汪小锋
- 作品数：15 被引量：99H指数：6
- 供职机构：教育部更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程医药卫生更多>>
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶:一种应用前景广阔的生物催化剂被引量：7
- 2009年
- 洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶对有机溶剂(醇)、热、氧化剂、表面活性剂、去污剂、蛋白酶等具有良好的抗性,在有机合成、对映体拆分、非水相催化等领域应用十分广泛。综述了洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的发酵生产、分离纯化、基因克隆与表达、固定化与生物印迹、蛋白质结构解析及应用研究等,并展望了其未来发展方向,以期为该工业酶的研发与广泛应用提供参考。
- 汪小锋贾彬刘涛杨江科闫云君
- 关键词：分离纯化固定化蛋白质结构
- 土壤中产脂肪酶洋葱伯克霍尔德菌的分离与鉴定被引量：3
- 2010年
- 洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)在生物防治、生物降解等农业领域有着广泛的应用,它产生的脂肪酶则在有机合成、精细化工等领域潜力巨大。采用改良的TB-T平板筛选法从土壤中初步筛选出300株洋葱伯克霍尔德菌,然后用脂肪酶活性检测平板对300株菌进行筛选,最终获得6株脂肪酶产量高的菌,通过发酵发现6株菌均有较好的产脂肪酶能力。随后通过16S rDNA比对的方法将6株全部鉴定为B.cepacia。在此基础上,采用HaeⅢ-recA RFLP和基因种特异性PCR对6株菌进行了基因种鉴定,结果表明JWT16、G63YL、WJ158和JWT137属于Burkholderia cenocepacia菌,JWP9属于Burkhold-eria vietnamiensis,JWT267则属于Burkholderia multivorans。
- 贾彬刘文山杨江科汪小锋叶才伟闫云君
- 关键词：洋葱伯克霍尔德菌
- 多拷贝毕赤酵母重组菌表达GCL摇瓶优化和高密度发酵被引量：4
- 2012年
- 目的:构建高效表达白地霉脂肪酶的毕赤酵母重组菌株,并对筛选得到的菌株进行摇瓶发酵条件优化和分批补料高密度发酵工艺研究。方法:将诱导型表达载体pPIC9K-gcl电转化至毕赤酵母GS115。通过橄榄油-罗丹明B平板和摇瓶发酵筛选高脂肪酶活力的重组菌株,运用基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR法确定其拷贝数,并对菌株进行摇瓶发酵条件优化。在此基础上,研究重组菌在3L发酵罐中的高密度发酵工艺。结果:筛选得到一株具有3个白地霉脂肪酶基因拷贝的菌株GS115/pPIC9K-gcl 78#,初始酶活力为220 U/ml。当摇瓶发酵条件为甲醇诱导96 h,每24 h甲醇添加量1%,接种量2%,培养基初始pH 7.0,500 ml摇瓶装液量50 ml,甲醇诱导温度25℃时酶活力达735 U/ml。3L发酵罐高密度发酵176.5 h,酶活力达到3360 U/ml,总蛋白含量达到4.30 g/L,且发酵过程中细胞活性一直保持在96%以上。结论:基因拷贝数与重组菌株的产酶水平呈正相关,摇瓶优化可显著提高重组菌株的产酶能力,为白地霉脂肪酶的工业化生产奠定了技术基础。
- 智晓燕汪小锋孙永川柯锋代敏闫云君
- 关键词：巴斯德毕赤酵母高密度发酵
- 复合酶法制备乌桕梓油生物柴油工艺优化被引量：6
- 2010年
- 采用响应面法对复合酶Novozym435和Lipozyme TLIM催化乌桕梓油制备生物柴油的工艺条件进行了优化。通过SAS 9.0软件分析,获得最优工艺参数为:复合酶加入量Novozym 4352.52%、Lipozyme TLIM1.68%(基于油质量),反应温度40℃,叔丁醇加入量41%(基于油体积),分子筛加入量5.5%(基于油质量),醇油摩尔比5.05∶1。在此条件下,生物柴油的转化率高达98.72%,与回归模型预测的最优条件下生物柴油转化率97.69%非常接近。
- 邹晓霞杨江科刘云徐莉汪小锋闫云君
- 关键词：生物柴油
- 洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)PCL-3产脂肪酶发酵条件研究被引量：10
- 2008年
- 研究了洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)PCL-3发酵产碱性脂肪酶培养条件的优化。采用单因子试验筛选出糊精为最适碳源,蛋白胨和尿素为复合氮源。通过Plackett-Burman设计试验,对影响产酶条件的8个相关因子进行评估并筛选出具有显著效应的3个因子:尿素、接种量以及初始pH值。用最陡爬坡实验逼近显著因子的最大响应区域后,采用响应面分析法,确定尿素、接种量以及初始pH值最优值分别为0.15%,3.05%和8.59。优化后液体发酵培养基中脂肪酶活力提高到48.88U/ml,比初始酶活25.37U/ml提高了1.93倍。10L的发酵罐中,脂肪酶活力在52h达到最大,为47.69U/ml。
