李际仙
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国科学院北京基因组研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 组胺H3受体激活剂高通量筛选细胞模型的研究被引量：5
- 2008年
- 目的:建立基于报告基因的组胺H3受体(H3R)激活剂的高通量筛选模型,用此模型对收集到的中草药化合物组分进行筛选,以发现新的组胺H3R激活剂。方法将H3R基因质粒(H3R/pCDNA3.1-hygro)与报告基因质粒(3XCRE-LUC)按3∶1的比例共转染入HEK293细胞,建立了稳定的H3R配体的报告基因筛选细胞株。激活剂与细胞表面H3R结合后,激活相应的信号通路,调节Forskolin刺激后的报告基因的表达,通过测定荧光素酶报告基因表达水平的变化,评估激活剂影响H3受体的生物活性。结果通过对筛选条件,如激活剂孵育时间、Forskolin终浓度、化合物溶剂的选择、溶剂DMSO终浓度等的优化,建立了可靠的筛选方法。该模型的Z因子可达到0.5以上,稳定性可保持20代,完全符合高通量筛选需求。利用该细胞模型对多种中草药萃取物进行了筛选,找到了两种对H3R有活性的中药组分。结论建立的细胞模型可以有效的应用于以组胺H3受体为靶点的高通量药物筛选。
- 曹婧张烨彭志刚李际仙王少鹏
- 关键词：报告基因FORSKOLIN高通量筛选
- 高通量筛选瞬时受体势V3通道调节剂细胞模型的建立被引量：2
- 2008年
- 为发现TRPV3调节剂,通过荧光成像分析系统检测钙浓度,建立高通量筛选瞬时受体势V3通道(Transient receptor potential V3,TRPV3)调节剂的细胞模型。将TRPV3表达载体转染人胚肾(HEK-293)细胞,抗生素筛选稳定表达TRPV3的细胞系,选取TRPV3特异性调节剂作用于细胞模型,应用荧光成像分析系统测钙实验检测TRPV3高表达细胞系药理学特征,同时优化实验条件,考察模型的稳定性,并评估应用于96孔板及384孔板进行高通量筛选的可靠性及准确性。获得了高表达TRPV3的HEK-293稳定细胞系,通过TRPV3离子通道调节的钙流信号与TRPV3特异性调节剂成剂量依赖关系,优化得到了最适筛选条件,该模型稳定,灵敏,通过Z因子及Spiking检测,完全符合高通量筛选需求。利用此细胞模型通过检测钙信号可筛选TRPV3调节剂。
- 王少鹏李际仙彭志刚曹婧
- 关键词：高通量筛选细胞模型
- 分别以神经肽Y受体2(NPY2R)和瞬时受体通道V6(TRPV6)为靶点的高通量筛选模型的建立
- 第一部分神经肽Y受体2(NPY2R)高通量药物筛选模型的建立
NPY2R与多种行为和疾病相关，如食欲与进食，水分及钠离子的吸收，癫痫病，血管生成，肿瘤及癌症的发生，周围血管疾病，伤口愈合，抑郁症，酒精，尼古丁及咖啡...
- 李际仙
- 稳定表达“毒性”瞬时受体势A1通道细胞系的建立(英文)
- 2008年
- 瞬时受体势A1(TRPA1)是一种对低温敏感的离子通道,除响应温度外,也可被各种刺激性化合物激活,是许多感觉模型的转导通道.建立TRPA1异源表达系统将为药理分析及功能研究提供很大的便利,但是TRPA1的表达会引发细胞毒性,因此构建TRPA1稳定细胞系一直面临着挑战.在人胚肾细胞(HEK-293)中非调控的表达TRPA1稳定细胞系被成功建立.实验证实,培养至25代以上,该细胞系仍持续表达TRPA1,且细胞的功能检测也进一步验证了该重组TRPA1细胞系的稳定性及特异性.TRPA1-HEK细胞系不但是TRPA1功能性分析的便利工具,而且可应用于高通量药物筛选系统,鉴定TRPA1特异性调节剂.
- 王少鹏马良会李际仙彭志刚曹婧
- 关键词：稳定细胞系毒性
