熊静
- 作品数：54 被引量：70H指数：5
- 供职机构：集美大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 不同方法提取鳗鲡病原菌DNA模板的差异分析被引量：3
- 2012年
- 利用吸光值、琼脂糖电泳及PCR差异扩增等指标,对酚-氯仿法、水煮法、碱裂解法3种方法制备的鳗鲡病原菌DNA模板进行了差异分析.结果表明:1)不同方法提取的病原菌模板DNA的浓度、纯度及分子质量大小存在差异,但以这3种方法提取的病原菌DNA为模板,均能成功扩增到细菌16S rD-NA和外膜蛋白的保守序列.其中,酚-氯仿提取的模板DNA浓度较低、纯度较高;水煮法和碱裂解法提取的模板DNA浓度较高、纯度较低.2)电泳显示,3种方法获得的模板DNA扩增出的16S rDNA保守序列条带均一,没有显著差异,但在外膜蛋白保守序列的扩增中却因菌种和模板提取方法的不同而存在差异.
- 熊静关瑞章郭松林黄文树关淑芳
- 关键词：碱裂解法外膜蛋白基因
- pH和色谱柱对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果的影响及抗菌活性检测被引量：3
- 2013年
- 为了能够快捷地分离纯化出单一的抗菌肽,实验采用不同pH值(离子交换流动相pH3.0、4.0、5.0;反相液相层析流动相pH 2.0、4.5、7.0)缓冲液,不同色谱柱(离子交换和凝胶过滤层析柱分别与反相液相层析柱)联用对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果进行了比较,并分析了琼脂板扩散法和微孔液体培养法检测抗菌活性的优缺点。结果显示:pH 4.0缓冲液为最佳离子交换流动相,蛋白提取率为16.43%,得到2个洗脱峰;反相液相层析3种pH缓冲液分离效果均不理想,凝胶过滤层析柱与反相液相层析柱联用能明显改善日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果,洗脱峰数量较多,峰形单一且尖锐狭窄,基线平而低。琼脂板扩散法检测抗菌活性操作简单,实验结果直观,但所需蛋白量较多,可用于蛋白粗提物抗菌活性的检测;微孔液体培养法检测抗菌活性灵敏,所需蛋白较少,可用于后期色谱分离纯化蛋白抗菌活性的检测。
- 张东玲关瑞章黄文树熊静徐继松宋宝东
- 关键词：日本鳗鲡抗菌肽PH色谱柱抗菌活性
- 多重实时荧光定量PCR技术快速检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌
- 多重实时荧光定量PCR技术快速检测鳗鲡肠毒性及溶血性气单胞菌，属于生物技术领域。设计基于TaqMan探针的qPCR引物，如序列表SEQ ID NO.1～12所示。提供基于Taqman探针的双重(act+ast,alt+h...
- 熊静黄文树黄艺馨邓睿李林益
- 一种日本鳗鲡IFNc1基因启动子及其应用
- 本发明涉及日本鳗鲡IFNc1基因启动子及其应用。本发明日本鳗鲡IFNc1基因启动子具有较强的启动子活性，可为研究鱼类IFNc1基因的表达调控机制的研究提供良好的实验系统，同时也可以利用该启动子构建表达载体后高效表达外源基...