- 汪小锋杨江科闫云君
- 关键词：响应面法
- 晶粒尺寸和应变量对高纯铝表面橘皮效应的影响规律
- 2022年
- 为了进一步揭示晶粒尺寸和应变量对金属材料表面橘皮化的影响规律,本文采用MTS810万能试验机、光学显微镜、扫描电镜以及电子背散射衍射技术,并结合宏观形貌和微观组织表征的方法,研究了不同晶粒尺寸和应变量对高纯铝板拉伸变形过程中的表面形貌、显微组织和表面粗糙度演化的影响。结果表明:晶粒尺寸对橘皮缺陷的演化规律有很大影响,且依赖于应变量。当应变量为5%时,尽管从晶粒尺寸为60μm的试样未观察到明显的橘皮缺陷,但随着应变量的增加,表面粗糙度略有增加;而晶粒尺寸为500μm的试样橘皮缺陷比较显著,且随着应变量的增加,橘皮缺陷越来越严重,表面粗糙度增加更为显著。在低应变量下,晶粒尺寸为60μm的试样,表面滑移带较晶粒尺寸为500μm的试样不明显;随应变量的增加,3种试样均有明显的滑移带,并且晶粒尺寸为500μm的试样出现了大量微裂纹。表面粗糙度与晶粒尺寸呈近似线性的关系,与应变量之间则满足非线性关系。粗晶和高应变共同导致了表面橘皮效应,且二者耦合的影响是单个因素影响的3倍以上。
- 王刚汪小锋刘先斌刘吉波王永刚
- 关键词：高纯铝晶粒尺寸应变量EBSD
- 洋葱假单胞菌（Pseudomonas cepacia）PCL-3产脂肪酶条件优化及纯化工艺研究
- 洋葱假单胞菌脂肪酶对各种有机溶剂/(醇等/)、热、氧化剂、表面活性剂、去污剂、蛋白酶等均有较好的抗性,是目前在有机合成、洗涤剂添加剂、生物柴油合成中应用得最为广泛的脂肪酶之一。本文以产脂肪酶的洋葱假单胞菌PCL-3为出发...
- 汪小锋
- 关键词：脂肪酶发酵响应面法纯化
- 文献传递
- 基于BP神经网络的洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶发酵软测量建模被引量：2
- 2010年
- 为建立洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)脂肪酶发酵过程的软测量模型,运用BP神经网络对洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的发酵过程进行软测量建模,并利用遗传算法对神经网络的初始权值和阈值进行优化,实现模型加快收敛速度,达到全局最优解效果。该模型能够比较精确地模拟菌体生长、底物消耗以及发酵产酶的过程动态,具有良好的泛化能力,说明BP神经网络结合遗传算法在洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶发酵过程的模拟与预测中是一种高效快速的方法。
- 汪小锋付强申旭光杨江科闫云君
- 关键词：BP神经网络遗传算法发酵
- 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的表面展示及酶学性质被引量：6
- 2012年
- 【目的】构建疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)在毕赤酵母GS115中的细胞表面展示体系,筛选展示成功且酶活力及展示率较高的重组子作为全细胞催化剂,并研究其酶学性质。【方法】克隆TLL基因tll,以酿酒酵母细胞壁蛋白Sed1p为锚定蛋白,构建表面展示载体pPICZαA-TLS。重组载体经SacⅠ线性化后转入毕赤酵母GS115中,经三丁酸甘油酯平板检测及摇甁发酵筛选获得高酶活力的毕赤酵母重组子,采用抗FLAG标签一抗和R-PE荧光素标记的二抗处理细胞后,进行荧光显微镜检测和流式细胞仪分析,并考察全细胞催化剂的最适反应温度和pH、金属离子耐受性等酶学性质。【结果】成功构建TLL毕赤酵母细胞表面展示体系,筛选到1株具有三丁酸甘油酯和橄榄油水解活力的克隆子,经1%的甲醇诱导发酵120 h后,水解橄榄油酶活力达257.8 U/g干细胞。经抗体处理后的重组菌发酵细胞在荧光显微镜下呈现强烈的红色荧光,流式细胞仪分析结果也证实脂肪酶被成功展示在酵母细胞表面,展示率达98.36%。展示的TLL作为全细胞催化剂水解对硝基苯酚丁酸酯(pNPB)的最适温度为30℃,最适pH为8.0,且具备良好的热稳定性和有机溶剂耐受性;K+、Ca2+、Mg2+对其有微弱的激活作用,Mn2+、Ni2+则有微弱的抑制作用,Cu2+的抑制作用较强,而EDTA、SDS、Tween 20对酶活力影响不明显。【结论】首次将TLL脂肪酶成功展示在毕赤酵母细胞表面,获得具有较高水解活力和良好酶学特性的全细胞催化剂,为表面展示TLL脂肪酶的规模化应用奠定了技术基础。
- 代敏纪昌涛汪小锋智晓燕邵化徐莉闫云君
- 关键词：毕赤酵母酶学性质
- 微生物发酵生产脂肪酶的研究进展被引量：45
- 2008年
- 脂肪酶是一种重要的工业用酶,广泛应用于食品、精细化工、医药和能源等领域。脂肪酶最主要的来源是通过微生物发酵生产。综述了脂肪酶种类、高产脂肪酶菌种选育、发酵工艺优化与调控、高密度发酵和发酵工艺放大等方面的研究进展,并展望了脂肪酶发酵生产的研究方向及前景。
- 汪小锋王俊杨江科闫云君
- 关键词：发酵脂肪酶基因工程菌高密度发酵
