巨细胞病毒UL49基因小鼠模型的建立被引量：1: 2010年; 建立表达HCMVUL49基因的转基因小鼠,为抗病毒药物研究提供有效的实验动物模型。将UL49-GFP基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316中,构建重组质粒pDC316-UL49-GFP,与腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,3Cre通过脂质体介导共转染293细胞,重组产生腺病毒Ad-UL49-GFP,经PCR和Western blot鉴定正确后,大量扩增、纯化,制备高滴度重组腺病毒。纯化腺病毒经尾静脉注射感染小鼠,通过荧光定量PCR和Western blot方法,检测UL49基因在小鼠体内组织分布和表达时相。结果显示UL49基因在小鼠的心、肝、脾、肺、肾组织均有表达,并且表达量由高到低顺序依次是:肝、脾、肾、心、肺,在腺病毒感染第3天在各靶器官表达水平较高,此后逐渐下降,第14天时仅存在肝和脾中。表明表达UL49基因的小鼠模型构建成功。小鼠模型的成功建立为下一步筛选以UL49基因为靶的抗病毒药物奠定了基础。; 杨丹崔延伟李弘剑李月琴周琪曾志锋张欣杨光周天鸿; 关键词：人类巨细胞病毒腺病毒载体动物模型

一种RNA性质EGS的化学修饰方法及其在制备抗病毒药物中的应用: 本发明公开一种RNA性质EGS的化学修饰方法，该修饰方法是采用胆固醇对RNA性质的EGS分子进行修饰，优选RNA性质EGS的5’末端为最佳的胆固醇修饰部位。本发明可用于制备抗乙肝病毒、丙肝病毒和人类巨细胞病毒等病毒性疾病...; 李月琴曾志锋李弘剑周天鸿邹奕; 文献传递

人巨细胞病毒UL49 ORF编码蛋白的鉴定: 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)属β疱疹病毒科,是在全世界不同种群中普遍存在的病原体,具有复杂的致病性、体内不同寻常的潜伏及再激活方式、常为无症状感染,但会对免疫抑制、免疫力低下的人群...; 曾志锋朱峰杨丹张欣李月琴邹奕李弘剑周天鸿; 关键词：HCMV; 文献传递

改进型外部引导序列抑制人巨细胞病毒UL49基因的表达(英文)被引量：1: 2009年; 外部引导序列(EGS)技术(The EGS-based technology)是一种新型的基因沉默技术,能诱导内源性的核酶P(RNase P)对靶mRNA进行有效切割.以人类巨细胞病毒(HCMV)UL49基因mRNA片段为靶序列,基于前人实验基础上设计出更为精简与高效的改进型EGS(miniEGS),DNA片段长度仅为12bp.构建稳定表达HCMVUL49的细胞系,通过应用荧光定量PCR及Western印迹分别鉴定miniEGS对内源性UL49的抑制效率.结果显示,miniEGS能在HeLa细胞中能达到很高的转染效率(97.9%),并且在转染稳定表达UL49的HeLa细胞系后,发现UL49基因的mRNA与蛋白表达水平都出现明显下降(50%).研究表明,改进型的EGS序列不仅能有效抑制目的基因的表达,同时因其序列设计的精简性与高效性,可更好地应用到以后的抗病毒研究中.; 周琪曾志锋李弘剑李月琴崔延伟杨丹邹奕杨光周天鸿; 关键词：人巨细胞病毒基因沉默

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曾志锋