- 黄文树相超黄贝李东利熊静焦志远
- 石榴皮有效抑菌部位萃取工艺的比较分析
- 2016年
- [目的]优化石榴皮有效抑菌部位的萃取工艺。[方法]采用超声辅助萃取法,选取纯水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷6种溶剂萃取石榴皮抑菌药液。通过琼脂平板法测定石榴皮抑菌药液对9株水产常见致病菌的最低抑菌浓度,正交试验方法考察溶剂浓度、料液比、温度、超声时间对抑菌率的影响,进一步优化石榴皮抑菌药液的萃取工艺。[结果]比较不同溶剂抑菌效果,表明乙醇为最佳萃取溶剂,其萃取部位平均最低抑菌浓度为0.517 mg/m L。在乙醇体积分数70%、料液比1∶20 g/m L、萃取温度60℃、超声时间40 min的最佳萃取工艺条件下,萃取药液平均最低抑菌浓度为0.442 mg/m L。[结论]研究可为石榴皮在水产养殖细菌性疾病防控中的应用和石榴皮抗菌剂的研制及工业化生产提供理论依据。
- 张坤林茂李忠琴刘宏伟熊静赖晓健
- 关键词：石榴皮超声辅助萃取抑菌正交试验
- 7株鳗鲡致病性气单胞菌毒力基因\胞外产物及其活性的比较
- 为探讨致病性气单胞菌的致病力与其胞外产物和毒力因子之间的关系,联合利用PCR、SDS-PAGE、平板扩散及分子进化等方法对7株鳗源气单胞菌的胞外毒力因子进行比较研究.结果显示,该7株致病菌所含有的胞外毒力基因(hly、a...
- 熊静赖晓健余钦郭松林徐继松黄文树
- 关键词：鳗鲡致病性气单胞菌毒力基因胞外产物生物活性
- 嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡体内的免疫组织化学定位与病理观察被引量：14
- 2011年
- 采用从鳗鲡分离的嗜水气单胞菌进行人工感染试验,以探讨感染后不同时期嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡肝脏、肾脏和肠道内的定位和由此引起的组织病理学变化。将细菌分2次对鳗鲡进行肌肉注射。第1次采用每克体质量10^3-10^7cfu的不同剂量注射以确定该菌的半数致死量,结果表明其半数致死量为5×10^4cfu/g。第2次以每尾鱼1×10^7cfu的剂量注射欧洲鳗鲡,此后分别在注射后6、24、48 h采集鳗鲡的肝脏、肾脏、肠道进行组织病理学和免疫组织化学定位研究。结果表明：3个时期的临床症状和病理变化存在一定的差别,鳗鲡早期无明显病理变化,而后期主要表现为败血症症状;鳗鲡肾脏组织的病理变化较其他脏器明显,主要表现为肾小管上皮细胞肿胀和肾小球坏死脱落;鳗鲡肝脏则主要表现为严重充血,肠道偶见肠粘膜脱落。免疫组织化学定位结果表明,感染细菌主要分布在鳗鲡肾脏内,肝脏和肠道也有感染细菌分布。
- 郭松林冯建军熊静关瑞章
- 关键词：欧洲鳗鲡嗜水气单胞菌病理变化免疫组织化学定位
- 闭管可视化鳗源嗜水气单胞菌环介导等温扩增检测方法
- 闭管可视化鳗源嗜水气单胞菌环介导等温扩增检测方法，涉及水生动物病原微生物检测。鳗鲡基因组提取；提取致病菌基因组；制备阳性对照；阴性对照制备；样品检测及结果判定。分别以嗜水气单胞菌管家基因gyrB和致病因子hlyA保守序列...
- 熊静黄文树徐继松赖晓健刘爱原
- 一种日本鳗鲡趋化因子CXCL_F2重组蛋白及其编码基因与应用
- 本发明涉及一种日本鳗鲡趋化因子CXCL_F2重组蛋白及其编码基因与应用。本发明日本鳗鲡趋化因子CXCL_F2重组蛋白具有生物学活性，能够抑制炎症反应发生，同时重组蛋白无细胞毒性，可用于制备消炎药物或免疫佐剂。本发明还涉及...
- 黄文树 胡一凡熊静 李东利 黄贝梁英
- 检测实验动物金黄色葡萄球菌的gyrB引物组合
- 检测实验动物金黄色葡萄球菌的gyrB引物组合，属于实验动物病原微生物检测技术领域。所述引物组合包括外引物F3、B3，内引物FIP、BIP，反应体系；反应体系包括FIP、BIP、F3、B3、2×反应缓冲液、Bst DNA聚...
- 熊静黄文树赖晓健徐继松
