王海
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院上海市肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EGFRvⅢ特异性单链抗体的制备及其靶向性能被引量：2
- 2011年
- 目的:应用噬菌体展示技术筛选出能与EGFRvⅢ特异性结合的单链抗体(single-chain Fv,scFv),并研究其靶向性能。方法:构建EGFRvⅢ特异性scFv噬菌体库,ELISA筛选阳性克隆,阳性EGFRvⅢ-scFv质粒重新克隆入pCANTAB-Throm-bin-His载体,转化E.coli HB2151,IPTG诱导可溶性EGFRvⅢ-scFv表达。间接免疫荧光及裸鼠活体成像技术鉴定EGFRvⅢ-scFv与EGFRvⅢ的特异性结合。结果:成功构建了EGFRvⅢ-scFv噬菌体库,ELISA筛选得到16个EGFRvⅢ-scFv克隆,取一克隆命名为EGFRvⅢ-scFv-2A1。EGFRvⅢ-scFv-2A1质粒重新克隆入pCANTAB-Thrombin-His载体,成功表达可溶性EGFRvⅢ-scFv-2A1。EGFRvⅢ-scFv-2A1在体外可特异性结合HuH7-EGFRvⅢ肝癌细胞,但不结合HuH7-EGFR和HuH7肝癌细胞;荧光标记的EGFRvⅢ-scFv-2A1裸鼠体内可特异性结合U87MG-EGFRvⅢ胶质瘤细胞移植瘤,而不结合U87MG细胞移植瘤。结论:成功制备的EGFRvⅢ-scFv-2A1可特异性靶向结合EGFRvⅢ,在肿瘤的诊断和靶向治疗中具有潜在应用价值。
- 张庆丽石必枝蒋华周敏王海孔娟谢海龙
- 关键词：SCFV脑胶质瘤移植瘤靶向治疗活体成像
- 一种靶向性阳离子多肽载体的表达纯化
- 2007年
- 目的:原核表达靶向性阳离子多肽(KH)20-EGF,并对其DNA包装能力进行检验。方法:构建pET28a-(KH)20-EGF原核表达载体。进行酶切和测序鉴定。转化BL21(DE3)后,经过IPTG诱导表达和NTA树脂纯化得到粗提蛋白产物,SDS-PAGE和Western blot鉴定后,将蛋白与质粒DNA混合,用于凝胶阻滞实验分析。结果:重组(KH)20-EGF的产量约为300μg/L。SDS-PAGE和Western blot表明该蛋白的凝胶迁移有些滞后;凝胶阻滞试验发现(KH)20-EGF对质粒DNA的迁移有阻滞作用。结论:成功表达非病毒载体(KH)-EGF并确认其DNA包装能力。
- 王海王华茂李锦军石必枝李宗海
- 关键词：基因治疗原核表达纯化
