胡嘉弟
- 作品数:5 被引量:18H指数:2
- 供职机构:马里兰大学更多>>
- 发文基金:国际科技合作与交流专项项目中日政府间专项方式技术合作项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 细胞死亡调节因子GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中的表达及意义被引量:2
- 2009年
- 目的:探讨细胞死亡调节因子(GRIM-19)蛋白在肾脏透明细胞癌组织和正常肾组织中的表达及意义,阐明GRIM-19在肾脏透明细胞癌发生发展中的抑癌作用。方法:采用免疫组织化学染色方法检测21例肾脏透明细胞癌组织和7例正常肾组织GRIM-19蛋白的表达;RT-PCR方法检测4例正常肾组织和8例肾脏透明细胞癌组织中GRIM-19基因mRNA的表达。结果:免疫组化检测GRIM-19蛋白在肾脏透明细胞癌组织中阳性表达率为52.3%(11/21),在正常肾脏组织的阳性表达率为100%(7/7),两者比较差异有显著性(P<0.05)。病理分级Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的肾脏透明癌组织中的表达率分别为100%(6/6)、40%(4/10)和20%(1/5),三种病理分级GRIM-19表达率比较差异有显著性(P<0.01)。RT-PCR检测GRIM-19基因在肾脏透明细胞癌组织中阳性表达率为62.5%(5/8),在正常肾脏组织的阳性表达率为100%(4/4),两者比较差异有显著性(P<0.01)。结论:GRIM-19在肾脏透明细胞癌基因和蛋白水平表达明显下降,并与其病理分级存在明显的关联性,提示GRIM-19蛋白可能在肾脏透明细胞癌发生发展中发挥抑癌作用。
- 汲坤王波李馨于浩张灵胡嘉弟赵雪俭李扬
- 关键词:免疫组织化学逆转录聚合酶链反应
- 共表达野生型p53及siRNA-mdm2质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达被引量:1
- 2010年
- 目的:构建可同时表达野生型p53(wt-p53)及siRNA-mdm2的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法:利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53、siRNA-mdm2、p53/siRNA-mdm2和siRNA-scramble重组质粒。脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞,半定量RT-PCR和Western blotting检测共表达质粒对mdm2和p53表达的影响,MTT法检测共表达质粒转染后PC-3细胞增殖活性。结果:克隆出wt-p53全长及带有U6启动子的siRNA-mdm2序列,经DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建上述真核重组表达载体;转染细胞48h后可见siRNA-mdm2组GFP明显表达;RT-PCR和Western blotting检测显示转染共表达质粒后PC-3细胞中wt-p53表达增强,mdm2表达下调;MTT检测显示共表达质粒转染后PC-3细胞生长抑制率为40.4%。结论:成功构建p53与siRNA-mdm2共表达质粒,共表达质粒可抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖。
- 邵月婷刘亚男邵晨汲坤李晓洁李峰张灵赵丹李扬徐德启胡嘉弟赵雪俭
- 关键词:MDM2基因质粒
- ATRA联合IFN-α对PC-3细胞株的生长抑制作用以及对GRIM-19和STAT3基因表达的影响被引量:7
- 2006年
