李启明
- 作品数：11 被引量：126H指数：4
- 供职机构：北京金迪克生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技部专项基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RCA技术的应用及研究进展被引量：4
- 2006年
- 李启明马学军
- 关键词：单核苷酸多态性单链DNA自我复制感染细菌放大系统
- 一种新颖酶联-环介导等温基因扩增技术(E-LAMP)的建立与应用
- 本发明属于生物技术应用领域，涉及人类医学及兽医，包括RNA病毒在各种生物制品、献血员、病人血液标本等的检测。具体是应用酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)，通过计算机软件分析HCV RNA病毒保守和病毒特异性基因序列...
- 李启明马学军高寒春孙梅生侯云德
- 文献传递
- 滚环复制技术(RCA)检测RNA病毒基因
- 本发明属于生物技术应用领域，涉及人类医学及兽医，包括RNA病毒在各种生物制品、献血员、病人血液标本等的监测。具体应用滚环复制技术(RCA方法)及其衍生的酶联滚环复制技术，通过生物学计算分析设计病毒保守和病毒特异性基因序列...
- 马学军李启明侯云德
- 文献传递
- 滚环复制技术的建立及在RNA病毒基因检测中的初步应用被引量：2
- 2005年
- 滚环复制是噬菌体繁殖所采取的一种基因复制方式,这种方式可使单链的环形分子在聚合酶和引物的作用下进行体外自我扩增。本文中用可特异性连接环化的寡核苷酸链作为探针,分别进行了1份细胞培养的禽流感病毒H5N1亚型样品、1份细胞培养的SARS病毒样品和4份丙型肝炎病毒阳性血清样品的检测。检测原理是探针与靶序列杂交后便可在T4DNA连接酶的作用下形成滚环复制中的环化单链分子,该分子在同温下可被特异性引物滚动复制和支链扩增。本文还利用按禽流感病毒NA1基因区序列合成的模拟DNA分子对该检测方法的灵敏度进行了测试。结果显示:利用固相RCA技术成功检测到三种RNA病毒的基因,该方法的灵敏度可达到能检测103拷贝模式DNA分子的水平。与传统的PCR方法敏感性的比较尚待进一步研究。
- 李启明马学军侯云德
- 关键词：RNA病毒
- 一种新颖酶联－环介导等温基因扩增技术(E－LAMP)的建立与应用
- 本发明属于生物技术应用领域，涉及人类医学及兽医，包括RNA病毒在各种生物制品、献血员、病人血液标本等的检测。具体是应用酶联－环介导等温扩增技术(E－LAMP)，通过计算机软件分析HCV RNA病毒保守和病毒特异性基因序列...
- 李启明马学军高寒春孙梅生侯云德
- 文献传递
- 从噬菌体随机肽库中筛选流感病毒神经氨酸酶的抑制多肽被引量：1
- 2006年
- 目的:从噬菌体呈现12肽库中筛选与流感病毒神经氨酸酶特异性结合的肽。方法:以甲三型流感病毒裂解疫苗原液为靶分子,经过3轮生物淘选,从噬菌体随机肽库中筛选与之结合的噬菌体。用ELISA方法鉴定噬菌体克隆与靶分子的结合力,用荧光方法测定噬菌体克隆对流感病毒A/Sydney/5/97(H3N2)神经氨酸酶的抑制活性。对筛选到的阳性克隆进行DNA序列测定并推导出相应的氨基酸序列。结果:经过3轮筛选后,42个噬菌体克隆与靶分子有高度亲和力,23个噬菌体克隆对流感病毒A/Sydney/5/97(H3N2)神经氨酸酶有抑制活性。对27个噬菌体克隆的测序结果表明,分别有10个和2个克隆的序列是一致的,其氨基酸序列分别为KSLSRHDHIHHH和WPRHHHSASVQT。结论:通过噬菌体肽库筛选到抑制流感病毒神经氨酸酶的12肽,为进一步研究对流感病毒神经氨酸酶有抑制活性的分子药物奠定了基础。
- 郑丽舒段招军彭夫望高寒春李启明侯云德
- 关键词：流感病毒神经氨酸酶
- 重组人干扰素Epsilon的表达纯化及生物学性质研究被引量：9
- 2005年
- 目的表达纯化一种新型重组人干扰素Epsilon(rhIFNε155ser),并对它的生物学特性进行初步研究。方法人工合成rhIFNε155ser的全基因序列,并按照大肠埃希菌密码子嗜性作适当改造,然后构建到原核表达载体pBV220,在大肠埃希菌DH5α中表达。将表达的包涵体蛋白纯化复性后,对最终产物的抗病毒活性、细胞生长抑制活性和NK细胞刺激活性进行鉴定。同时,利用芯片技术,从基因的水平对rhIFNε155ser的生物机制进行初步的了解。结果rhIFNε155ser以包涵体的形式表达,经纯化蛋白纯度可达95%。复性后rhIFNε155ser在WISH抗VSV系统中的抗病毒活性可达6×105IU/mg。在100～1000pg/ml下rhIFNε155ser具有剂量依赖性的抗增殖活性,而NK细胞刺激活性无剂量依赖性。基因芯片扫描发现,22278个位点中,有283个基因显著上调,另外1894个显著下降。结论成功地表达了rhIFNε155ser,发现此IFN具有一定的抗病毒、抗增殖和NK细胞刺激活性。芯片技术可进一步拓展对IFN的功能研究。
- 彭夫望高寒春谢志平张辉李启明段招军侯云德
- 关键词：重组人干扰素EPSILON表达纯化生物学性质基因序列基因芯片
- 环介导逆转录等温扩增技术(RT－LAMP)检测HCV和H5N1等RNA病毒基因
- 本发明属于生物技术应用领域，涉及人类医学及兽医，包括RNA病毒在各种生物制品、献血员、病人血液标本等的监测。具体是应用环介导逆转录等温扩增技术(RT－LAMP)，通过计算机软件分析RNA病毒保守和病毒特异性基因序列，对每...
- 马学军李启明侯云德
- 文献传递
- 环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)在丙型肝炎病毒基因检测中的应用被引量：66
- 2006年
- 该文介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增基因检测技术，该技术分别使用特异对应于靶序列中8个基因区段的3对特殊引物，并在反转录酶和Bst-DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应，整个检测反应只需1～2h。利用这种技术成功检测了丙型肝炎病毒基因，对60份经Real-timePCR或RT—-PCR验证阳性的血清样品检测，阳性符合率为98％。同时，对扩增终产物进一步进行酶切分析，并与HIV、HBV和不同亚型流感病毒RNA进行交叉反应和特异性测试，均与预期结果吻合。将Real-timePCR定量后的RNA系列稀释后对检测方法的灵敏度进行了测试。结果显示，该技术的检测灵敏度在理论上可达到10个拷贝的RNA分子。以上结果证明，RT-LAMP扩增技术是一种检测程序简单、灵敏度和特异性较高的基因检测手段，在丙型肝炎病毒的快速检测方面具有一定的开发潜力。
- 李启明马学军周蕊彭夫望高寒春匡治州侯云德
- 关键词：丙型肝炎病毒
- 利用寡核苷酸微阵列技术对HBV、HCV、HIV、HAV、GBV-C/HGV和B19进行同时监测的初步研究
- 2006年
- 探讨研制能同时检测HBV、HCV、HIV、HAV、GBV-C/HGV和B19的微阵列监控芯片。根据病毒公开发表序列,序列比对,得出保守区域,设计病毒的特异性检测探针,同时设置阴性、阳性参照探针,制备监控微阵列。利用随机引物PCR方法标记样品中的病毒靶序列,标记产物与微阵列上的探针杂交,清洗、扫描后进行结果分析。通过对质粒或模式分子的检测以及经HBV、HCV、HIV临床标本的验证,发现该微阵列监控芯片具有良好的特异性。其对质粒的检测灵敏度可达102病毒拷贝数,对临床标本的检测灵敏度可达103病毒拷贝数。此外,该微阵列监控芯片可检测出病毒混合感染血清。为微阵列监控芯片应用于此六种血液病毒的检测打下一定的基础。
- 周蕊马学军孙梅生李启明匡治州王征侯云德
- 关键词：寡核苷酸探针微阵列