- 目的:研究ATRA联合IFN-α对人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株的生长抑制作用及对凋亡相关基因GRIM-19和原癌基因STAT3表达的影响。方法:采用MTT比色法筛选ATRA和IFN-α联合应用的最佳时间和剂量;相差显微镜及吖啶橙染色观察其对PC-3细胞的促凋亡作用;DNA ladder提取试剂盒检测用药后细胞凋亡;RT-PCR方法观察用药后PC-3细胞GRIM-19 mRNA的表达;Western blot分别检测GRIM-19、STAT3的蛋白表达。结果:ATRA 1μmol/L联合IFN-α1 000 U/mL作用72 h对PC-3细胞有显著的增殖抑制作用,与溶媒对照组、ATRA或IFN-α单独应用组比较,差异显著(P<0.05)。形态学观察两药合用后PC-3细胞呈现典型的凋亡征象。DNA电泳图谱在ATRA和IFN-α两药合用组可见较AT-RA单独应用组更为明显的DNA ladder,IFN-α单独用药组及对照组没有出现DNA降解。RT-PCR结果表明,ATRA和IFN-α两药合用GRIM-19 mRNA表达增强,与对照组和ATRA、IFN-α组比较,差异显著(P<0.05)。Western blot结果显示,两药合用组GRIM-19蛋白表达增强,STAT3蛋白表达减弱,与对照组、ATRA、IFN-α组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:ATRA和IFN-α联合应用可抑制PC-3细胞的增殖并诱导凋亡,其机制之一可能是通过上调GRIM-19基因表达,进而下调原癌基因STAT3表达实现的。
- 邵月婷高丽芳孙连坤赵丹计国义胡嘉弟李扬赵雪俭
- 关键词:基因表达PC-3细胞
- 人参皂苷Rh_2诱导PC-3M细胞凋亡及其对新基因GRIM-19表达的影响被引量:10
- 2006年
- 目的:研究人参单体皂苷Rh2对激素非依赖性人前列腺癌细胞(PC-3M细胞株)的致凋亡作用及其对新基因GRIM-19表达的影响。方法:实验分为Rh2高剂量组(40 mg.L-1)、Rh2中剂量组(30 mg.L-1)、Rh2低剂量组(15 mg.L-1)及对照组(未加药组)。分别作用于PC-3M细胞24 h,吖啶橙染色观察其对PC-3M细胞的促凋亡作用;RT-PCR和Western blotting方法分别检测Rh2对PC-3M细胞GRIM-19 mRNA及其蛋白表达的影响。结果:Rh2高、中、低剂量组作用于PC-3M细胞24h吖啶橙染色均呈阳性结果。Rh2低剂量组出现典型“出芽”现象,细胞中出现致密鲜亮橙色斑点。对照组细胞呈均匀绿色;RT-PCR结果显示,GRIM-19 mRNA随Rh2浓度的增加表达逐渐增强,Rh2中、低剂量组与对照组比较差异具有显著性(P<0.05),Rh2高剂量组GRIM-19 mRNA表达与对照组比较差异具有高度显著性(P<0.01)。Western blotting结果与RT-PCR结果相一致,GRIM-19蛋白随Rh2浓度的增加其表达逐渐增强,Rh2中低剂量组与对照组比较差异具有显著性(P<0.05),Rh2高剂量组GRIM-19蛋白的表达与对照组比较差异具有高度显著性(P<0.01)。结论:Rh2诱导PC-3M细胞凋亡与上调GRIM-19基因和蛋白表达有关,其表达强度呈剂量依赖性。
- 邵月婷李峰高丽芳孙连坤胡嘉弟李扬赵雪俭
- 关键词:细胞凋亡人参皂苷GRIM-19
- GRIM-19基因的克隆及其对小鼠前列腺癌细胞株的促凋亡作用被引量:1
- 2008年
- 目的构建GRIM-19基因真核表达质粒,探讨GRIM-19基因转染对小鼠前列腺癌rm-1细胞的促凋亡作用。方法采用RT-PCR及重组DNA技术构建pcDNA-GRIM-19真核表达质粒,体外进行基因转染。形态学观察,DNAladder检测转染后rm-1细胞凋亡,RT-PCR方法检测rm-1细胞caspase-3活性。结果扩增出GRIM-19cDNA全长,测序结果与GenBank记载基本一致。转染rm-1细胞48h后证明其能在真核细胞表达,形态学及共聚焦显微镜观察到pcDNA3.1-GRIM-19重组质粒组出现明显的细胞凋亡,并出现典型的DNAladder。转染pcDNA3.1-GRIM-19重组质粒组caspase-3表达强度较对照组及空质粒组明显上调(P<0.05)。结论成功克隆并构建鼠GRIM-19基因真核表达载体pcDNA3.1-GRIM-19,该载体可诱导鼠rm-1细胞凋亡。其凋亡机制与caspase-3酶活性有关。
- 邵月婷张灵汲坤刘亚男李扬胡嘉弟赵雪俭
- 关键词:克隆真核表达载体转染凋亡